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羊无乳霉形体的实验室诊断与防治
1
作者 贺英 赵萍 +2 位作者 储岳峰 高鹏程 逯忠新 《养殖与饲料》 2008年第6期65-67,共3页
无乳霉形体是山羊和绵羊的重要致病霉形体,给养羊业带来较大的经济损失,本文就其实验室诊断和防治作了阐述,旨在为控制本病的流行和发生提供帮助。
关键词 无乳霉形体 实验室诊断 防治
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猪戊型肝炎病毒分子生物学与流行病学研究进展 被引量：7
2
作者 郝宝成 兰喜 +4 位作者 刑小勇 项海涛 胡永浩 柳纪省 梁剑平 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第5期67-73,共7页
戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是20世纪80年代发现的又一新型肝炎病毒,近年来对戊型肝炎病毒病原学、流行病学、实验室诊断、基因结构等方面研究取得了重大进展,本文就HEV的形态、基因分型、分子生物学特性、戊型肝炎(Hepatitis ... 戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是20世纪80年代发现的又一新型肝炎病毒,近年来对戊型肝炎病毒病原学、流行病学、实验室诊断、基因结构等方面研究取得了重大进展,本文就HEV的形态、基因分型、分子生物学特性、戊型肝炎(Hepatitis E,HE)的流行病学特点作一简要概述。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 形态 基因分型 分子生物学特性 流行病学
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猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 被引量：6
3
作者 李国娟 田永强 +2 位作者 李建强 李宝玉 柳纪省 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期37-41,共5页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是严重危害养猪业的病原,对PRRSV的分子生物学研究进展进行了综述,主要包括PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白及其功能、致病机理及复制与转录等。
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展
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表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究 被引量：1
4
作者 殷相平 李志勇 +5 位作者 李江涛 李宝玉 兰喜 杨彬 李学瑞 柳纪省 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期19-24,共6页
对狂犬病毒G+N双基因复制缺陷型腺病毒穿梭载体进行转染,以获得融合表过狂犬病毒糖蛋白和核蛋白重组腺病毒,并对其进行生物学特性和免疫学研究.结果表明:将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在... 对狂犬病毒G+N双基因复制缺陷型腺病毒穿梭载体进行转染,以获得融合表过狂犬病毒糖蛋白和核蛋白重组腺病毒,并对其进行生物学特性和免疫学研究.结果表明:将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,可获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N,经PacI酶切后转染HEK-293细胞,可获得带有目的基因的重组腺病毒.重组腺病毒在HEK-293细胞中连续传代15代次后,在细胞内的病变时间缩短为20 h以内.经测定,重组腺病毒对HEK-293细胞的TCID50为10-8.0.mL-1,用RT-PCR法可检测到狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段;重组腺病毒经口服免疫小白鼠,对狂犬病毒CVS毒株的免疫保护率可达80%. 展开更多
关键词 狂犬病毒 重组腺病毒 生物学特性 免疫
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C型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1基因的原核表达及其生物活性的初步分析
5
作者 常惠芸 丛国正 +4 位作者 独军政 邵军军 林彤 冯金瑞 刘萍 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期7-10,共4页
将口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pET-28α(+)中,获得融合表达质粒pET-P1,转化E.coli.BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,pET-P1获得融合表达,Western Blot检测证实表达的融合蛋白具有免疫活性,... 将口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pET-28α(+)中,获得融合表达质粒pET-P1,转化E.coli.BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,pET-P1获得融合表达,Western Blot检测证实表达的融合蛋白具有免疫活性,表达产物主要以包涵体的形式存在,进一步采用纯化试剂盒纯化P1蛋白做为诊断抗原。 展开更多
关键词 C型口蹄疫病毒 重组蛋白P1 表达生物活性
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口蹄疫病毒P12A-3C免疫原基因在百脉根中的遗传转化与表达 被引量：17
6
作者 王炜 张永光 +9 位作者 潘丽 王永录 方玉珍 蒋守田 张维德 吕建亮 孙元 智晓莹 黄振华 刘力宽 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期236-239,247,共5页
