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重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究
被引量：
3
1
作者
周昭
范清林
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2016年第1期13-16,20,共5页
在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构...
在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构建重组表达质粒p ET30a-6His-sumo-rh KGF1,转入E.coli BL21(DE3)中,表达融合蛋白。融合蛋白经Ni-NTA纯化后,切除SUMO标签,再经Ni-NTA纯化获得ΔN23 rh KGF-1蛋白。CCK-8法测定其对人永生化表皮细胞(Ha Cat细胞)的促增殖作用。结果表明,成功构建了p ET30a-6His-sumo-rh KGF1表达质粒,测序结果与预期一致。实现了融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,经纯化、酶切获得了ΔN23 rh KGF-1蛋白。制备的ΔN23 rh KGF-1蛋白具有促进Ha Cat细胞增殖的作用,EC50=6.11 ng/m L。
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关键词
重组人角质细胞生长因子-1
SUMO蛋白
原核表达
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职称材料
不同接头的白蛋白干扰素在毕赤酵母中表达的研究
被引量：
3
2
作者
刘磊
范清林
+3 位作者
王中安
张玲
邹文艺
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2012年第2期100-102,共3页
毕赤酵母作为比较成熟的真核表达系统[1],它具有许多优点,表达产物直接分泌到胞外,这有利于产物的分离纯化。白蛋白干扰素在毕赤酵母中表达的研究也具有很重要的意义。研究白蛋白与干扰素之间的接头蛋白不同对表达量的影响。通过重叠PC...
毕赤酵母作为比较成熟的真核表达系统[1],它具有许多优点,表达产物直接分泌到胞外,这有利于产物的分离纯化。白蛋白干扰素在毕赤酵母中表达的研究也具有很重要的意义。研究白蛋白与干扰素之间的接头蛋白不同对表达量的影响。通过重叠PCR构建不同接头的白蛋白干扰素重组子,然后分别用salⅠ酶切线性化,通过电转仪转入毕赤酵母SMD1168,在MD板上进行培养,分别挑取10个克隆进行甲醇诱导表达,筛选出表达量最高的一个。最后在相同的条件下,分别将表达量高的进行诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,由于表达产物中有杂蛋白,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定融合白蛋白干扰素的表达量,由已知浓度的白蛋白干扰素标准曲线,可以计算出不同接头的白蛋白干扰素的表达量,这对工业化生产具有指导意义。
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关键词
白蛋白干扰素(HSA-IFN)
表达
毕赤酵母
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职称材料
DNA shuffling技术提高干扰素比活性的研究
被引量：
1
3
作者
尼钢钢
范清林
+1 位作者
胡伟伟
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第5期14-18,共5页
DNA shuffling技术可以定向进化干扰素,获得比rhIFN-α2b标准品更高比活的干扰素。rhIFN-α2b基因与Infergen基因用DNaseI酶切成30～50 bp小片段,回收之后进行无引物PCR重聚和有引物PCR扩增基因。将重组基因连接到载体pUC19中,转化至DH...
