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猪嗜血支原体ORF9的全基因合成及原核表达
被引量：
1
1
作者
周栋
刘建柱
+6 位作者
张璐
成子强
牛绪东
刘海涛
刘永夏
杨笃宝
王淑静
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期985-987,共3页
为原核表达猪嗜血支原体(M.haemosuis)ORF9蛋白,本研究根据GenBank登录的AJ504999的ORF9基因序列,采用重叠延伸PCR技术(SOE-PCR),选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成4对寡核苷酸片段,人工合成ORF9基因。将其克隆于表达载体pET-32a中...
为原核表达猪嗜血支原体(M.haemosuis)ORF9蛋白,本研究根据GenBank登录的AJ504999的ORF9基因序列,采用重叠延伸PCR技术(SOE-PCR),选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成4对寡核苷酸片段,人工合成ORF9基因。将其克隆于表达载体pET-32a中构建重组表达质粒pET-ORF9,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE和western blot鉴定表明,重组蛋白的分子量约为34 ku。
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关键词
猪嗜血支原体
ORF9
全基因合成
原核表达
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职称材料
鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
2
作者
苏倩倩
李恩扩
+2 位作者
张海滨
周霞
胡敬东
《山东农业科学》
2012年第4期5-9,共5页
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶...
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5<P/N<2.0为可疑,P/N<1.5为阴性。本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。
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关键词
鸡白细胞介素
18成熟蛋白(mChIL-18)
原核表达
蛋白纯化
间接ELISA
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职称材料
题名
猪嗜血支原体ORF9的全基因合成及原核表达
被引量：
1
1
作者
周栋
刘建柱
张璐
成子强
牛绪东
刘海涛
刘永夏
杨笃宝
王淑静
机构
山东农业大学动物医学院/山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室
中国
农业
大学
动物
医学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期985-987,共3页
基金
山东省中青年科学家奖励基金(BS2009NY007)
中国博士后基金特别资助(200801417)
山东省博士后创新项目专项基金(200801001)
文摘
为原核表达猪嗜血支原体(M.haemosuis)ORF9蛋白,本研究根据GenBank登录的AJ504999的ORF9基因序列,采用重叠延伸PCR技术(SOE-PCR),选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成4对寡核苷酸片段,人工合成ORF9基因。将其克隆于表达载体pET-32a中构建重组表达质粒pET-ORF9,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE和western blot鉴定表明,重组蛋白的分子量约为34 ku。
关键词
猪嗜血支原体
ORF9
全基因合成
原核表达
Keywords
Mycoplasma haemosuis
ORF9
SOE-PCR
prokaryotic expression
分类号
S852.7 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
2
作者
苏倩倩
李恩扩
张海滨
周霞
胡敬东
机构
山东农业大学动物医学院/山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室
出处
《山东农业科学》
2012年第4期5-9,共5页
基金
山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2006BS06015)
山东省自然科学基金(Y2008D12)资助
文摘
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5<P/N<2.0为可疑,P/N<1.5为阴性。本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。
关键词
鸡白细胞介素
18成熟蛋白(mChIL-18)
原核表达
蛋白纯化
间接ELISA
Keywords
Chicken interleukin 18 mature protein
Prokaryotic expression
Protein purification
Indi- rect ELISA
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪嗜血支原体ORF9的全基因合成及原核表达
周栋
刘建柱
张璐
成子强
牛绪东
刘海涛
刘永夏
杨笃宝
王淑静
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
苏倩倩
李恩扩
张海滨
周霞
胡敬东
《山东农业科学》
2012
0
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职称材料
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