目的利用植物反应器研究口蹄疫转基因植物疫苗是近些年来科学家研究的热点,本研究以豆科牧草百脉根为转化受体,将口蹄疫病毒P12A-3C基因通过根癌农杆菌介导法导入百脉根基因组。方法百脉根外植体经过浸菌,抗性培养基上愈伤、出芽和生根... 目的利用植物反应器研究口蹄疫转基因植物疫苗是近些年来科学家研究的热点,本研究以豆科牧草百脉根为转化受体,将口蹄疫病毒P12A-3C基因通过根癌农杆菌介导法导入百脉根基因组。方法百脉根外植体经过浸菌,抗性培养基上愈伤、出芽和生根等阶段。结果最终获得了转基因抗性植株。结论对转基因植株进行PCR、RT-PCR检测,表明外源基因整合在植物染色体基因组,并且具有转录活性,ELISA检测表明,转基因植株表达出外源目的蛋白。 展开更多
关键词 口蹄疫 百脉根 转基因植物 疫苗
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猪繁殖与呼吸综合征·猪瘟和猪圆环病毒Ⅱ型混合感染的鉴定及病原特性分析 被引量：18
7
作者 吴锦艳 田宏 +6 位作者 尚佑军 王光祥 靳野 尹双辉 陈研 何建辉 刘湘涛 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第10期5244-5247,共4页
[目的]鉴定由猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)引发的猪疫病并进行病原特性分析。[方法]采集湖南湘潭(编号为HN/XT)发病猪的组织和脏器,进行DNA、RNA提取,然后进行PCR扩增、测序;同时采用细胞分离... [目的]鉴定由猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)引发的猪疫病并进行病原特性分析。[方法]采集湖南湘潭(编号为HN/XT)发病猪的组织和脏器,进行DNA、RNA提取,然后进行PCR扩增、测序;同时采用细胞分离技术进行毒株的分离、鉴定。[结果]测序分析结果表明,CSFV、PRRSV和PCV2与目前流行毒序列及GenBank下载序列氨基酸同源性分别为90%、94%和96%左右,可见该次猪病疫情至少是由CSFV、PRRSV和PCV23种病毒混合感染引起。[结论]该研究可对当前危害养猪业混合感染疾病的流行病学研究和净化控制提供数据。 展开更多
关键词 湖南湘潭 猪病 混合感染 鉴定 病原特性
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检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用 被引量：11
8
作者 蒋韬 梁仲 +5 位作者 陈涓 何继军 吕律 马维民 刘在新 刘湘涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1021-1024,共4页
目的:建立一种快速、简便的检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法:采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,用其标记纯化的AsiaⅠ型口蹄疫抗体后包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的AsiaI型口蹄疫抗体和纯化的羊抗豚... 目的:建立一种快速、简便的检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法:采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,用其标记纯化的AsiaⅠ型口蹄疫抗体后包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的AsiaI型口蹄疫抗体和纯化的羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜按顺序组装成胶体金快速诊断试纸条,通过系列实验验证其灵敏度、特异性、重复性及稳定性。结果:研制的AsiaⅠ型口蹄疫快速检测试纸条对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的检测灵敏度为0.116mg/L,对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。交叉反应证实该方法与其他血清型口蹄疫抗原和猪水疱病抗原(SVD)无交叉反应。检测田间样品,GICA与反向间接血凝的定型的符合率为96.87%。稳定性实验证实试纸条可保存12个月。结论:建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。 展开更多
关键词 ASIA I型口蹄疫病毒 胶体金 免疫层析法
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牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv的基因克隆及分子特征 被引量：7
9
作者 独军政 常惠芸 +6 位作者 丛国正 邵军军 林彤 高闪电 刘湘涛 才学鹏 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期190-195,共6页
研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv亚基... 研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv亚基基因的编码区含有3147个核苷酸,编码1048个氨基酸,其中信号肽由30个氨基酸组成,胞外域由957个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由32个氨基酸组成;在890和891位氨基酸之间有1个蛋白酶裂解位点(KR-D);胞外域含有13个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)、2个Ca2+结合位点[DX(D/N)XDGXXD]、18个半胱氨酸残基。该基因在GenBank中的登录号为DQ871215。牛αv基因与猕猴、家鼠、犬、人、鸡的αv基因的核苷酸序列同源性分别为91.0%、85.7%、90.1%、91.2%、73.1%,推导的氨基酸序列同源性分别为94.7%、91.6%、96.3%、95.0%、81.6%。牛αv亚基存在复杂多变的二级结构,这是其具有多种生物学功能的分子基础,其中1-30位、988-1017位氨基酸区段疏水性较强,形成表面蛋白结构的可能性较差,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究口蹄疫病毒与宿主细胞的相互关系奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 牛αv基因 克隆 分子特征
