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T-bet佐剂对Ag85B抗结核DNA疫苗的免疫调节 被引量：7
1
作者 陈丽萍 张荣波 +5 位作者 胡东 吴静 张金凤 吴汉霞 李昕 牛凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期680-683,共4页
目的:构建以Th1转录因子T-bet为基因佐剂的Ag85B新型DNA疫苗,并研究其免疫调控作用。方法:RT-PCR法扩增出Ag85B基因和T-bet基因,克隆入pcDNA3.1质粒构建T-bet和Ag85B真核表达质粒,脂质体法转染重组质粒至RAW264.7细胞系,Western blot法... 目的:构建以Th1转录因子T-bet为基因佐剂的Ag85B新型DNA疫苗,并研究其免疫调控作用。方法:RT-PCR法扩增出Ag85B基因和T-bet基因,克隆入pcDNA3.1质粒构建T-bet和Ag85B真核表达质粒,脂质体法转染重组质粒至RAW264.7细胞系,Western blot法检测质粒蛋白表达情况。3次肌肉注射免疫BALB/c小鼠,末次免疫2周后,ELISA法检测血清中抗Ag85B抗体滴度。同时将脾脏淋巴细胞悬液于Ag85B刺激下培养,ELISA法检测培养液中细胞因子分泌情况。结果:质粒蛋白成功表达,并且质粒剂量与质粒蛋白表达水平呈正相关。此外,T-bet/Ag85B不仅诱导IgG2a滴度显著增高伴随IgG1显著降低,而且还刺激IL-2/IFN-γ(Th1类)分泌增加伴随IL-4/IL-10(Th2类)减少。结论:T-bet增强抗Ag85B特异性IgG2a抗体反应,并诱导显著的Th1细胞优势免疫。 展开更多
关键词 T—bet AG85B 疫苗 结核 免疫调节
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pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用 被引量：2
2
作者 胡东 杨小康 +8 位作者 王婉 邢应如 王文洋 杜昭弘 尤其 章力 陈丽萍 吴静 张荣波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1133-1136,1141,共5页
目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、p... 目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。 展开更多
关键词 自噬 结核分枝杆菌 LC3 AG85B 免疫保护
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LC3-LpqH增强Ag85B抗结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫保护作用 被引量：2
3
作者 胡东 杨小康 +5 位作者 陈功 吴静 王婉 戴京京 陈天义 张荣波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1243-1246,1250,共5页
目的探讨微管相关蛋白轻链3-脂蛋白前体-LpqH(LC3-LpqH)DNA佐剂对Ag85B抗结核分枝杆菌(MTB)DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法分别用纯化的pCMV-Ag85B、pCMV-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV质粒DNA对BALB/c小鼠进行3... 目的探讨微管相关蛋白轻链3-脂蛋白前体-LpqH(LC3-LpqH)DNA佐剂对Ag85B抗结核分枝杆菌(MTB)DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法分别用纯化的pCMV-Ag85B、pCMV-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV质粒DNA对BALB/c小鼠进行3次肌肉注射免疫。末次免疫2周后,ELISA检测血清中抗Ag85B IgG亚型及滴度。Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测血清白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用MTB标准毒株H37Rv尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏MTB载量并观察肺组织病理变化。结果与Ag85B免疫组相比,LC3-LpqH/Ag85B免疫组抗Ag85B的IgG2a水平显著提高,而IgG1水平显著降低,并伴随IL-2、IFN-γ分泌增加及IL-4、IL-10减少,肺和脾脏内MTB载量降低,肺组织病变程度减轻。结论 LC3-LpqH可显著增强Ag85B抗MTB疫苗的Th1型免疫应答,并显示较好的免疫保护效应。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 DNA疫苗 自噬 免疫保护
