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微生物酶及其在植物病害生物防治中的作用 被引量:6
1
作者 辛雅芬 刘晓光 +1 位作者 朱俊华 高克祥 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第7期3059-3062,共4页
介绍了生防菌产生的细胞壁降解酶,如几丁质酶、葡聚糖酶和蛋白酶及其生防作用机制,不同细胞壁降解酶之间以及与抗生素等次生代谢产物之间的协同抑菌作用,以及细胞壁降解酶在植物病害生防中的潜在应用。
关键词 细胞壁降解酶 生物防治 协同作用
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中国菊科植物上链格孢属真菌的种 被引量:11
2
作者 张天宇 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第4期320-324,共5页
报道链格孢属 8个种 ,并附描述和线条图。它们是 :胜红蓟链格孢、红花链格孢、向日葵链格孢、白花菊链格孢、长极链格孢、苦苣菜链格孢。
关键词 品种 中国 菊科植物 链格孢属真菌
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基于secY基因对山东临沂枣疯病植原体的分子鉴定 被引量:4
3
作者 陈妮 公娇芬 +2 位作者 陈小飞 景茂峰 竺晓平 《山东农业科学》 2011年第10期4-7,共4页
利用FD9f/r引物对采自山东临沂的枣疯病样品进行secY基因的PCR扩增,并进行了序列测定,结果表明,该特异片段大小为1 421 bp。对获得的序列与NCBI数据库中相关植原体序列进行同源性分析、构建系统进化树和模拟RFLP分析,结果显示山东临沂... 利用FD9f/r引物对采自山东临沂的枣疯病样品进行secY基因的PCR扩增,并进行了序列测定,结果表明,该特异片段大小为1 421 bp。对获得的序列与NCBI数据库中相关植原体序列进行同源性分析、构建系统进化树和模拟RFLP分析,结果显示山东临沂枣疯病植原体属于secYⅤ-C亚组,与secYⅤ-B亚组的樱桃致死黄化株系(CLY5)和secYⅤ-N亚组的桃树致死黄化印度分离株系(PY-IN)的亲缘关系最近,在亚组水平上进一步明确了山东临沂枣疯病植原体的分类地位。 展开更多
关键词 枣疯病 植原体 secY基因
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山东省西瓜细菌性果斑病的病原菌鉴定 被引量:3
4
作者 张悦丽 齐军山 +4 位作者 张博 李林 徐作珽 郑继法 李长松 《山东农业科学》 2014年第3期83-85,共3页
近年来,在山东省临沭县、昌乐县、章丘县等地西瓜育苗基地的西瓜苗上发现了一种新病害——西瓜细菌性果斑病。从病果和病叶片上分离到15个细菌菌株,选取8个菌株进行致病性测定,结果表明,该8个菌株均能侵染西瓜,发病症状和自然发病症状... 近年来,在山东省临沭县、昌乐县、章丘县等地西瓜育苗基地的西瓜苗上发现了一种新病害——西瓜细菌性果斑病。从病果和病叶片上分离到15个细菌菌株,选取8个菌株进行致病性测定,结果表明,该8个菌株均能侵染西瓜,发病症状和自然发病症状完全一致;从接种发病的病果上可重新分离到相同的细菌。对该8个菌株菌体形态、染色反应、培养性状及其生理生化特性等项目进行观察测定,确认供试菌株为燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.citrulli Willems et al.,1992)。 展开更多
关键词 西瓜 细菌性果斑病 病原鉴定
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山东桑萎缩植原体secY基因序列分析 被引量:1
5
作者 公娇芬 陈妮 +2 位作者 陈小飞 景茂峰 竺晓平 《山东农业科学》 2011年第11期5-8,共4页
对采自山东宁阳的表现萎缩症状的桑树植株总DNA进行secY基因PCR扩增,得到约1.4 kb的特异片段,将该片段克隆后进行序列测定,结果表明,该片段长1 361 bp,包含secY基因1 242 bp,编码414个氨基酸。通过构建系统进化树、同源性比对及利用9种... 对采自山东宁阳的表现萎缩症状的桑树植株总DNA进行secY基因PCR扩增,得到约1.4 kb的特异片段,将该片段克隆后进行序列测定,结果表明,该片段长1 361 bp,包含secY基因1 242 bp,编码414个氨基酸。通过构建系统进化树、同源性比对及利用9种限制性内切酶进行模拟RFLP分析,初步确定该分离物属于secYⅠ-B亚组,在亚组水平上进一步明确了桑萎缩植原体的分类地位。 展开更多
关键词 桑萎缩植原体 secY基因 序列分析
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山东小麦黄花叶病毒的分子检测与鉴定 被引量:5
6
作者 丛倩倩 许斐斐 +1 位作者 李向东 张广民 《山东农业科学》 2012年第11期8-11,共4页