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逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达 被引量：9
10
作者 李炯 刘艳红 +4 位作者 安芳兰 刘俊林 刘湘涛 尚佑军 殷宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期376-382,共7页
为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病... 为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 口蹄疫病毒 衣壳前体基因 绿色荧光蛋白基因 BHK-21细胞
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O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立 被引量：9
11
作者 林密 马军武 +3 位作者 祁淑芸 冯霞 张峰 殷宏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期627-630,共4页
本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测13... 本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95.5%,84.7%。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100%,免疫猪检出率为86.7%。 展开更多
关键词 口蹄疫 固相竞争ELISA 抗体效价 血清
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慢病毒介导稳定表达增强小反刍兽疫病毒复制的山羊Vero/SLAM细胞系的建立 被引量：5
12
作者 吴锦艳 田宏 +6 位作者 蒙学莲 惠小婷 王耀杰 关玉华 尚佑军 刘永生 张志东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期218-226,共9页
利用Gateway技术和慢病毒表达系统将山羊淋巴细胞信号活化因子SLAM稳定整合在Vero细胞基因组染色体上,建立稳定表达可增强小反刍兽疫病毒(PPRV)复制的SLAM的Vero阳性细胞亚克隆,并验证阳性细胞亚克隆Vero/SLAM表达SLAM的活性、遗传稳定... 利用Gateway技术和慢病毒表达系统将山羊淋巴细胞信号活化因子SLAM稳定整合在Vero细胞基因组染色体上,建立稳定表达可增强小反刍兽疫病毒(PPRV)复制的SLAM的Vero阳性细胞亚克隆,并验证阳性细胞亚克隆Vero/SLAM表达SLAM的活性、遗传稳定性及其对PPRV复制的增殖效果。分离山羊外周血淋巴细胞,提取基因组Total RNA,一步RT-PCR获得完整ORF的SLAM基因,采用BP及LR位点的基因重组技术,构建入门载体pDONR/SLAM并获得表达骨架pDEST/SLAM,与Packaging Mix pLP1、pLP2及VSV-G共转染293-FT细胞,获得SLAM复制缺陷型慢病毒样粒子,用其感染Vero细胞,杀稻瘟菌素抗性筛选获得阳性细胞克隆,通过靶标基因扩增、间接免疫荧光、激光扫描共聚焦显微技术、Western blot免疫印迹检测技术、致细胞病变效应及Realtime RT-PCR等技术分别验证SLAM基因组整合、转录,SLAM蛋白表达、反应活性以及PPRV在表达SLAM阳性细胞亚克隆上的增殖效果。结果显示:SLAM受体基因被稳定整合在Vero细胞基因组染色体上,该受体蛋白表达于细胞周质,建立的细胞连续传代不丢失,接种病毒后致细胞病变时间由4～7d缩短为3.5d,TCID_(50)·0.1mL^(-1)由4.25增加为5.67,相对于正常Vero细胞,整合有SLAM的Vero细胞,由于表达了PPRV特异的细胞受体使PPRV对其易感性显著增强。成功建立一株稳定表达靶向增强PPRV复制的Vero/SLAM细胞:该细胞表达的SLAM具有明显增强PPRV复制的功能,不仅可以从细胞模型水平阐明增强PPRV复制的关键靶基因,也为PPRV感染引起宿主细胞的变化以及对机体的致病机制等提供研究工具。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 SLAM Vero细胞系 GATEWAY技术 慢病毒表达系统
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口蹄疫病毒的抗原结构学的研究进展 被引量：6
13
作者 刘亚丽 丁耀忠 +2 位作者 马小元 张杰 张永光 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期253-256,共4页
口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属,完整的病毒粒子由衣壳包裹着单股正链RNA构成。FMDV基因组全长约为8.5 kb,主要分为5＇端非编码区、编码区、3＇端非编码区和多聚腺苷酸（poly（A））。5... 口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属,完整的病毒粒子由衣壳包裹着单股正链RNA构成。FMDV基因组全长约为8.5 kb,主要分为5＇端非编码区、编码区、3＇端非编码区和多聚腺苷酸（poly（A））。5＇端非编码区的5端共价连接病毒自身编码的非结构蛋白（VPg）,而且还包含有S-片段、 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 FMDV 抗原结构 非结构蛋白 衣壳 抗原位点 正链 病毒科 病毒粒子 编码区
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口蹄疫病毒O/HN/93疫苗株的拯救及病毒活性鉴定 被引量：9