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自然戒断期成瘾药物依赖者CD4^+CD25^+CD127^(low)调节性T细胞的变化特征及意义 被引量：6
4
作者 王文洋 张荣波 +8 位作者 邢应如 张世武 胡东 吴静 何江 杨小康 付计锋 赵辉 胡乐林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1072-1075,共4页
目的研究自然戒断期成瘾药物依赖者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg)及外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达水平的变化,探讨成瘾药物对成瘾药物依赖者体内Treg的影响。方法采集自然戒断6个月和18个月... 目的研究自然戒断期成瘾药物依赖者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg)及外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达水平的变化,探讨成瘾药物对成瘾药物依赖者体内Treg的影响。方法采集自然戒断6个月和18个月半的成瘾药物依赖者各40例及30例健康人的外周血,使用流式细胞仪检测Treg,用RT-PCR检测PBMC中TGF-β1 mRNA表达水平。结果与对照组比较,戒断18个月组Treg、TGF-β1 mRNA含量显著增高,而戒毒6个月组未发现显著性变化。结论成瘾药物对依赖者Treg的影响是长期性的,其介导的Treg异常,可能是引起成瘾药物依赖者免疫功能紊乱的原因之一。 展开更多
关键词 成瘾药物依赖者 转化生长因子β1 调节性T细胞 自然戒断期
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TAT-Ag85B蛋白疫苗的制备和抗结核分枝杆菌效果评价 被引量：4
5
作者 张荣波 王文洋 +5 位作者 胡东 王婉 邢应如 何江 戴京京 吴静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期49-53,共5页
目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag... 目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag85B组,PBS组。重组蛋白经皮下免疫小鼠3次,末次免疫后1周处死部分小鼠,ELISA检测小鼠血清中Ag85B抗体滴度,以及脾细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的水平;用流式细胞术检测巨噬细胞经Ag85B、TAT-Ag85B蛋白刺激后表面分子CD80、CD86变化情况;剩余小鼠经尾静脉感染H37Rv结核分枝杆菌,感染后第1、2、4、8周动态监测小鼠肺和脾内结核分枝杆菌载量,并在感染后8周取肺脏进行HE染色,观察肺组织病变情况。结果成功获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;与Ag85B相比,TAT-Ag85B诱导小鼠表达高水平的Ig G和IFN-γ、IL-2,感染小鼠的脾、肺结核分枝杆菌载量明显减少,肺组织病变范围小、结核分枝杆菌数量少。另外,TAT-Ag85B增强巨噬细胞表面分子CD80/CD86的表达。结论 TAT-Ag85B蛋白疫苗增强巨噬细胞的抗原提呈能力,诱导小鼠产生强烈的Th1免疫应答,有一定的抗结核分枝杆菌保护作用。 展开更多
关键词 HIV反向转导结构域(TAT-PTD) AG85B 结核 疫苗 免疫保护
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烟曲霉感染时NADPH氧化酶通过诱导活性氧活化巨噬细胞自噬 被引量：8
6
作者 胡素侠 杨小康 何江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期190-193,共4页
目的研究NADPH氧化酶(NOX)参与烟曲霉孢子诱导巨噬细胞自噬及其作用机制。方法取对数生长期的RAW264.7细胞,随机分为3组:以烟曲霉孢子刺激的处理组、烟曲霉孢子联合NOX抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DPI)的处理组和无处理的空白组。细胞作用2 ... 目的研究NADPH氧化酶(NOX)参与烟曲霉孢子诱导巨噬细胞自噬及其作用机制。方法取对数生长期的RAW264.7细胞,随机分为3组:以烟曲霉孢子刺激的处理组、烟曲霉孢子联合NOX抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DPI)的处理组和无处理的空白组。细胞作用2 h后荧光显微镜观察细胞内二氯荧光黄亮度以检测活性氧(ROS)水平,免疫印迹法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达量,免疫荧光技术观察LC3的表达与定位。结果烟曲霉孢子刺激后RAW264.7细胞的ROS与LC3BⅡ表达水平显著升高,同时LC3呈斑点状聚集并与烟曲霉孢子共定位;以DPI抑制后ROS与LC3 BⅡ表达量与空白组相比无明显变化,并且LC3在细胞内弥散分布。结论烟曲霉感染时NOX通过产生ROS活化巨噬细胞自噬。 展开更多