利用RT-PCR对2012年山东10个地区送检的105个小麦样品进行了检测,从泰安、临沂、枣庄3个地区的样品中检测到了小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)。这3个地区WYMV分离物CP基因的核苷酸一致率为97.6%~98.3%,氨基酸一致率为... 利用RT-PCR对2012年山东10个地区送检的105个小麦样品进行了检测,从泰安、临沂、枣庄3个地区的样品中检测到了小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)。这3个地区WYMV分离物CP基因的核苷酸一致率为97.6%~98.3%,氨基酸一致率为98.3%~99.0%。在利用CP基因核苷酸序列构建的系统进化树中,这3个分离物均与WYMV分离物聚类到一起,其中枣庄分离物和河南分离物(FR828007)亲缘关系更近。 展开更多
关键词 小麦黄花叶病毒 CP基因 系统进化分析
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禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)原生质体制备与再生的研究 被引量:2
7
作者 张德珍 陈晓霞 +1 位作者 高先悦 于金凤 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期79-85,共7页
禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)是引起我国小麦纹枯病的主要致病菌。为了建立高效稳定的禾谷丝核菌遗传转化体系,本试验比较研究了不同细胞壁降解酶、酶液浓度、酶处理温度和时间等因素对禾谷丝核菌原生质体制备的影响,利用正交设计... 禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)是引起我国小麦纹枯病的主要致病菌。为了建立高效稳定的禾谷丝核菌遗传转化体系,本试验比较研究了不同细胞壁降解酶、酶液浓度、酶处理温度和时间等因素对禾谷丝核菌原生质体制备的影响,利用正交设计试验优化了原生质体再生条件。结果表明,液体培养6d的菌丝,采用15mg/mL溶壁酶+10mg/mL蜗牛酶组成的混合酶液,30℃下酶解4h,可以获得较高的原生质体释放量,可达到3.0×106个/mL;禾谷丝核菌原生质体再生的最佳条件是以SuTC缓冲液作为渗透压稳定剂悬浮原生质体,采用单层混菌法接种于TB3再生培养基,原生质体再生率可达到58.6%。禾谷丝核菌原生质体制备和原生质体再生条件的优化,为深入研究禾谷丝核菌生长发育的分子遗传学基础和进一步探索小麦纹枯病的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 禾谷丝核菌 原生质体 制备 再生
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黄瓜绿斑驳花叶病毒外壳蛋白基因原核表达及抗血清制备 被引量:3
8
作者 刘锦 李亦晴 +3 位作者 黄显德 房乐 李向东 田延平 《山东农业科学》 2017年第5期10-13,共4页
将黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV上获得pEHISTEV-CGMMV-CP,转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,表达出分子量为19.5 kD的CGMMV CP融合蛋白。... 将黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV上获得pEHISTEV-CGMMV-CP,转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,表达出分子量为19.5 kD的CGMMV CP融合蛋白。切胶回收诱导表达的CGMMV CP免疫家兔,制备抗血清。Western Blotting检测发现,制备的抗血清能与CGMMV CP发生特异性免疫反应,与同属的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)无反应。琼脂双扩散试验测定,制备抗血清的效价为1∶16,ELISA测定效价为1∶1024。该血清特异性强、效价高,可用于CGMMV的检测。 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清
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烟草青枯病菌有效药剂的筛选 被引量:8
9
作者 毕涛 王晓强 +5 位作者 李向东 杨永花 魏代福 宗浩 苏建东 杨举田 《山东农业科学》 2015年第11期85-88,共4页
采用纸碟片法测定了13种药剂对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)的抑制效果。结果表明,3%四霉素水剂、72%硫酸链霉素可溶性粉剂、80%乙蒜素乳油、80%福美双水分散粒剂、3%中生菌素可湿性粉剂和75%百菌清·腈菌唑可湿性粉剂6种... 采用纸碟片法测定了13种药剂对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)的抑制效果。结果表明,3%四霉素水剂、72%硫酸链霉素可溶性粉剂、80%乙蒜素乳油、80%福美双水分散粒剂、3%中生菌素可湿性粉剂和75%百菌清·腈菌唑可湿性粉剂6种药剂能有效抑制烟草青枯病菌的生长,其中3%四霉素水剂抑菌效果最好,抑菌圈直径为19.10 mm;6种药剂抑菌圈直径随浓度增加而增大;复配药剂中,3%四霉素水剂+72%硫酸链霉素可溶性粉剂、3%四霉素水剂+3%中生菌素可湿性粉剂、3%四霉素水剂+80%福美双水分散粒剂按1∶1混合抑菌效果最好,抑菌圈直径分别为19.20、18.33、17.73 mm,均优于单一药剂效果。 展开更多
