人sTRAIL基因的克隆、表达纯化及对人A549细胞的抗肿瘤活性作用 被引量：8

1

作者 范清林 魏伟 +1 位作者 邹文艺 宋礼华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期228-233,共6页

目的人TRAIL基因胞外区片段(114-281氨基酸残基,sTRAIL)的克隆、表达、纯化及对人肺腺癌A549细胞的抗肿瘤活性研究。方法采用PCR技术从人胎盘和肺cD-NA文库中扩增出全长人TRAIL基因,克隆到pUC19质粒载体上进行测序。然后再采用PCR技术,... 目的人TRAIL基因胞外区片段(114-281氨基酸残基,sTRAIL)的克隆、表达、纯化及对人肺腺癌A549细胞的抗肿瘤活性研究。方法采用PCR技术从人胎盘和肺cD-NA文库中扩增出全长人TRAIL基因,克隆到pUC19质粒载体上进行测序。然后再采用PCR技术,以全长人TRAIL基因为模板,扩增出sTRAIL基因片段并定向克隆到pET-11 a表达载体中,转化大肠杆菌BL21进行表达。表达后的产物经变性、复性和分离纯化,纯化后的sTRAIL用结晶紫染色法和流式细胞仪法测定其对人肺癌细胞A549的细胞毒性作用。结果从人胎盘和肺cDNA文库中都能扩增出全长人TRAIL基因,经测序表明与已发表的人TRAIL基因序列一致。扩增出的人sTRAIL基因克隆到表达质粒载体pET-11a,经IPTG诱导表达,表达量占细菌全菌蛋白的50%,纯化后的sTRAIL纯度大于98%,结晶紫法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性作用的IC50为(24±5.2)μg.L-1,流式细胞仪法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性具有明显的效应-时间依赖关系。结论本实验成功地克隆了人sTRAIL基因并实现其高表达,摸索出包涵体sTRAIL的变性、复性及其纯化方法,纯化后的sTRAIL蛋白对人A549肺癌细胞具有明显的细胞毒性作用,为进一步研究其功能与临床应用奠定了基础。 展开更多

关键词 人sTRAIL基因 克隆 表达 细胞毒性 A549细胞

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ErbB2高表达的人乳腺癌原位移植瘤裸鼠模型的建立 被引量：9

2

作者 沈国栋 赵婷 +4 位作者 张安莉 凌斌 刘兢 宋礼华 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1391-1394,共4页

目的采用人乳腺癌细胞株BT-474建立稳定高表达ErbB2的人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,选择合适的模型制作方法。方法实验前1d在36只裸鼠颈部皮下埋植0.5mg17β雌二醇缓释片,并随机分为3组:原位组将5×106个BT-474细胞接种于裸鼠左侧第二乳... 目的采用人乳腺癌细胞株BT-474建立稳定高表达ErbB2的人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,选择合适的模型制作方法。方法实验前1d在36只裸鼠颈部皮下埋植0.5mg17β雌二醇缓释片,并随机分为3组:原位组将5×106个BT-474细胞接种于裸鼠左侧第二乳房垫内,胁部皮下组将同样数量的BT-474细胞接种于裸鼠左侧胁部皮下,腋窝组则接种于裸鼠左侧腋窝内;观察3组裸鼠荷瘤情况及移植瘤病理组织学特点,并采用免疫组化方法动态监测移植瘤的ErbB2表达情况。结果 3组裸鼠的荷瘤率均为100%,都保持了原发肿瘤高表达ErbB2的特点;和两组对照相比,原位组肿瘤形状、生长速度及细胞增殖与血管生成等生物学特征一致性更强;此外,原位组的肿瘤对治疗药物处理也有良好反应。结论 BT-474细胞接种于乳房垫内比胁部皮下及腋窝建立的裸鼠移植瘤模型更适于进行抗ErbB2抗体等药物的药理学研究。 展开更多

关键词 乳腺癌 ERBB2 BT-474 治疗性抗体 裸鼠 动物模型

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白蛋白聚乳酸缓释微球的制备及体外释放研究 被引量：7

3

作者 刘世芸 徐超 +1 位作者 冯乙巳 宋礼华 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1584-1587,共4页

文章研究了复乳法制备聚乳酸白蛋白复合微球和白蛋白的体外释放。以包封率为指标，通过正交实验优化制备工艺条件；对复合微球的大小、形态、负载率和体外释药进行了研究。结果表明制备的复合微球外观圆整，粒径主要分布在10-μm，白蛋... 文章研究了复乳法制备聚乳酸白蛋白复合微球和白蛋白的体外释放。以包封率为指标，通过正交实验优化制备工艺条件；对复合微球的大小、形态、负载率和体外释药进行了研究。结果表明制备的复合微球外观圆整，粒径主要分布在10-μm，白蛋白的包封率为（85．25±2．5）％，负载率为（14．52±0．42）％。该复合微球在体外缓释白蛋白达27d以上，主要通过扩散控释机制，缓释曲线符合Higuchi方程。 展开更多