DNA shuffling技术可以定向进化干扰素,获得比rhIFN-α2b标准品更高比活的干扰素。rhIFN-α2b基因与Infergen基因用DNaseI酶切成30～50 bp小片段,回收之后进行无引物PCR重聚和有引物PCR扩增基因。将重组基因连接到载体pUC19中,转化至DH5α并挑选阳性克隆测序。将测序正确的突变基因连接到载体pET30a中并转化至BL21(DE3)中,然后诱导蛋白表达、SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot分析。经过表达细胞诱导、细胞裂解、包涵体变性、复性和单克隆抗体亲和层析之后,获得高纯度的重组干扰素。经测定纯化后的重组干扰素比活达到5.8×108IU/mg,比rhIFN-α2b标准品高出5倍左右。实验结果证明此实验方法对提高干扰素的比活是有效的,可以获得比标准品更高比活的干扰素。
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关键词
DNA
SHUFFLING
干扰素
酶切
比活
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职称材料
题名
重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究
被引量：
3
1
作者
周昭
范清林
宋礼华
机构
安徽
大学生命科学学院
安徽安科生物股份有限公司
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2016年第1期13-16,20,共5页
文摘
在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构建重组表达质粒p ET30a-6His-sumo-rh KGF1,转入E.coli BL21(DE3)中,表达融合蛋白。融合蛋白经Ni-NTA纯化后,切除SUMO标签,再经Ni-NTA纯化获得ΔN23 rh KGF-1蛋白。CCK-8法测定其对人永生化表皮细胞(Ha Cat细胞)的促增殖作用。结果表明,成功构建了p ET30a-6His-sumo-rh KGF1表达质粒,测序结果与预期一致。实现了融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,经纯化、酶切获得了ΔN23 rh KGF-1蛋白。制备的ΔN23 rh KGF-1蛋白具有促进Ha Cat细胞增殖的作用,EC50=6.11 ng/m L。
关键词
重组人角质细胞生长因子-1
SUMO蛋白
原核表达
Keywords
recombinant human keratinocyte growth factor-1
SUMO protein
prokaryotic expression
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
不同接头的白蛋白干扰素在毕赤酵母中表达的研究
被引量：
3
2
作者
刘磊
范清林
王中安
张玲
邹文艺
宋礼华
机构
安徽
大学生命科学学院
安徽安科生物股份有限公司
安徽
医科大学基础医学院
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2012年第2期100-102,共3页
基金
安徽省科技攻关项目(06013063A)
文摘
毕赤酵母作为比较成熟的真核表达系统[1],它具有许多优点,表达产物直接分泌到胞外,这有利于产物的分离纯化。白蛋白干扰素在毕赤酵母中表达的研究也具有很重要的意义。研究白蛋白与干扰素之间的接头蛋白不同对表达量的影响。通过重叠PCR构建不同接头的白蛋白干扰素重组子,然后分别用salⅠ酶切线性化,通过电转仪转入毕赤酵母SMD1168,在MD板上进行培养,分别挑取10个克隆进行甲醇诱导表达,筛选出表达量最高的一个。最后在相同的条件下,分别将表达量高的进行诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,由于表达产物中有杂蛋白,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定融合白蛋白干扰素的表达量,由已知浓度的白蛋白干扰素标准曲线,可以计算出不同接头的白蛋白干扰素的表达量,这对工业化生产具有指导意义。
关键词
白蛋白干扰素(HSA-IFN)
表达
毕赤酵母
Keywords
albumin interferon （HSA-IFN）
expression
Pichia pastoris
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
DNA shuffling技术提高干扰素比活性的研究
被引量：
1
3
作者
尼钢钢
范清林
胡伟伟
宋礼华
机构
安徽
大学生命科学学院
安徽安科生物股份有限公司
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第5期14-18,共5页
基金
安徽省科技攻关项目(06013063A)
文摘
DNA shuffling技术可以定向进化干扰素,获得比rhIFN-α2b标准品更高比活的干扰素。rhIFN-α2b基因与Infergen基因用DNaseI酶切成30～50 bp小片段,回收之后进行无引物PCR重聚和有引物PCR扩增基因。将重组基因连接到载体pUC19中,转化至DH5α并挑选阳性克隆测序。将测序正确的突变基因连接到载体pET30a中并转化至BL21(DE3)中,然后诱导蛋白表达、SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot分析。经过表达细胞诱导、细胞裂解、包涵体变性、复性和单克隆抗体亲和层析之后,获得高纯度的重组干扰素。经测定纯化后的重组干扰素比活达到5.8×108IU/mg,比rhIFN-α2b标准品高出5倍左右。实验结果证明此实验方法对提高干扰素的比活是有效的,可以获得比标准品更高比活的干扰素。
关键词
DNA
SHUFFLING
干扰素
酶切
比活
Keywords
DNA shuffling
interferon
enzyme digest
specific activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q511 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究
周昭
范清林
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2016
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
不同接头的白蛋白干扰素在毕赤酵母中表达的研究
刘磊
范清林
王中安
张玲
邹文艺
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2012
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
DNA shuffling技术提高干扰素比活性的研究
尼钢钢
范清林
胡伟伟
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013
1
在线阅读
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职称材料
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