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敲除BMAL1基因促进HL-60细胞凋亡并抑制增殖
被引量：
3
1
作者
牟佼
戴进前
+4 位作者
刘明莉
倪庆仁
张韵洁
温静
宋艳萍
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期1027-1032,共6页
目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除节律基因BMAL1的HL-60细胞系,探讨BMAL1分子在人急性髓系白血病中的生物学功能。方法:针对BMAL1基因设计2条sg RNA,构建含有sg RNA的PX459敲除载体;应用T7核酸内切酶I检测设计的sg RNA活性;应用打靶载体瞬...
目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除节律基因BMAL1的HL-60细胞系,探讨BMAL1分子在人急性髓系白血病中的生物学功能。方法:针对BMAL1基因设计2条sg RNA,构建含有sg RNA的PX459敲除载体;应用T7核酸内切酶I检测设计的sg RNA活性;应用打靶载体瞬时转染HL-60细胞构建BMAL1敲除细胞系,应用Western blot检测BMAL1蛋白的表达,应用流式细胞仪检测敲除细胞系的凋亡水平,应用CCK-8试剂盒检测敲除细胞系的增殖能力。结果:成功构建了针对BMAL1的PX459-sg RNA载体;并筛选得到了活性较高的打靶载体。Western blot实验在敲除细胞中未检测到BMAL1蛋白的表达。进一步实验发现,BMAL1敲除的HL-60细胞凋亡水平明显升高,细胞增殖能力明显减弱。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建了BMAL1基因敲除的HL-60细胞系,并发现BMAL1敲除可以促进HL-60细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,初步揭示了BMAL1生物节律基因在急性髓系白血病中的生物学作用。
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关键词
CRISPR/Cas9
BMAL1
基因敲除
急性髓系白血病
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职称材料
EMRE在小鼠心肌缺血损伤中的作用及其相关机制的研究
被引量：
6
2
作者
刘峰舟
荆哲
+3 位作者
刘明莉
张恩尉
宁江华
牟佼
《中国循环杂志》
CSCD
北大核心
2017年第7期701-706,共6页
目的:研究调节线粒体钙单向转运体活性所必须的蛋白(essential MCU regulator,EMRE)在小鼠心肌缺血损伤中发挥的作用及其相关机制。方法:利用心肌点注射EMRE腺病毒(Ad-EMRE)上调心肌组织的EMRE分子表达水平,对照小鼠心肌点注射增强绿色...
目的:研究调节线粒体钙单向转运体活性所必须的蛋白(essential MCU regulator,EMRE)在小鼠心肌缺血损伤中发挥的作用及其相关机制。方法:利用心肌点注射EMRE腺病毒(Ad-EMRE)上调心肌组织的EMRE分子表达水平,对照小鼠心肌点注射增强绿色荧光蛋白腺病毒(Ad-eGEP),48 h后,采用结扎小鼠左冠状动脉前降支方法建立心肌梗死(MI)模型。实验设置三组:假手术组(给予Ad-eGFP);心肌梗死对照组(给予Ad-eGFP);心肌梗死处理组(给予Ad-EMRE)。三周后,利用小动物超声系统测定小鼠心脏功能;Western blot及免疫组化检测EMRE分子的表达;麦胚凝集素(WGA)染色检测心肌细胞肥大程度;马松(MASSON)染色检测心肌组织胶原含量;原位末端标记法(TUNEL)检测心肌组织的细胞凋亡;Western blot检测心肌组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的表达;MitoSOX荧光探针检测线粒体ROS水平。结果:与心肌梗死对照组相比,心肌梗死处理组的心功能明显变差,心肌肥厚明显加重,心肌组织胶原纤维含量更高。另外,心肌梗死处理组的心肌细胞凋亡明显增多,Caspase-3和Caspase-9表达明显升高,线粒体活性氧簇产生也明显增多。结论:EMRE过表达可增加线粒体ROS生成,诱导心肌细胞凋亡,加重心肌缺血损伤。
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关键词
线粒体转运蛋白质类
心肌缺血
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职称材料
题名
敲除BMAL1基因促进HL-60细胞凋亡并抑制增殖
被引量：
3
1
作者
牟佼
戴进前
刘明莉
倪庆仁
张韵洁
