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T-bet佐剂对Ag85B抗结核DNA疫苗的免疫调节 被引量:7
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作者 陈丽萍 张荣波 +5 位作者 胡东 吴静 张金凤 吴汉霞 李昕 牛凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期680-683,共4页
目的:构建以Th1转录因子T-bet为基因佐剂的Ag85B新型DNA疫苗,并研究其免疫调控作用。方法:RT-PCR法扩增出Ag85B基因和T-bet基因,克隆入pcDNA3.1质粒构建T-bet和Ag85B真核表达质粒,脂质体法转染重组质粒至RAW264.7细胞系,Western blot法... 目的:构建以Th1转录因子T-bet为基因佐剂的Ag85B新型DNA疫苗,并研究其免疫调控作用。方法:RT-PCR法扩增出Ag85B基因和T-bet基因,克隆入pcDNA3.1质粒构建T-bet和Ag85B真核表达质粒,脂质体法转染重组质粒至RAW264.7细胞系,Western blot法检测质粒蛋白表达情况。3次肌肉注射免疫BALB/c小鼠,末次免疫2周后,ELISA法检测血清中抗Ag85B抗体滴度。同时将脾脏淋巴细胞悬液于Ag85B刺激下培养,ELISA法检测培养液中细胞因子分泌情况。结果:质粒蛋白成功表达,并且质粒剂量与质粒蛋白表达水平呈正相关。此外,T-bet/Ag85B不仅诱导IgG2a滴度显著增高伴随IgG1显著降低,而且还刺激IL-2/IFN-γ(Th1类)分泌增加伴随IL-4/IL-10(Th2类)减少。结论:T-bet增强抗Ag85B特异性IgG2a抗体反应,并诱导显著的Th1细胞优势免疫。 展开更多
关键词 T—bet AG85B 疫苗 结核 免疫调节
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pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用 被引量:2
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作者 胡东 杨小康 +8 位作者 王婉 邢应如 王文洋 杜昭弘 尤其 章力 陈丽萍 吴静 张荣波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1133-1136,1141,共5页
目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、p... 目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。 展开更多
关键词 自噬 结核分枝杆菌 LC3 AG85B 免疫保护
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自然戒断期成瘾药物依赖者CD4^+CD25^+CD127^(low)调节性T细胞的变化特征及意义 被引量:6
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作者 王文洋 张荣波 +8 位作者 邢应如 张世武 胡东 吴静 何江 杨小康 付计锋 赵辉 胡乐林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1072-1075,共4页
目的研究自然戒断期成瘾药物依赖者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg)及外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达水平的变化,探讨成瘾药物对成瘾药物依赖者体内Treg的影响。方法采集自然戒断6个月和18个月... 目的研究自然戒断期成瘾药物依赖者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg)及外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达水平的变化,探讨成瘾药物对成瘾药物依赖者体内Treg的影响。方法采集自然戒断6个月和18个月半的成瘾药物依赖者各40例及30例健康人的外周血,使用流式细胞仪检测Treg,用RT-PCR检测PBMC中TGF-β1 mRNA表达水平。结果与对照组比较,戒断18个月组Treg、TGF-β1 mRNA含量显著增高,而戒毒6个月组未发现显著性变化。结论成瘾药物对依赖者Treg的影响是长期性的,其介导的Treg异常,可能是引起成瘾药物依赖者免疫功能紊乱的原因之一。 展开更多
关键词 成瘾药物依赖者 转化生长因子β1 调节性T细胞 自然戒断期
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TAT-Ag85B蛋白疫苗的制备和抗结核分枝杆菌效果评价 被引量:4
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作者 张荣波 王文洋 +5 位作者 胡东 王婉 邢应如 何江 戴京京 吴静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期49-53,共5页
目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag... 目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag85B组,PBS组。重组蛋白经皮下免疫小鼠3次,末次免疫后1周处死部分小鼠,ELISA检测小鼠血清中Ag85B抗体滴度,以及脾细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的水平;用流式细胞术检测巨噬细胞经Ag85B、TAT-Ag85B蛋白刺激后表面分子CD80、CD86变化情况;剩余小鼠经尾静脉感染H37Rv结核分枝杆菌,感染后第1、2、4、8周动态监测小鼠肺和脾内结核分枝杆菌载量,并在感染后8周取肺脏进行HE染色,观察肺组织病变情况。结果成功获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;与Ag85B相比,TAT-Ag85B诱导小鼠表达高水平的Ig G和IFN-γ、IL-2,感染小鼠的脾、肺结核分枝杆菌载量明显减少,肺组织病变范围小、结核分枝杆菌数量少。另外,TAT-Ag85B增强巨噬细胞表面分子CD80/CD86的表达。结论 TAT-Ag85B蛋白疫苗增强巨噬细胞的抗原提呈能力,诱导小鼠产生强烈的Th1免疫应答,有一定的抗结核分枝杆菌保护作用。 展开更多
关键词 HIV反向转导结构域(TAT-PTD) AG85B 结核 疫苗 免疫保护
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