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降解氨基甲酸乙酯的酯酶挖掘及酶学性质表征
1
作者
刘庆涛
朱司宝
+5 位作者
王天文
李闯
钱森和
张温清
程凡
田淑芳
《食品科学》
EI
CAS
北大核心
2025年第2期99-107,共9页
本研究在NCBI数据库中挖掘出4个在pH 4.5及7.0条件下均具有氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)降解能力的酯酶(ES1、ES5、ES8和ES9),实现它们在大肠杆菌中的可溶性表达,并对其进行纯化及酶学性质表征。结果表明,ES1、ES5、ES8和ES9最适...
本研究在NCBI数据库中挖掘出4个在pH 4.5及7.0条件下均具有氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)降解能力的酯酶(ES1、ES5、ES8和ES9),实现它们在大肠杆菌中的可溶性表达,并对其进行纯化及酶学性质表征。结果表明,ES1、ES5、ES8和ES9最适温度分别为70、70、55℃及55℃,ES1、ES5、ES9最适pH值呈碱性,ES8呈中性;4种酶在温度高于45℃或pH值低于5.0条件下稳定性显著降低;4种酶的活性受到Fe^(3+)、Co^(2+)、Cu^(2+)的强烈抑制;4种酶在体积分数10%乙醇存在条件下,可分别保持50.48%、48.44%、42.60%及33.59%的酶活力。4种酶在质量分数为5%NaCl条件下,可分别保持24.09%、20.41%、16.11%及10.73%的酶活力。4种酶在pH 4.5条件下对EC的米氏常数(Km)值分别为210.7、213.8、256.2 mmol/L及127.2 mmol/L,催化常数(kcat)/米氏常数(Km)值分别为214.31、203.20、161.46 L/(mol·s)及257.43 L/(mol·s)。结构分析推测,ES9底物通道入口较窄,可能影响EC的进入,从而影响ES9对EC的最大反应速率;而ES9具有相对较高的EC亲和力,可能归因于ES9与EC之间较强的氢键作用力。本研究获得了具有良好乙醇耐受性及EC水解性能的酯酶,丰富了EC水解酶酶库,为未来控制低酒精度的传统发酵食品中EC含量提供了新方法。
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关键词
氨基甲酸乙酯
氨基甲酸乙酯水解酶
酯酶
传统发酵食品
食品安全
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职称材料
题名
降解氨基甲酸乙酯的酯酶挖掘及酶学性质表征
1
作者
刘庆涛
朱司宝
王天文
李闯
钱森和
张温清
程凡
田淑芳
机构
安徽
工程大学生物与食品工程学院
芜湖市绿色食品产业研究院
有限公司
安徽宣酒集团股份有限公司研发中心
出处
《食品科学》
EI
CAS
北大核心
2025年第2期99-107,共9页
基金
国家自然科学基金青年科学基金项目(32302246)
安徽省自然科学基金项目(2208085QC97,2308085MC67)
+1 种基金
安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2021A0510)
安徽工程大学校级科研项目(2021YQQ044,2022YQQ070,Xjky2022092,2022YQQ063)。
文摘
本研究在NCBI数据库中挖掘出4个在pH 4.5及7.0条件下均具有氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)降解能力的酯酶(ES1、ES5、ES8和ES9),实现它们在大肠杆菌中的可溶性表达,并对其进行纯化及酶学性质表征。结果表明,ES1、ES5、ES8和ES9最适温度分别为70、70、55℃及55℃,ES1、ES5、ES9最适pH值呈碱性,ES8呈中性;4种酶在温度高于45℃或pH值低于5.0条件下稳定性显著降低;4种酶的活性受到Fe^(3+)、Co^(2+)、Cu^(2+)的强烈抑制;4种酶在体积分数10%乙醇存在条件下,可分别保持50.48%、48.44%、42.60%及33.59%的酶活力。4种酶在质量分数为5%NaCl条件下,可分别保持24.09%、20.41%、16.11%及10.73%的酶活力。4种酶在pH 4.5条件下对EC的米氏常数(Km)值分别为210.7、213.8、256.2 mmol/L及127.2 mmol/L,催化常数(kcat)/米氏常数(Km)值分别为214.31、203.20、161.46 L/(mol·s)及257.43 L/(mol·s)。结构分析推测,ES9底物通道入口较窄,可能影响EC的进入,从而影响ES9对EC的最大反应速率;而ES9具有相对较高的EC亲和力,可能归因于ES9与EC之间较强的氢键作用力。本研究获得了具有良好乙醇耐受性及EC水解性能的酯酶,丰富了EC水解酶酶库,为未来控制低酒精度的传统发酵食品中EC含量提供了新方法。
关键词
氨基甲酸乙酯
氨基甲酸乙酯水解酶
酯酶
传统发酵食品
食品安全
Keywords
ethyl carbamate
ethyl carbamate-hydrolyzing enzyme
esterase
traditional fermented foods
food safety
分类号
Q814.9 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
降解氨基甲酸乙酯的酯酶挖掘及酶学性质表征
刘庆涛
朱司宝
王天文
李闯
钱森和
张温清
程凡
田淑芳
《食品科学》
EI
CAS
北大核心
2025
0
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