关键词 自噬 烟曲霉 NADPH氧化酶 活性氧组分
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LC3-LpqH自噬靶向性抗结核DNA疫苗的制备 被引量：3
7
作者 胡东 杨小康 +5 位作者 吴静 王干勋 王文洋 祁真玉 陈功 张荣波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期581-584,共4页
目的制备结核杆菌脂蛋白抗原前体LpqH基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的抗结核DNA疫苗,探究其诱导与靶向自噬的效应。方法构建pCMV-LpqH与pCMV-LC3-LpqH重组质粒并转染RAW264.7细胞,免疫印迹法检测LC-3与LC3-LpqH的表达。转染pCMV... 目的制备结核杆菌脂蛋白抗原前体LpqH基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的抗结核DNA疫苗,探究其诱导与靶向自噬的效应。方法构建pCMV-LpqH与pCMV-LC3-LpqH重组质粒并转染RAW264.7细胞,免疫印迹法检测LC-3与LC3-LpqH的表达。转染pCMV-LpqH或pCMV-LC3-LpqH至GFP-LC3-RAW264.7细胞,免疫荧光法观察LC3-LpqH蛋白的定位。结果细胞转染pCMV-LpqH后LC-3表达水平增高。pCMV-LC3-LpqH在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性,并且LC3-LpqH与GFP-LC3体外表达后共定位于自噬体上。结论 pCMV-LC3-LpqH的表达能够增强自噬,并将LpqH抗原靶向定位于自噬体,为设计新型抗结核疫苗提供了新思路。 展开更多
关键词 自噬 结核分枝杆菌 LC3 LpqH 疫苗
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外周血中3种标记的Tregs细胞表达频率比较
8
作者 邢应如 孟阿娜 +1 位作者 胡东 张荣波 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期798-803,共6页
目的 :分析CD4+CD25High、CD4+CD25+CD127Low/–、CD4+CD25+Fox P3+3种标记的Tregs细胞比例的相关性,探讨不同荧光素组合标记Tregs细胞的鉴定效果。方法:随机抽取健康体检者60例,平均分成2组(Ⅰ组、Ⅱ组),Ⅰ组用CD25-APC/CD127-PE/CD4-F... 目的 :分析CD4+CD25High、CD4+CD25+CD127Low/–、CD4+CD25+Fox P3+3种标记的Tregs细胞比例的相关性,探讨不同荧光素组合标记Tregs细胞的鉴定效果。方法:随机抽取健康体检者60例,平均分成2组(Ⅰ组、Ⅱ组),Ⅰ组用CD25-APC/CD127-PE/CD4-FITC三色抗体标记,Ⅱ组用CD25-PE/CD127-Alexa Fluor禄R647/CD4-Per CP-Cy5.5标记;另选Ⅰ组10例,用CD25-FITC/Fox P3-PE/CD4-Per CP-Cy5.5/CD127-Alexa Fluor禄R647四色抗体标记;流式细胞仪检测,Cell Quest软件分析,比较Tregs细胞结果差异,分析Fox P3+与CD127Low/–的相关性。结果:CD25+CD127Low/–Tregs细胞Ⅱ组(7.89±1.37)%明显高于Ⅰ组(6.37±1.83)%(P=0.001),2组中CD4+CD25High和CD4+CD25+CD127Low/–的相关系数(r)分别是0.944、0.916;(94.08±1.93)%的CD25+Fox P3+细胞低表达CD127,CD25+Fox P3+和全血检测CD25+CD127Low/–的Tregs细胞有较高的相关性(r=0.846),结果差异不明显(P=0.774)。结论:CD25+CD127Low/–是Tregs细胞特异性标志,适合临床应用。全血检测Tregs细胞,用CD25-APC、CD127-PE、CD4-FITC荧光素组合检测结果与Fox P3相关度高。 展开更多
关键词 调节性T细胞 CD127 FOXP3 流式细胞仪
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