14
作者 曹伟军 李平花 +3 位作者 白兴文 卢曾军 孙普 刘在新 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期32-37,共6页
利用定点突变方法,构建含有预期突变的口蹄疫病毒O/HN/93株全长cDNA克隆,将全长cDNA的重组质粒线化后,与表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,转染细胞盲传至第3代50 h后出现典型致细胞病变效应(CPE),第4代10 h出现典型... 利用定点突变方法,构建含有预期突变的口蹄疫病毒O/HN/93株全长cDNA克隆,将全长cDNA的重组质粒线化后,与表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,转染细胞盲传至第3代50 h后出现典型致细胞病变效应(CPE),第4代10 h出现典型的CPE。对收获的病毒分别用RT-PCR、分子标签测序、间接免疫荧光和电镜观察等进行鉴定,均证实成功拯救到了O/HN/93株FMDV。成功获得O/HN/93株的感染性分子克隆,为进一步研究抗原谱广、免疫原性好的候选疫苗株奠定了骨架基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 疫苗株 感染性cDNA克隆 病毒拯救
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口蹄疫病毒株OA/583C蛋白酶的结构模拟和功能分析 被引量：9
15
作者 周建华 丛国正 +1 位作者 高闪电 常惠芸 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期9-13,共5页
以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-TEasy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定。该毒株与Poliovirus,Hepatitis Avirus和Human rhi-novirus 89毒株3C序列对比分析... 以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-TEasy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定。该毒株与Poliovirus,Hepatitis Avirus和Human rhi-novirus 89毒株3C序列对比分析发现核苷酸序列一致性分别为38.8%,37.1%和36.5%,氨基酸序列一致性分别为23.7%,19.2%和17.6%。通过Swiss-pdbViewer软件模拟出FMDVOA/58 3C蛋白酶的3D结构和表面模型。并鉴定出此毒株3C蛋白酶的活性中心为Cys31-His46-Asp84。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3C蛋白酶 活性位点
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AsiaⅠ口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：4
16
作者 林彤 常惠芸 +3 位作者 杜惠芬 邵军军 独军政 丛国正 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1034-1037,共4页
目的:制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和... 目的:制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用SDS-PAGE电泳、间接ELISA以及微量细胞中和试验对所获得的mAb的特异性进行鉴定。结果:成功获得3株能稳定传代并分泌抗AsiaImAb的杂交瘤细胞株,分别命名为:1B8、5E1、5E2,其分泌的mAb为IgG1(1B8)和IgG2a(5E1、5E2)亚类,他们均能特异性的识别VP1重组蛋白和AsiaI型全病毒,其腹水效价在1:105～1:106。微量细胞中和试验表明该mAb能很好地识别灭活的FMDV,中和效价达1:1024以上。交叉试验表明该mAb具有高度特异性,型间无交叉反应,证明所获得的mAb均完全针对AsiaI FMDV抗原决定簇。结论:在口蹄疫病毒mAb的研究中,VP1重组蛋白有望代替活病毒来制备mAb。AsiaI口蹄疫病毒VP1mAb的成功制备,为进一步研究和开发新型口蹄疫的检测方法和抗原表位奠定了基础。 展开更多
关键词 AsiaI型口蹄疫 VP1蛋白 重组抗原 单克隆抗体
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体识别的抗原表位分析 被引量：6
17
作者 赵建勇 伏小平 +3 位作者 独军政 高闪电 冯艳丽 常惠芸 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第4期1583-1585,共3页
[目的]分析测定口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(mAb)的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[方法]利用叠加ELISA法、间接ELISA法、硫氰酸盐洗脱法测定C2D8、B7B6、B8C9、C4C7、E7C7 5株mAb的抗原识别位点、饱... [目的]分析测定口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(mAb)的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[方法]利用叠加ELISA法、间接ELISA法、硫氰酸盐洗脱法测定C2D8、B7B6、B8C9、C4C7、E7C7 5株mAb的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[结果]5株mAb间具有相似或不同的抗原识别位点,其中C4C7与E7C7、C4C7与B8C9、E7C7与B8C9等mAb间的识别位点相似,而C4C7与B7B6、E7C7与C2D8等mAb间的识别位点不同。5株mAb C2D8、E7C7、B8C9、C4C7、B7B6的饱和值分别为1∶200、1∶400、1∶800、1∶800、1∶800,亲和力为B8C9>C4C7>B7B6≥E7C7>C2D8。[结论]分析测定了5株mAb的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数,从而为利用mAb深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 整联蛋白 受体 单克隆抗体 抗原表位