温静
宋艳萍
机构
西安市中心
医院
血液病研究所
宝鸡市第二中医医院呼吸内分泌科
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期1027-1032,共6页
基金
陕西省自然科学基础研究计划资助项目(2015JM8479
2017JM8025)
文摘
目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除节律基因BMAL1的HL-60细胞系,探讨BMAL1分子在人急性髓系白血病中的生物学功能。方法:针对BMAL1基因设计2条sg RNA,构建含有sg RNA的PX459敲除载体;应用T7核酸内切酶I检测设计的sg RNA活性;应用打靶载体瞬时转染HL-60细胞构建BMAL1敲除细胞系,应用Western blot检测BMAL1蛋白的表达,应用流式细胞仪检测敲除细胞系的凋亡水平,应用CCK-8试剂盒检测敲除细胞系的增殖能力。结果:成功构建了针对BMAL1的PX459-sg RNA载体;并筛选得到了活性较高的打靶载体。Western blot实验在敲除细胞中未检测到BMAL1蛋白的表达。进一步实验发现,BMAL1敲除的HL-60细胞凋亡水平明显升高,细胞增殖能力明显减弱。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建了BMAL1基因敲除的HL-60细胞系,并发现BMAL1敲除可以促进HL-60细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,初步揭示了BMAL1生物节律基因在急性髓系白血病中的生物学作用。
关键词
CRISPR/Cas9
BMAL1
基因敲除
急性髓系白血病
Keywords
CRISPR/Cas9 BMAL1
gene knoctout
acute myeloid leukemia
分类号
R733.71 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
EMRE在小鼠心肌缺血损伤中的作用及其相关机制的研究
被引量：
6
2
作者
刘峰舟
荆哲
刘明莉
张恩尉
宁江华
牟佼
机构
中国人民解放军第四军医大学第一附属
医院
心血管内
科
空军
解放军兰州总
医院
心内
科
宝鸡市第二中医医院呼吸内分泌科
中国人民解放军第四军医大学唐都
医院
骨
科
西安市中心
医院
出处
《中国循环杂志》
CSCD
北大核心
2017年第7期701-706,共6页
基金
陕西省自然科学基础研究计划资助项目(2015JM8479)
文摘
目的:研究调节线粒体钙单向转运体活性所必须的蛋白(essential MCU regulator,EMRE)在小鼠心肌缺血损伤中发挥的作用及其相关机制。方法:利用心肌点注射EMRE腺病毒(Ad-EMRE)上调心肌组织的EMRE分子表达水平,对照小鼠心肌点注射增强绿色荧光蛋白腺病毒(Ad-eGEP),48 h后,采用结扎小鼠左冠状动脉前降支方法建立心肌梗死(MI)模型。实验设置三组:假手术组(给予Ad-eGFP);心肌梗死对照组(给予Ad-eGFP);心肌梗死处理组(给予Ad-EMRE)。三周后,利用小动物超声系统测定小鼠心脏功能;Western blot及免疫组化检测EMRE分子的表达;麦胚凝集素(WGA)染色检测心肌细胞肥大程度;马松(MASSON)染色检测心肌组织胶原含量;原位末端标记法(TUNEL)检测心肌组织的细胞凋亡;Western blot检测心肌组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的表达;MitoSOX荧光探针检测线粒体ROS水平。结果:与心肌梗死对照组相比,心肌梗死处理组的心功能明显变差,心肌肥厚明显加重,心肌组织胶原纤维含量更高。另外,心肌梗死处理组的心肌细胞凋亡明显增多,Caspase-3和Caspase-9表达明显升高,线粒体活性氧簇产生也明显增多。结论:EMRE过表达可增加线粒体ROS生成,诱导心肌细胞凋亡,加重心肌缺血损伤。
关键词
线粒体转运蛋白质类
心肌缺血
Keywords
Mitochondrial transporter proteins
Myocardial ischemia
分类号
R54 [医药卫生—心血管疾病]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
敲除BMAL1基因促进HL-60细胞凋亡并抑制增殖
牟佼
戴进前
刘明莉
倪庆仁
张韵洁
温静
宋艳萍
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
EMRE在小鼠心肌缺血损伤中的作用及其相关机制的研究
刘峰舟
荆哲
刘明莉
张恩尉
宁江华
牟佼
《中国循环杂志》
CSCD
北大核心
2017
6
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