关键词 人血清白蛋白 聚乳酸 微球 体外释放

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丹皮药材及其伪品、混淆品核糖体rDNA ITS2的序列分析 被引量：4

4

作者 刘海兵 宋社吾 +3 位作者 刘道芳 宋文成 冯艺戎 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期33-36,共4页

分析安徽道地药材丹皮(Paeonia suffruticosa Andr)及其伪品、混淆品核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS2)的序列。分析丹皮的分子遗传多样性,为丹皮的真品药材基原鉴定提供分子依据。采用DNA克隆测序技术对从不同市场购得的丹皮样品及其伪... 分析安徽道地药材丹皮(Paeonia suffruticosa Andr)及其伪品、混淆品核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS2)的序列。分析丹皮的分子遗传多样性,为丹皮的真品药材基原鉴定提供分子依据。采用DNA克隆测序技术对从不同市场购得的丹皮样品及其伪品、混淆品的ITS2基因进行测序分析研究。丹皮与其伪品川赤芍、亳州芍药的rDNA-ITS2序列长度均为412bp。排序比较发现不同市场上的丹皮样品rDNA-ITS2序列变异位点丰富。鉴定出与丹皮真品(黄沙与白沙)及伪品的rDNA-ITS2序列完全相同的样品。其他样品的rDNA-ITS2序列与丹皮真品的差异明显。通过丹皮ITS2序列差异比较分析。ITS2序列可以作为鉴别丹皮药材真伪的一种手段。 展开更多

关键词 牡丹皮 ITS2序列 DNA测序

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重组人生长激素长效缓释的研究进展 被引量：2

5

作者 刘世芸 宋文成 +1 位作者 冯乙巳 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期4-7,共4页

重组人生长激素长效缓释制剂可提高药物生物利用度,延长药物半衰期,减少药物不良反应,给疾病的临床治疗提供了更多的手段和可能。从微球、脂质体、化学修饰等方面综述了重组人生长激素长效缓释的研究进展。

关键词 重组人生长激素 微球 脂质体 长效缓释

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PTD-BDNF融合基因克隆、表达和纯化 被引量：1

6

作者 裴明军 范清林 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期21-23,共3页

构建含蛋白转导结构域(PTD)与脑源性神经营养因子(BDNF)融合基因的质粒,并在大肠肝菌中表达。用PCR扩增PTD-BDNF融合基因,经DNA测序无误后插入表达质粒pJW2构建质粒pJPB,转化大肠杆菌并进行PTD-BDNF蛋白的诱导表达和纯化。结果DNA序列... 构建含蛋白转导结构域(PTD)与脑源性神经营养因子(BDNF)融合基因的质粒,并在大肠肝菌中表达。用PCR扩增PTD-BDNF融合基因,经DNA测序无误后插入表达质粒pJW2构建质粒pJPB,转化大肠杆菌并进行PTD-BDNF蛋白的诱导表达和纯化。结果DNA序列分析表明构建含有PTD-BDTF融合基因的质粒与设计相同,PTD-BDNF融合蛋白在大肠杆菌中获得表达并进一步纯化。 展开更多

关键词 蛋白转导结构域 脑源性神经营养因子 血脑屏障

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重组人生长激素对急性肝坏死小鼠肝脏的组织学影响

7

作者 熊峰 宁惠娟 +5 位作者 金瑞 徐健 谢贤春 吉中和 郎振为 段钟平 《首都医科大学学报》 CAS 2005年第2期175-178,共4页

目的　观察重组人生长激素(rhGH)对肿瘤坏死因子-α(TNF -α)+D 氨基半乳糖(D -Gal)诱导的急性肝坏死模型小鼠的肝组织学影响。方法　建立小鼠急性肝坏死模型,将50 只雄性BALB/C小鼠随机平均分为5 组,分别为空白对照组(A)、模型对照组(B... 目的　观察重组人生长激素(rhGH)对肿瘤坏死因子-α(TNF -α)+D 氨基半乳糖(D -Gal)诱导的急性肝坏死模型小鼠的肝组织学影响。方法　建立小鼠急性肝坏死模型,将50 只雄性BALB/C小鼠随机平均分为5 组,分别为空白对照组(A)、模型对照组(B)及不同给药剂量的实验组(C、D、E),B组予以腹腔注射D -Gal+TNF -α,实验组小鼠分别腹腔注射与B组等量的D Gal+TNF α及rhGH(给药剂量C组<D组<E组),A组小鼠腹腔注射等量生理盐水。一旦有小鼠出现濒死表现,即处死所有小鼠,每只小鼠取肝组织1块送光镜观察,同时每组取2 只小鼠的肝组织作电镜观察。A组与B组小鼠于处死前送检血清ALT及AST。结果　A组血清ALT、AST明显高于B组,2 组相比差异有统计学意义(P=0.000,P=0.000)。E组小鼠肝脏坏死面积明显小于B组,2组相比差异有统计学意义(P=0.005),C组及D组小鼠肝脏坏死面积与B组相比差异无统计学意义(分别为P=0.303及P=0.020)。结论　rhGH可以减轻TNF- α+D Gal诱导的小鼠急性肝坏死,其保护作用与使用剂量有关。 展开更多