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域多克隆抗体的制备和特性分析 被引量：4
18
作者 高闪电 常惠芸 +4 位作者 独军政 王景锋 周建华 赵建勇 谢庆阁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期975-978,共4页
目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD,并制备兔抗β6LBD多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体,构建的pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒... 目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD,并制备兔抗β6LBD多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体,构建的pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价,并以Western blot鉴定其特异性。结果:SDS-PAGE电泳分析显示pGEX-4T-1-β6LBD诱导后表达一Mr约为42000的GST-β6LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β6LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性。结论:制备了具有高亲和性和特异性的抗猪源整联蛋白β6LBD多克隆抗体,为深入研究整联蛋白β6在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 整联蛋白β6亚基 配体结合域 多克隆抗体
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口蹄疫病毒核酸试纸条检测方法的建立 被引量：6
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作者 龚真莉 蒋韬 +3 位作者 祁淑芸 陈国栋 刘艳红 李勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第9期2292-2297,共6页
本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法,建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。试验利用RT-PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段,在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针——生物素和地高辛,使扩增产物结合探针... 本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法,建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。试验利用RT-PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段,在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针——生物素和地高辛,使扩增产物结合探针。利用胶体金的放大原理将链霉亲和素与金颗粒形成胶体金混合物,从而与RT-PCR产物中的生物素探针结合。硝酸纤维素膜上端标记生物素化山羊抗兔IgG作为指控条带,下端标记抗地高辛抗体以捕获RT-PCR产物中的地高辛探针。组装金标试纸条,检测RT-PCR产物,结果表明该核酸试纸条可以检测到0.3×10^-3-3×10^-3μg/μL,敏感性高于琼脂糖凝胶电泳,两种方法的符合率高,核酸试纸条检测方法是一种敏感性高、成本低且费时短的新型检测方法。该方法为口蹄疫病毒检测提供了一种新的思路。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D基因 核酸试纸条 生物素探针 地高辛探针
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环介导等温扩增技术原理及其在检测诊断病原微生物中的应用 被引量：12
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作者 焦文强 殷相平 柳纪省 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期50-53,共4页
环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）是近年来发展出来的一种核酸扩增技术。通过设计识别目的片段6个序列的4个特异引物,整个反应可以在恒温（60-65℃）条件下1 h内完成,由于采用4个引物,与传统的核酸... 环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）是近年来发展出来的一种核酸扩增技术。通过设计识别目的片段6个序列的4个特异引物,整个反应可以在恒温（60-65℃）条件下1 h内完成,由于采用4个引物,与传统的核酸扩增技术相比,它具有敏感、特异的特点;且产物中有大量的副产物——白色焦磷酸镁沉淀,扩增产物可通过肉眼观察或浊度计即可判定结果;反应不需要精密控温设备和高级复杂的分析仪器,对操作人员的熟练度和专业水平要求不高,因此该方法特别适合基层或者实验条件较差的试验室进行病原微生物的快速检测。就其原理及其在病原微生物的检测中的应用做一综述。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 原理 应用
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