关键词 烟草青枯病菌 药剂筛选 纸碟片法
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烟草青枯病菌生防菌的筛选和鉴定 被引量:4
10
作者 毕涛 刘群 +5 位作者 王晓强 李向东 陈晓红 温亮 苏建东 杨举田 《山东农业科学》 2014年第11期68-71,共4页
采用纸碟片法筛选到4株对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)有抑菌作用的生防菌C2c、C1a、Tsb和Ch1b,抑菌圈直径分别为51.50、25.95、24.40 mm和20.05 mm。通过16S r DNA序列分析,C2c、C1a和Tsb为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus poly... 采用纸碟片法筛选到4株对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)有抑菌作用的生防菌C2c、C1a、Tsb和Ch1b,抑菌圈直径分别为51.50、25.95、24.40 mm和20.05 mm。通过16S r DNA序列分析,C2c、C1a和Tsb为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),Ch1b为成团泛菌(Pantoea agglomerans)。这4株生防菌对烟草赤星病菌(Alternaria alternate)、烟草根黑腐病菌(Thielaviopsis basicola)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、苹果霉心病菌(Trichothecium roseum)等病原真菌也有较好的抑制作用。 展开更多
关键词 烟草青枯病菌 生防菌 纸碟片法
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根际细菌与壳聚糖组合的生物防治潜能 被引量:1
11
作者 秦乃花 刘晓光 +3 位作者 高克祥 孟庆果 李惠 庞延东 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第13期5503-5504,5506,共3页
以植物根际促生细菌HRO-C48为供试菌株,在温室条件下测定壳聚糖对番茄的促生作用以及HRO-C48与壳聚糖组合对该菌株生防潜能的影响,包括对番茄灰霉病的诱导抗病作用、对黄瓜猝倒病的生物防治效果。结果表明:壳聚糖对番茄的根系发育有明... 以植物根际促生细菌HRO-C48为供试菌株,在温室条件下测定壳聚糖对番茄的促生作用以及HRO-C48与壳聚糖组合对该菌株生防潜能的影响,包括对番茄灰霉病的诱导抗病作用、对黄瓜猝倒病的生物防治效果。结果表明:壳聚糖对番茄的根系发育有明显促进作用;HRO-C48与壳聚糖组合后,具有明显的增效作用。诱导番茄对灰霉病的抗性水平有显著提高,同时也增强了对黄瓜猝倒病的生物防治效率。 展开更多
关键词 SERRATIA plymugdca 壳聚糖 植物根际促生菌 生物防治 诱导系统抗病性
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应用real-time PCR定量检测土壤中小麦纹枯病菌方法的建立 被引量:4
12
作者 徐娜娜 李鹏昌 于金凤 《山东农业科学》 2014年第3期106-109,共4页
根据小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis AG-D融合群ITS区的DNA序列设计特异性引物对WKF-8/WKR-8,对引物的特异性和灵敏性进行检测,建立并优化基于 SYBR GreenⅠ荧光染料法的 real -time PCR反应体系,绘制标准曲线。检测范围在1.0... 根据小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis AG-D融合群ITS区的DNA序列设计特异性引物对WKF-8/WKR-8,对引物的特异性和灵敏性进行检测,建立并优化基于 SYBR GreenⅠ荧光染料法的 real -time PCR反应体系,绘制标准曲线。检测范围在1.0×10-3~10 ng/μl之间有良好的线性关系,相关系数R2为0.995,扩增效率为99.7%,灵敏度比常规PCR方法高100倍。结果表明,该方法具有快速、特异性强、敏感度高等特点。 展开更多
关键词 小麦纹枯病菌 SYBR GreenⅠ荧光染色法
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不同来源辣椒疫霉菌的遗传多样性分析 被引量:1
13
