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鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
1
作者
苏倩倩
李恩扩
+2 位作者
张海滨
周霞
胡敬东
《山东农业科学》
2012年第4期5-9,共5页
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶...
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5<P/N<2.0为可疑,P/N<1.5为阴性。本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。
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关键词
鸡白细胞介素
18成熟蛋白(mChIL-18)
原核表达
蛋白纯化
间接ELISA
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职称材料
禽网状内皮组织增生症病毒感染肉鸡中鸡白细胞介素18的定量检测
被引量：
1
2
作者
孔斌
陈雪锋
+1 位作者
唐德宏
胡敬东
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期963-966,共4页
建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处...
建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL-18的分泌水平在感染后7和14d均显著升高(P<0.05),在感染21、28、35和42d表达差异均有显著变化(P<0.05)。本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理奠定了一定基础。
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关键词
肉鸡
禽网状内皮组织增生症病毒
白细胞介素18
荧光定量RT-PCR
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职称材料
题名
鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
1
作者
苏倩倩
李恩扩
张海滨
周霞
胡敬东
机构
山东农业大学
动物
医学院
/
山东省
动物
生物技术
与疫病
防治
重点
实验室
出处
《山东农业科学》
2012年第4期5-9,共5页
基金
山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2006BS06015)
山东省自然科学基金(Y2008D12)资助
文摘
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5<P/N<2.0为可疑,P/N<1.5为阴性。本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。
关键词
鸡白细胞介素
18成熟蛋白(mChIL-18)
原核表达
蛋白纯化
间接ELISA
Keywords
Chicken interleukin 18 mature protein
Prokaryotic expression
Protein purification
Indi- rect ELISA
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
禽网状内皮组织增生症病毒感染肉鸡中鸡白细胞介素18的定量检测
被引量：
1
2
作者
孔斌
陈雪锋
唐德宏
胡敬东
机构
山东农业大学动物医学院山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室
泰安市
动物
疫病
预防控制中心
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期963-966,共4页
基金
山东省自然科学基金项目资助(Y2008D12)
文摘
建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL-18的分泌水平在感染后7和14d均显著升高(P<0.05),在感染21、28、35和42d表达差异均有显著变化(P<0.05)。本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理奠定了一定基础。
关键词
肉鸡
禽网状内皮组织增生症病毒
白细胞介素18
荧光定量RT-PCR
Keywords
broiler
reticuloendotheliosis virus
interleukin-18
real-time fluorescent quantitative RT-PCR
分类号
S852.659.3 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
苏倩倩
李恩扩
张海滨
周霞
胡敬东
《山东农业科学》
2012
0
在线阅读
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职称材料
2
禽网状内皮组织增生症病毒感染肉鸡中鸡白细胞介素18的定量检测
孔斌
陈雪锋
唐德宏
胡敬东
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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已选择
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