关键词 重组人生长激素 急性肝坏死 肿瘤坏死因子-α BALB/C小鼠 D-氨基半乳糖 血清ALT 腹腔注射 给药剂量 肝脏坏死 TNF-α 统计学 肝组织学 模型小鼠 方法建立 生理盐水 光镜观察 电镜观察 RHGH 使用剂量 保护作用 对照组 实验组

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益气通便颗粒通便作用研究

8

作者 刘兵 宋杜吾 +1 位作者 王钦茂 刘道芳 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期541-544,共4页

目的:对益气通便颗粒(何首乌、火麻仁、升麻、炙黄芪、枳壳等)进行了与临床功能主治有关的主要药效学研究。方法:观察益气通便颗粒对小鼠失水模型和地芬诺酯模型的通便作用、对阿托品抑制排便的对抗作用、对大鼠肠管中水分含量以及对家... 目的:对益气通便颗粒(何首乌、火麻仁、升麻、炙黄芪、枳壳等)进行了与临床功能主治有关的主要药效学研究。方法:观察益气通便颗粒对小鼠失水模型和地芬诺酯模型的通便作用、对阿托品抑制排便的对抗作用、对大鼠肠管中水分含量以及对家兔在体回肠收缩的影响。结果:益气通便颗粒能使失水模型小鼠的首次排便时间缩短,粪便点数和重量增加;使地芬诺酯模型小鼠的干粪和稀粪点数增加;拮抗阿托品对炭末推进的抑制作用;增加大鼠肠管水分含量;和显著促进家兔在体肠管的收缩活动,使回肠的收缩幅度和活力增加。结论:益气通便颗粒的药效作用与功能、主治一致。 展开更多

关键词 益气通便颗粒 通便作用 回肠收缩 小鼠 大鼠 家兔

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聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的药效学研究 被引量：8

9

作者 张钧 邹文艺 +2 位作者 戎隆富 范清林 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期37-39,共3页

比较研究聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)与重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)升高环磷酰胺所致外周血白细胞降低的Blab/c小鼠的白细胞效果。结果显示一次注射聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子与多次注射重组人粒... 比较研究聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)与重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)升高环磷酰胺所致外周血白细胞降低的Blab/c小鼠的白细胞效果。结果显示一次注射聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子与多次注射重组人粒细胞集落刺激因子的药效作用相当,且各剂量间呈良好的量效关系。 展开更多

关键词 聚乙二醇 重组人粒细胞集落刺激因子 药效学 环磷酰胺 量效关系

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人血清白蛋白和粒细胞集落刺激因子融合蛋白的克隆表达 被引量：4

10

作者 李道远 邹文艺 +1 位作者 范清林 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期34-36,共3页

构建重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子(HSA-hG-CSF)表达载体,用毕赤酵母表达该重组蛋白。PCR扩增出人血清白蛋白基因(HSA)和粒细胞集落刺激因子基因(hG-CSF),GGGGS作为小肽接头,采用重叠PCR的方法将HSA和hG-CSF拼接起来,与质粒载体pP... 构建重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子(HSA-hG-CSF)表达载体,用毕赤酵母表达该重组蛋白。PCR扩增出人血清白蛋白基因(HSA)和粒细胞集落刺激因子基因(hG-CSF),GGGGS作为小肽接头,采用重叠PCR的方法将HSA和hG-CSF拼接起来,与质粒载体pPIC9K连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α。抽提质粒,用SalI酶切重组质粒,电转化法导入毕赤酵母SMD1168中,通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程菌。Western-blotting分析表明融合蛋白具有粒细胞集落刺激因子免疫原性。NFS-60细胞测活实验分析表明体外活性达到约4.0×107IU/mg。 展开更多

关键词 HSA-hG-CSF 融合蛋白 毕赤酵母 表达

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重组人粒细胞集落刺激因子的表达、纯化以及PEG修饰 被引量：2

11

作者 张兵 邹文艺 +2 位作者 戎隆富 范清林 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期36-39,共4页