作者 孙文秀 张修国 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第16期6695-6697,共3页
[目的]探索来自辣椒寄主和土壤的辣椒疫霉的遗传多样性。[方法]通过利用12个10碱基随机引物对来自我国4个不同地理区域的22个辣椒疫霉菌株的亲缘关系进行RAPD分析。[结果]受试22个菌株共产生101条谱带,其中多态性为99条,占98.02%,说明... [目的]探索来自辣椒寄主和土壤的辣椒疫霉的遗传多样性。[方法]通过利用12个10碱基随机引物对来自我国4个不同地理区域的22个辣椒疫霉菌株的亲缘关系进行RAPD分析。[结果]受试22个菌株共产生101条谱带,其中多态性为99条,占98.02%,说明受试辣椒疫霉菌具有丰富的遗传多样性。根据引物扩增的DNA指纹图谱,运用UPGMA分析法,以遗传相似系数0.5为阈值,将供试22个菌株划分为3个遗传聚类组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)。RAPD标记技术分析表明,来辣椒寄主和土壤的菌株的全基因组DNA扩增图谱差异很大。[结论]供试菌株具有丰富的遗传多样性,来自不同遗传背景的菌株差异显著,聚类组的划分与菌株的来源有一定的相关性。 展开更多
关键词 辣椒疫霉菌 遗传多样性 DNA指纹图谱
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荆条丛枝病植原体的分子检测及鉴定
14
作者 崔廷涛 潘一展 +5 位作者 高瑞 邵云华 李向东 时呈奎 赵文军 朱水芳 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第6期162-165,182,共5页
Chaste tree(Vitex negundo var.heterophylla)witches’-broom was a new disease found in Mountain Taishan and the neighboring region.Phytoplasmal cells could be easily observed in the phloem sieve elements of diseased pl... Chaste tree(Vitex negundo var.heterophylla)witches’-broom was a new disease found in Mountain Taishan and the neighboring region.Phytoplasmal cells could be easily observed in the phloem sieve elements of diseased plants under electron microscope.The 16S rRNA gene of phytoplasma associated with this disease(CTWB)was amplified with nested-PCR with the universal primer pairs R16mF2/R16mR1 and R16F2n/R16R2.An amplified fragment of ca.1.2 kb was sequenced and subjected to identity and phylogenetic analyses.Phytoplasma CTWB shared identities of more than 99.0% with members of Aster yellows group(16SrI)in 16S rRNA genes.It had the highest identity of 99.8% with phytoplasmas associated with Maize bushy stunt(subgroup 16SrI-B),and clustered into a common branch with phytoplasmas of the subgroup in the phylogenetic tree constructed with 16S rRNA genes.These results indicated that CTWB belonged to subgroup B of Candidatus Phytoplasma asteris(16SrI-B). 展开更多
关键词 荆条 植原体 丛枝病 16S RRNA序列 巢式PCR
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中国小麦花叶病毒CP和CRP蛋白的原核表达、抗血清制备及RNA2侵染性克隆构建 被引量:4
15
作者 孔凡惠 脱建波 +5 位作者 魏娇 唐伟 李向东 迟胜起 田延平 于金凤 《山东农业科学》 2015年第8期6-10,共5页
