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荧光定量PCR检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率
被引量：
2
1
作者
黄骁辰
蒯兴旺
+9 位作者
杨婷婷
唐奇
李涛
季国忠
赵薇
刘振云
陈渊
仇镇宁
冯振卿
朱进
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期903-908,共6页
目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c-Met CAR病毒与c-Met CAR(GFP)病毒,感染T细胞制备c-Met CAR-T细胞与c...
目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c-Met CAR病毒与c-Met CAR(GFP)病毒,感染T细胞制备c-Met CAR-T细胞与c-Met CAR-T(GFP)细胞。Western blot检测c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)在293T细胞中表达的外源性CD3ζ蛋白。设计特异性引物应用荧光定量PCR检测CAR病毒对T细胞的感染效率,并与流式细胞术的检测结果进行比较。结果:构建c-Met CAR(GFP)质粒,荧光显微镜可观察到c-Met CAR(GFP)质粒在293T细胞上表达绿色荧光蛋白。c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)病毒感染的293T细胞可表达外源性CD3ζ蛋白。荧光定量PCR检测c-Met CAR与c-Met CAR(GFP)的感染效率分别为(52.1±1.7)%、(55.9±2.3)%。流式细胞术检测c-Met CAR(GFP)病毒感染效率为(50.7±3.6)%,两种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法能够特异性检测CAR病毒对T细胞的感染效率,该检测方法结果准确、安全,对CAR-T细胞的临床应用具有实用价值。
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关键词
嵌合抗原受体
C-MET
荧光定量PCR
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职称材料
靶向Trop-2 CAR-T细胞的制备及其体外对卵巢癌细胞杀伤作用的研究
被引量：
3
2
作者
徐亚如
周荧
+9 位作者
唐奇
刘振云
黄骁辰
杨婷婷
张慧林
赵薇
蒯兴旺
仇镇宁
朱进
冯振卿
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2017年第6期653-658,共6页
目的:制备靶向人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:运用分子克隆及基因...
目的:制备靶向人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:运用分子克隆及基因重组技术构建Trop-2 CAR;采用Western blot检测Trop-2 CAR在293T细胞中的表达;CCK-8法检测Trop-2 CAR-T细胞对卵巢癌细胞增殖的影响;ELISA检测细胞因子分泌的变化。结果:酶切鉴定及测序分析结果表明,Trop-2 CAR各基因片段连接正确;Western blot检测结果显示,该质粒能够在293T细胞中有效表达;CCK-8结果显示,制备的Trop-2 CAR-T细胞在体外能明显抑制表达Trop-2的卵巢癌细胞的增殖(P<0.05);ELISA检测结果表明Trop-2 CAR-T细胞与表达Trop-2的卵巢癌细胞共培养后,干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukin-2,IL-2)细胞因子分泌增加(P<0.01)。结论:该研究成功制备了Trop-2 CAR-T细胞,可有效抑制Trop-2表达阳性的卵巢癌细胞的增殖。
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关键词
嵌合抗原受体
Trop-2
卵巢癌
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职称材料
题名
荧光定量PCR检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率
被引量：
2
1
作者
黄骁辰
蒯兴旺
杨婷婷
唐奇
李涛
季国忠
赵薇
刘振云
陈渊
仇镇宁
冯振卿
朱进
机构
南京医科大学病理学系
南京医科大学国家卫计委抗体技术重点实验室
南京医科大学第二附属医院消化医学中心
南京医科大学附属南京医院病理科
安徽未名细胞治疗有限公司
南京医科大学第二附属医院耳鼻喉科
华东医学生物技术研究所
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期903-908,共6页
基金
国家自然科学基金(81602119
81773268)
江苏省科学技术厅重点研发专项基金(BE2016799)
文摘
目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c-Met CAR病毒与c-Met CAR(GFP)病毒,感染T细胞制备c-Met CAR-T细胞与c-Met CAR-T(GFP)细胞。Western blot检测c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)在293T细胞中表达的外源性CD3ζ蛋白。设计特异性引物应用荧光定量PCR检测CAR病毒对T细胞的感染效率,并与流式细胞术的检测结果进行比较。结果:构建c-Met CAR(GFP)质粒,荧光显微镜可观察到c-Met CAR(GFP)质粒在293T细胞上表达绿色荧光蛋白。c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)病毒感染的293T细胞可表达外源性CD3ζ蛋白。荧光定量PCR检测c-Met CAR与c-Met CAR(GFP)的感染效率分别为(52.1±1.7)%、(55.9±2.3)%。流式细胞术检测c-Met CAR(GFP)病毒感染效率为(50.7±3.6)%,两种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法能够特异性检测CAR病毒对T细胞的感染效率,该检测方法结果准确、安全,对CAR-T细胞的临床应用具有实用价值。
关键词
嵌合抗原受体
C-MET
荧光定量PCR
Keywords
chimeric antigen receptor
c-Met
qRT-PCR
分类号
R446 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
靶向Trop-2 CAR-T细胞的制备及其体外对卵巢癌细胞杀伤作用的研究
被引量：
3
2
作者
徐亚如
周荧
唐奇
刘振云
黄骁辰
杨婷婷
张慧林
赵薇
蒯兴旺
仇镇宁
朱进
冯振卿
机构
南京医科大学病理学系
南京医科大学国家卫计委抗体技术重点实验室
南京医科大学第二附属医院耳鼻喉科
安徽未名细胞治疗有限公司
南京医科大学附属南京妇幼保健院妇产科
南京军区军事医学研究所
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2017年第6期653-658,共6页
基金
国家自然科学基金(81602119)
江苏省科学技术厅重点研发专项基金(BE2016799)
文摘
目的:制备靶向人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:运用分子克隆及基因重组技术构建Trop-2 CAR;采用Western blot检测Trop-2 CAR在293T细胞中的表达;CCK-8法检测Trop-2 CAR-T细胞对卵巢癌细胞增殖的影响;ELISA检测细胞因子分泌的变化。结果:酶切鉴定及测序分析结果表明,Trop-2 CAR各基因片段连接正确;Western blot检测结果显示,该质粒能够在293T细胞中有效表达;CCK-8结果显示,制备的Trop-2 CAR-T细胞在体外能明显抑制表达Trop-2的卵巢癌细胞的增殖(P<0.05);ELISA检测结果表明Trop-2 CAR-T细胞与表达Trop-2的卵巢癌细胞共培养后,干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukin-2,IL-2)细胞因子分泌增加(P<0.01)。结论:该研究成功制备了Trop-2 CAR-T细胞,可有效抑制Trop-2表达阳性的卵巢癌细胞的增殖。
关键词
嵌合抗原受体
Trop-2
卵巢癌
Keywords
chimeric antigen receptor
Trop-2
ovarian cancer
分类号
R737.31 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
荧光定量PCR检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率
黄骁辰
蒯兴旺
杨婷婷
唐奇
李涛
季国忠
赵薇
刘振云
陈渊
仇镇宁
冯振卿
朱进
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
靶向Trop-2 CAR-T细胞的制备及其体外对卵巢癌细胞杀伤作用的研究
徐亚如
周荧
唐奇
刘振云
黄骁辰
杨婷婷
张慧林
赵薇
蒯兴旺
仇镇宁
朱进
冯振卿
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2017
3
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