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家兔皮肤真菌通用引物PCR检测和培养鉴定的比较研究 被引量:3
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作者 崔丽娜 姜文学 +2 位作者 杨丽萍 牛钟相 高淑霞 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期2389-2391,共3页
本研究比较了家兔皮肤真菌通用引物PCR检测方法与培养鉴定方法的敏感性,探讨了通用引物PCR检测方法的特异性及其在皮肤真菌诊断中的意义。根据皮肤真菌特异性rDNA序列设计通用引物,对已知分离株及不同微生物进行特异性检测,应用该引物... 本研究比较了家兔皮肤真菌通用引物PCR检测方法与培养鉴定方法的敏感性,探讨了通用引物PCR检测方法的特异性及其在皮肤真菌诊断中的意义。根据皮肤真菌特异性rDNA序列设计通用引物,对已知分离株及不同微生物进行特异性检测,应用该引物对40份兔患部病料进行PCR检测并克隆测序;同时,采用培养鉴定对40份病料进行表型分析。PCR检测结果显示,家兔四种常见病原性皮肤真菌可扩增出400~500 bp之间的条带,其它微生物和兔体细胞均为阴性,说明该方法具有特异性;33份临床病料检测为阳性,扩增条带均为460 bp,经测序为须癣毛癣菌。培养法的阳性为26份,检测结果与前者一致。与传统的培养鉴定方法相比,本研究建立的通用引物PCR检测方法,操作简便、特异性高,可用于大规模的家兔皮肤真菌病检测和流行病学调查,并具有重要的公共卫生意义。 展开更多
关键词 家兔 皮肤真菌 通用引物 培养鉴定
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克林沙星与5种抗生素对鸡致病性大肠埃希菌体外联合抗菌效果 被引量:2
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作者 崔丽娜 张振杰 +1 位作者 常维山 牛钟相 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期793-796,共4页
目的探讨克林沙星与5种抗生素对鸡致病性大肠埃希菌体外联合抗菌效果。方法采用微量稀释法和棋盘法,测定了克林沙星和甲氧苄啶(TMP)分别与磷霉素钠、头孢拉定、哌拉西林、痢菌净和多黏菌素5种抗菌药物的联合用药对鸡致病性大肠埃希菌和... 目的探讨克林沙星与5种抗生素对鸡致病性大肠埃希菌体外联合抗菌效果。方法采用微量稀释法和棋盘法,测定了克林沙星和甲氧苄啶(TMP)分别与磷霉素钠、头孢拉定、哌拉西林、痢菌净和多黏菌素5种抗菌药物的联合用药对鸡致病性大肠埃希菌和标准质控菌(ATCC25922)的最小抑菌浓度(MIC)及分级抑菌浓度(FIC)指数。结果分别得到7种抗生素对鸡致病性大肠埃希菌的MIC值,显示均有抗菌效能;在鸡致病性大肠埃希菌的体外抗菌效果中,克林沙星与磷霉素钠、多黏菌素和痢菌净联合用药表现为协同作用,与哌拉西林为相加作用,与头孢拉定为无关作用;TMP与多黏菌素和痢菌净为协同作用,与磷霉素钠和头孢拉定为相加作用,与哌拉西林为无关作用。结论该体外研究为临床合理应用克林沙星提供了试验依据。 展开更多
关键词 克林沙星 鸡致病性大肠埃希菌 联合抗菌效果
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猪嗜血支原体ORF9的全基因合成及原核表达 被引量:1
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作者 周栋 刘建柱 +6 位作者 张璐 成子强 牛绪东 刘海涛 刘永夏 杨笃宝 王淑静 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期985-987,共3页
为原核表达猪嗜血支原体(M.haemosuis)ORF9蛋白,本研究根据GenBank登录的AJ504999的ORF9基因序列,采用重叠延伸PCR技术(SOE-PCR),选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成4对寡核苷酸片段,人工合成ORF9基因。将其克隆于表达载体pET-32a中... 为原核表达猪嗜血支原体(M.haemosuis)ORF9蛋白,本研究根据GenBank登录的AJ504999的ORF9基因序列,采用重叠延伸PCR技术(SOE-PCR),选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成4对寡核苷酸片段,人工合成ORF9基因。将其克隆于表达载体pET-32a中构建重组表达质粒pET-ORF9,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE和western blot鉴定表明,重组蛋白的分子量约为34 ku。 展开更多
关键词 猪嗜血支原体 ORF9 全基因合成 原核表达
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鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
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作者 苏倩倩 李恩扩 +2 位作者 张海滨 周霞 胡敬东 《山东农业科学》 2012年第4期5-9,共5页
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶... 将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5<P/N<2.0为可疑,P/N<1.5为阴性。本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素 18成熟蛋白(mChIL-18) 原核表达 蛋白纯化 间接ELISA
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禽网状内皮组织增生症病毒感染肉鸡中鸡白细胞介素18的定量检测 被引量:1
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作者 孔斌 陈雪锋 +1 位作者 唐德宏 胡敬东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期963-966,共4页
建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处... 建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL-18的分泌水平在感染后7和14d均显著升高(P<0.05),在感染21、28、35和42d表达差异均有显著变化(P<0.05)。本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理奠定了一定基础。 展开更多
关键词 肉鸡 禽网状内皮组织增生症病毒 白细胞介素18 荧光定量RT-PCR
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