重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)经大肠杆菌温度诱导表达后,其表达产物以包涵体形式存在,包涵体经过变性、复性和分离纯化等步骤处理后得到纯化的rhG-CSF。在一定的实验条件下用单甲氧基聚乙二醇活性酯(mPEG20k-NHS)对rhG-CSF进行化... 重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)经大肠杆菌温度诱导表达后,其表达产物以包涵体形式存在,包涵体经过变性、复性和分离纯化等步骤处理后得到纯化的rhG-CSF。在一定的实验条件下用单甲氧基聚乙二醇活性酯(mPEG20k-NHS)对rhG-CSF进行化学修饰,所得修饰产物经分离纯化后获得PEG20K-rhG-CSF偶联物。与修饰前的rhG-CSF相比较,尽管修饰后的rhG-CSF体外生物学活性下降至修饰前的20%左右,但其在体内的作用时间能够得到显著的延长,药效有了明显提高。 展开更多

关键词 重组人粒细胞集落刺激因子 表达 纯化 单甲氧基聚乙二醇 生物学活性

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hTNFRII-Fc融合基因的克隆及在CHO细胞中的表达 被引量：2

12

作者 张玲 范清林 +2 位作者 王参军 邹文艺 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期65-68,共4页

构建人肿瘤坏死因子受体II胞外区(TNFRII)和人免疫球蛋白(IgG1)Fc段的融合基因真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达融合蛋白hTNFRII-Fc。用全合成重叠延伸PCR方法克隆TNFRII胞外区的基因片段,再与(IgG1)Fc段拼接起来形成hTNFR... 构建人肿瘤坏死因子受体II胞外区(TNFRII)和人免疫球蛋白(IgG1)Fc段的融合基因真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达融合蛋白hTNFRII-Fc。用全合成重叠延伸PCR方法克隆TNFRII胞外区的基因片段,再与(IgG1)Fc段拼接起来形成hTNFRII-Fc融合基因,经HindIII、EcoRI双酶切后插入至pEE14中构建pEE14-TNFRII-Fc真核表达载体,脂质体转染至CHO细胞中进行表达及鉴定。ELISA检测到转染hTNFRII-Fc基因的CHO细胞培养上清中含有hTNFRII-Fc蛋白,SDS-PAGE与Western-blot鉴定证实其为hTNFRII-Fc蛋白,为进一步研究该融合蛋白在CHO细胞稳定表达及应用于类风湿关节炎等自身免疫性疾病临床治疗奠定了一定的研究基础。 展开更多

关键词 人肿瘤坏死因子受体II TNFRII-Fc 真核表达 类风湿关节炎

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长效重组药物研究进展 被引量：4

13

作者 张兵 邹文艺 +1 位作者 范清林 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期9-12,共4页

生物重组药物半衰期的长短显著影响药物在使用时的剂量以及治疗的效果,所以延长其在体内的生物半衰期,防止药物在体内迅速降解成为现在药物研究的重要方向之一。针对目前较为广泛使用的几种重组药物长效化方法,如定点突变、化学修饰、... 生物重组药物半衰期的长短显著影响药物在使用时的剂量以及治疗的效果,所以延长其在体内的生物半衰期,防止药物在体内迅速降解成为现在药物研究的重要方向之一。针对目前较为广泛使用的几种重组药物长效化方法,如定点突变、化学修饰、基因融合、药物剂型和给药方式的改变等,结合目前已经上市的和正在研发中的长效重组药物进行了综述。 展开更多

关键词 半衰期 重组药物

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包涵体蛋白的层析复性技术研究进展 被引量：2

14

作者 高飞 范清林 +1 位作者 邹文艺 宋礼华 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第2期56-59,71,共5页

包涵体蛋白的复性是生物工程下游技术中的一个重要难题。层析法用于蛋白质复性是一种较新的、适用于大多数蛋白的方法。其原理是将层析技术应用于蛋白质复性和纯化,使变性蛋白质在层析柱上重折叠为正确的空间构象,在洗脱的同时实现部分... 包涵体蛋白的复性是生物工程下游技术中的一个重要难题。层析法用于蛋白质复性是一种较新的、适用于大多数蛋白的方法。其原理是将层析技术应用于蛋白质复性和纯化,使变性蛋白质在层析柱上重折叠为正确的空间构象,在洗脱的同时实现部分纯化。本文详细介绍了蛋白质在5种层析柱上的复性方法、原理、应用及研究的新进展,为层析法对蛋白质复性的进一步应用提供依据。 展开更多

关键词 包涵体 蛋白质复性 层析复性 重折叠

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药品生产环境中的新型自动监控系统 被引量：1

15

作者 陆广新 《生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期46-46,4,共2页

通过对药品生产环境重要性和保证生产环境的手段分析 ,介绍了一种新型的用于药品生产洁净室的自动监控方法 。

关键词 药品 生产环境 自动监控系统 洁净室

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