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野生型PTEN诱导卵巢癌SKOV3细胞生物特性改变
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作者 唐小龙 何敏 +3 位作者 江振友 庞雪云 张荣波 汪雪峰 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期602-607,613,共7页
【目的】探索野生型PTEN基因对卵巢癌细胞生物学特性的影响。【方法】将野生型PTEN基因克隆到pAdxsi腺病毒载体并感染SKOV3细胞。荧光镜下检测腺病毒载体对SKOV3细胞的感染效率;用CCK-8法检测细胞增殖的抑制效率;RT-PCR与WB分别检测PTEN... 【目的】探索野生型PTEN基因对卵巢癌细胞生物学特性的影响。【方法】将野生型PTEN基因克隆到pAdxsi腺病毒载体并感染SKOV3细胞。荧光镜下检测腺病毒载体对SKOV3细胞的感染效率;用CCK-8法检测细胞增殖的抑制效率;RT-PCR与WB分别检测PTEN mRNA与蛋白表达水平变化;免疫化学法与间接荧光法检测PTEN在细胞内的定位及细胞内NEDD4-1和RAD51等分子表达。【结果】稳定转染PTEN后,24h内PTEN分布于细胞质与核内,而72h后则主要集中于细胞核内;显著增加细胞质内NEDD4-1和细核RAD51等分子表达。【结论】野生型PTEN可影响SKOV3细胞增殖,并诱导细胞表达RAD51与NEDD4-1分子,有利于细胞DNA修复与细胞增殖抑制。 展开更多
关键词 转染 NEDD4-1 PTEN基因
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NKX6.1协同PDX1诱导人胎肝间充质干细胞分化为胰岛B样细胞 被引量:2
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作者 唐小龙 张荣波 汪雪峰 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期258-263,共6页
目的探讨NKX6.1对PDX1诱导人胎肝间充质干细胞(fetal liver-derived mesenchymal stem cells,FL-MSCs)向胰岛B细胞分化的协同作用及可能机制,以获取足够用于移植的胰岛B样细胞。方法构建含PDX1与NKX6.1双基因的重组腺病毒载体,用该载体... 目的探讨NKX6.1对PDX1诱导人胎肝间充质干细胞(fetal liver-derived mesenchymal stem cells,FL-MSCs)向胰岛B细胞分化的协同作用及可能机制,以获取足够用于移植的胰岛B样细胞。方法构建含PDX1与NKX6.1双基因的重组腺病毒载体,用该载体感染FL-MSCs并联合相应的细胞因子分步诱导,检测诱导后的细胞中PDX1和NKX6.1基因以及NGN3、NeuroD1/Beta2、MafA因子和胰岛素等多种胰腺B细胞相关分子的表达情况。结果腺病毒载体转染24h后FL-MSCs细胞即开始表达PDX1与NKX6.1基因,检测显示诱导后的细胞先后开始表达NGN3、NeuroD1和MafA等因子,持续稳定表达胰岛素等B细胞相关分子;且这些分子表达存在时序性。结论PDX1与NKX6.1联合细胞因子在体外能有效诱导FL-MSCs分化为胰岛B样细胞;可能是通过先后活化的NGN3、NeuroD1和MafA等转录因子,限定细胞向内分泌前体细胞、进一步向B内分泌前体细胞、B细胞分化发育。 展开更多
关键词 胰腺十二指肠同源框 NKX. 胎肝 间充质干细胞 腺病毒载体 前体细胞 转录因子 胰岛素 细胞分化 细胞因子诱导
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PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体的构建、鉴定与表达 被引量:1
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作者 唐小龙 张荣波 +1 位作者 汪雪峰 张文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期364-368,共5页
目的运用pADxsi系统构建带人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。方法采用基因克隆技术,将目的基因NKX6.1克隆至pShuttle-GFP-CMV中,得到pShuttle-GFP-CMV-NKX6.1;将PDX1克隆至pShuttle-CMV-GFP/CMV-NKX6.1上,替换掉GFP,得到pShuttle-CM... 目的运用pADxsi系统构建带人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。方法采用基因克隆技术,将目的基因NKX6.1克隆至pShuttle-GFP-CMV中,得到pShuttle-GFP-CMV-NKX6.1;将PDX1克隆至pShuttle-CMV-GFP/CMV-NKX6.1上,替换掉GFP,得到pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1;将CMV-PDX1/CMV-NKX6.1从pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1转移到ADxsi骨架载体上,得到pADxsi-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1,在293细胞中进行包装与扩增活病毒,病毒滴度测定;体外感染人胎肝间充质干细胞。结果分别酶切重组人PDX1与NKX6.1基因表达穿梭质粒与腺病毒载体质粒,阳性克隆均获得与理论相一致的目的条带;重组腺病毒感染人胎肝间充质干细胞比例达90%以上;RT-PCR结果表明目的基因在人胎肝间充质干细胞内能稳定表达;免疫细胞化学与间接荧光检测目的PDX1与NKX6.1蛋白分子均特异在细胞核表达。结论应用pADxsi系统重组技术成功构建了人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。 展开更多
关键词 腺病毒 胰腺十二指肠同源框1基因 NK6转录因子相关 基因座1 间充质干细胞
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