本研究旨在克隆小尾寒羊钙粘和蛋白1(Calcium and integrin binding protein 1,CIB1)基因cDNA全长,并在原核载体中表达。参照已发表的CIB1基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,采用RT-PCR法,从小尾寒羊睾丸组织中扩增获得CIB1基因全长...本研究旨在克隆小尾寒羊钙粘和蛋白1(Calcium and integrin binding protein 1,CIB1)基因cDNA全长,并在原核载体中表达。参照已发表的CIB1基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,采用RT-PCR法,从小尾寒羊睾丸组织中扩增获得CIB1基因全长cDNA。将其克隆到pMD19-T载体,并进行测序分析。将该基因编码区重组于融合表达质粒pET32a中,构建了重组原核表达载体(pET32a-CIB1)。将其转化到BL21(DE3)pLysS宿主菌中,用IPTG进行诱导表达。结果表明,克隆的CIB1基因cDNA与GenBank上登录的牛、猪、猕猴、人、小鼠、大鼠、黑猩猩等动物该基因序列的同源性达90%以上,编码氨基酸的同源性在93%以上,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为576 bp。实现了高效特异性融合表达,表达产物的分子质量约为38 ku。本研究结果为进一步研究CIB1蛋白功能打下良好的基础。展开更多
文摘本研究旨在克隆小尾寒羊钙粘和蛋白1(Calcium and integrin binding protein 1,CIB1)基因cDNA全长,并在原核载体中表达。参照已发表的CIB1基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,采用RT-PCR法,从小尾寒羊睾丸组织中扩增获得CIB1基因全长cDNA。将其克隆到pMD19-T载体,并进行测序分析。将该基因编码区重组于融合表达质粒pET32a中,构建了重组原核表达载体(pET32a-CIB1)。将其转化到BL21(DE3)pLysS宿主菌中,用IPTG进行诱导表达。结果表明,克隆的CIB1基因cDNA与GenBank上登录的牛、猪、猕猴、人、小鼠、大鼠、黑猩猩等动物该基因序列的同源性达90%以上,编码氨基酸的同源性在93%以上,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为576 bp。实现了高效特异性融合表达,表达产物的分子质量约为38 ku。本研究结果为进一步研究CIB1蛋白功能打下良好的基础。