中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原... 中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原核表达载体p EHISTEV,转化大肠杆菌Rosetta。经IPTG诱导,表达出分子量均为19 k D的CP和CRP。将二者从凝胶中切下,乳化后免疫新西兰大耳兔4次,获得了两种蛋白的多克隆抗体。ELISA检测表明,CWMV CP和CRP抗血清的效价分别为1∶4096和1∶2048。Western blot分析证明该抗血清只与感染CWMV的小麦有特异性反应,而与健康或感染小麦黄花叶病毒的小麦无反应。利用含T3启动子的引物通过RT-PCR扩增出CWMV RNA2全长片段,经T/A克隆连接到p MD18-T,获得质粒p MD18-T-CWMV-RNA2。该质粒经XbaⅠ线性化后,利用T3 RNA聚合酶进行体外转录,转录产物摩擦接种本氏烟,15℃培养3天后,利用Western blot可从接种叶片中检测到瞬时表达的CWMV CP蛋白。 展开更多
关键词 中国小麦花叶病毒 衣壳蛋白(CP) 富含半胱氨酸蛋白(CRP) 抗血清制备 侵染性克隆
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黄蓝状菌一种几丁质酶的纯化、性质及抗菌活性 被引量:10
16
作者 陈述 李多川 +2 位作者 刘开启 王自良 杨怀光 《中国森林病虫》 北大核心 2003年第3期6-9,共4页
黄蓝状菌Talaromycesflavus在SMCS液体培养基中置于恒温摇床 (2 0 0r/min ,2 7 5℃ )上培养 13d ,诱导产生大量的几丁质酶。培养滤液经硫酸铵分级沉淀 ,DEAE SepharoseFastFlow阴离子交换层析、Phenyl SepharoseFastFlow疏水层析、Sepha... 黄蓝状菌Talaromycesflavus在SMCS液体培养基中置于恒温摇床 (2 0 0r/min ,2 7 5℃ )上培养 13d ,诱导产生大量的几丁质酶。培养滤液经硫酸铵分级沉淀 ,DEAE SepharoseFastFlow阴离子交换层析、Phenyl SepharoseFastFlow疏水层析、SephacrylS 10 0分子筛层析得到了凝胶电泳(SDS PAGE)谱带单一的几丁质酶 ,其分子量为 4 1kD。其最适反应温度为 5 0℃ ,最适pH值是5。Mn2 +对其有明显的激活作用 ,Cu2 +、Fe2 +对其有强烈的抑制作用。抗菌活性显示 。 展开更多
关键词 黄蓝状菌 几丁质酶 性质
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小麦黄花叶病毒衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备 被引量:1
17
作者 唐伟 程德杰 +3 位作者 魏娇 孔凡惠 李向东 于金凤 《山东农业科学》 2015年第1期88-91,共4页
通过RT-PCR方法扩增获得小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的衣壳蛋白(CP)基因,将其连接原核表达载体p EHISTEV,并将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,可以表达38 k D的融合蛋白。通过切胶回收的方法收集目的蛋... 通过RT-PCR方法扩增获得小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的衣壳蛋白(CP)基因,将其连接原核表达载体p EHISTEV,并将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,可以表达38 k D的融合蛋白。通过切胶回收的方法收集目的蛋白,免疫新西兰长耳兔,制备WYMV CP的多克隆抗体。间接ELISA测定该抗血清效价为1∶2 048,Western blotting分析表明该血清可以与病株中CP发生特异性反应,而与健康植株汁液无反应。该血清为WYMV的检测及CP功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦黄花叶病毒 外壳蛋白 原核表达 抗血清 检测
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一株拮抗放线菌菌株的筛选与鉴定 被引量:2
18
作者 郭春燕 王旭正 +1 位作者 刘少杰 于金凤 《山东农业科学》 2018年第4期43-47,共5页
采用平板对峙法与灰色关联度分析法从小麦和苹果根际土壤中筛选出对小麦纹枯病(Rhizoctonia cerealis)和小麦根腐病(Bipolaris sorokiniana)具有良好拮抗作用的放线菌,并依据菌落形态和培养特征、生理生化特性及16S r DNA序列分析等进... 采用平板对峙法与灰色关联度分析法从小麦和苹果根际土壤中筛选出对小麦纹枯病(Rhizoctonia cerealis)和小麦根腐病(Bipolaris sorokiniana)具有良好拮抗作用的放线菌,并依据菌落形态和培养特征、生理生化特性及16S r DNA序列分析等进行鉴定。结果表明,菌株FX-H-51抑菌效果显著,对不利生长环境有良好的耐受性。形态学与分子鉴定结果表明,菌株FX-H-51为海棠链霉菌(Streptomyces spectabilis)。 展开更多
关键词 放线菌 灰色关联度分析 拮抗活性 海棠链霉菌
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