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食管鳞状细胞癌组织中凋亡抑制蛋白Livin的表达 被引量:4
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作者 何群力 赵国新 +3 位作者 苗立群 孙翔 王永玲 张明智 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第4期615-617,共3页
目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中凋亡抑制蛋白家族新成员Livin及其2种异构体Livinα和Livinβ的表达情况。方法:采用实时逆转录PCR(real-time RT-PCR)方法检测46例食管鳞状细胞癌组织及其对应的癌旁正常组织中Livinα mRNA和Livinβ mRN... 目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中凋亡抑制蛋白家族新成员Livin及其2种异构体Livinα和Livinβ的表达情况。方法:采用实时逆转录PCR(real-time RT-PCR)方法检测46例食管鳞状细胞癌组织及其对应的癌旁正常组织中Livinα mRNA和Livinβ mRNA的表达,并用免疫组织化学方法检测Livin蛋白的表达。结果:46例食管鳞状细胞癌组织中Livinα mRNA、Livinβ mRNA和蛋白的阳性表达率分别为82.6%(38/46)、82.6%(38/46)和93.5%(43/46),而对应癌旁正常组织中Livinα mRNA、Livinβ mRNA和蛋白的阳性表达率分别为43%(2/46)、6.5%(3/46)和6.5%(3/46),均低于癌组织中的表达(P<0.05)。食管鳞状细胞癌组织中Livin2种异构体同时表达,且Livinβ mRNA与Livinα mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:食管鳞状细胞癌组织中存在LivinmRNA及蛋白高表达现象,可能与食管鳞状细胞癌的发生、发展密切相关。 展开更多
关键词 凋亡抑制蛋白 LIVIN 食管肿瘤 鳞状细胞癌
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靶向Livin基因siRNA载体的构建和沉默效应观察 被引量:3
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作者 何群力 赵国新 +3 位作者 苗立群 孙翔 王永玲 张明智 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第4期617-620,共4页
目的:构建针对人Livin基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察该载体对食管癌细胞Livin基因表达的沉默效应。方法:依据siRNA设计原则,分析Livin mRNA序列,设计并合成2个Livin靶向的发夹状siRNA靶序列,退火后分别连接入pSUPER-neo载体,... 目的:构建针对人Livin基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察该载体对食管癌细胞Livin基因表达的沉默效应。方法:依据siRNA设计原则,分析Livin mRNA序列,设计并合成2个Livin靶向的发夹状siRNA靶序列,退火后分别连接入pSUPER-neo载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹法将重组质粒转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR检测转染细胞Livin mRNA的表达。结果:经过酶切鉴定与测序,构建的靶向Livinα和Livinβ基因的siRNA载体,结果正确;RT-PCR检测显示,转染细胞Livin mRNA的表达水平降低。结论:成功构建沉默细胞Livin基因表达的siRNA载体。 展开更多
关键词 RNA干扰 LIVIN 载体
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调控Livin基因表达对食管癌EC9706细胞生物学行为的影响
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作者 何群力 苗立群 +3 位作者 赵国新 孙翔 王永玲 张明智 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第4期-,共3页
目的:探讨调控Livin基因表达对食管癌EC9706细胞生长速度、细胞凋亡以及放射线敏感性的影响。方法:取EC9706细胞,分7组,siRNA组、Livinα组、Livinβ组分别用脂质体包裹法转染沉默Livin表达的siRNA载体pSUPER-neo-Sli1、Livinα表达载体... 目的:探讨调控Livin基因表达对食管癌EC9706细胞生长速度、细胞凋亡以及放射线敏感性的影响。方法:取EC9706细胞,分7组,siRNA组、Livinα组、Livinβ组分别用脂质体包裹法转染沉默Livin表达的siRNA载体pSUPER-neo-Sli1、Livinα表达载体pIRES2-AcGFP-Livinα及Livinβ表达载体pIRES2-AcGFP-Livinβ;Livinα/β组同时转染pIRES2-AcGFP-Livinα和pIRES2-AcGFP-Livinβ,空siRNA载体组转染pSUPER-neo,空表达载体组转染pIRES2-AcGFP,空白对照组不转染。取各组细胞,荧光定量RT-PCR法检测Livin mRNA表达情况,MTT法测定细胞生长曲线,TUNEL法检测细胞凋亡,同时检测Caspase-3活性及放射线敏感性。结果:与空白对照组比较,空表达载体组、空siRNA载体组细胞倍增时间、凋亡指数、Caspase-3活性和放射线敏感性差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,Livinα组、Livinβ组和Livinα/β组细胞倍增时间、凋亡指数、Caspase-3活性和放射线敏感性均降低(P<0.05);siRNA组细胞凋亡指数、Caspase-3活性和放射线敏感性增加(P<0.05),细胞倍增时间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:调控EC9706细胞Livin基因的表达,可有效改变细胞的生物学行为;Livin基因可能成为肿瘤治疗的新靶点。 展开更多
关键词 LIVIN 真核表达 RNA干扰 凋亡 Caspase-3 放射线敏感性
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凋亡抑制蛋白Livin真核表达载体的构建及表达
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作者 何群力 苗立群 +3 位作者 赵国新 孙翔 王永玲 张明智 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第4期-,共4页
目的:构建凋亡抑制蛋白Livin真核表达载体pIRES2-AcGFP-Livin。方法:设计合成扩增Livinα和Livinβ基因全长cDNA序列的特异性PCR引物,以食管鳞状细胞癌EC9706细胞总RNA为模板,进行RT-PCR,将获得的cDNA序列克隆入T载体,再用BglⅡ和EcoR... 目的:构建凋亡抑制蛋白Livin真核表达载体pIRES2-AcGFP-Livin。方法:设计合成扩增Livinα和Livinβ基因全长cDNA序列的特异性PCR引物,以食管鳞状细胞癌EC9706细胞总RNA为模板,进行RT-PCR,将获得的cDNA序列克隆入T载体,再用BglⅡ和EcoRⅠ双酶切,亚克隆入真核表达载体pIRES2-AcGFP,将重组质粒用脂质体包裹转染NIH3T3细胞,G418筛选得到稳定表达的细胞克隆,Western-blot检测转染细胞Livinα和Livinβ蛋白的表达情况。结果:构建了真核表达载体pIRES2-AcGFP-Livinα和pIRES2-AcGFP-Livinβ,测序分析证实插入序列正确;转染的NIH3T3细胞,可稳定表达Livinα或Livinβ蛋白。结论:成功构建Livinα和Livinβ真核表达载体。 展开更多
关键词 LIVIN 真核表达载体 凋亡抑制蛋白
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