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靶向沉默DNMT3A对小鼠肺成纤维细胞胶原沉积、增殖及迁移活性的影响
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作者 汪先晨 尤峻柏 +4 位作者 凌辉 范家好 陈齐 陶辉 沙纪名 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第1期66-72,共7页
目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml T... 目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml TGF-β_(1)作用24 h诱导PFs细胞活化,并用小干扰RNA构建DNMT3A沉默模型;实验分为Control组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+siRNA-NC组和TGF-β_(1)+siRNA-DNMT3A组。应用Western blot方法检测DNMT3A、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白表达变化;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测DNMT3A、α-SMA、CollagenⅠ的mRNA表达变化;CCK-8与EdU染色检测PFs增殖能力;划痕实验与Transwell迁移实验检测PFs迁移能力。结果与Control组相比,TGF-β_(1)诱导活化的PFs细胞组中DNMT3A升高(P<0.01),纤维化与增殖相关指标α-SMA、CollagenⅠ的蛋白及mRNA水平也升高(均P<0.05),同时PFs的增殖与迁移能力升高(均P<0.0001)。而与siRNA-NC组相比,在DNMT3A沉默组中通过Western blot法检测DNMT3A(P<0.0001)及相关指标α-SMA(P<0.01)、CollagenⅠ(P<0.01)的蛋白表达水平均降低,同时通过RT-qPCR法检测DNMT3A、α-SMA及CollagenⅠ的mRNA水平也均降低(P<0.001),并且PFs细胞的增殖(P<0.01)和迁移能力(P<0.05)较对照组下降。结论沉默DNMT3A能够抑制胶原的沉积及PFs的增殖,DNMT3A可以促进PFs的增殖和迁移能力,进而促进PFs的活化以及肺纤维化的发展,这一过程可能受到DNA甲基化修饰的调控。 展开更多
关键词 DNMT3A DNA甲基化 肺成纤维细胞 增殖 迁移 肺纤维化
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PTEN过表达对小鼠心脏成纤维细胞自噬的影响
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作者 何缓缓 江舜祥 +1 位作者 陶辉 曹炜 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第5期877-883,共7页
目的探讨磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)过表达对小鼠原代心脏成纤维细胞自噬的影响。方法购入1~3 d小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离心脏成纤维细胞进行培养。细胞贴壁生长后使用雷帕霉素(Rapa)刺激构建心脏成纤维细胞自噬模型,... 目的探讨磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)过表达对小鼠原代心脏成纤维细胞自噬的影响。方法购入1~3 d小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离心脏成纤维细胞进行培养。细胞贴壁生长后使用雷帕霉素(Rapa)刺激构建心脏成纤维细胞自噬模型,模型构建成功后,向细胞转染PTEN过表达质粒(PTEN过表达组)和空载质粒(空载组),培养24~48 h。通过Western blot、RT-qPCR的方法在分子层面对PTEN、自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、苄青素1(Beclin1)和纤维化标志物胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)的表达进行检测;通过mCherry-GFP-LC3荧光染色测定自噬过程,检测心脏成纤维细胞自噬活性的变化。并通过透射电镜观察心脏成纤维细胞自噬体的变化。结果在Rapa刺激构建的心脏成纤维细胞自噬模型中,相较于对照组,模型组的PTEN蛋白及mRNA水平下降(P<0.05),自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1和纤维化标志物CollagenⅠ蛋白及mRNA表达升高(P<0.05)。另外,过表达组心脏成纤维细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1和CollagenⅠ蛋白及mRNA的表达水平相较于空载组下降(P<0.05)。mCherry-GFP-LC3荧光染色实验表明,PTEN过表达组心脏成纤维细胞自噬活性较空载组明显下降(P<0.05)。透射电镜结果表明,PTEN过表达组心脏成纤维细胞自噬体较空载组减少(P<0.05)。结论过表达PTEN能够抑制心脏成纤维细胞的自噬,提示PTEN可能是参与调控心脏成纤维细胞自噬的关键基因。 展开更多
关键词 PTEN 自噬 LC3Ⅱ/Ⅰ BECLIN1 心脏成纤维细胞 心肌纤维化
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碳酸氢钠林格氏液对腹腔镜右半肝切除患者术中乳酸浓度和术后早期恢复质量的影响 被引量:6
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作者 刘莹莹 张慕春 +3 位作者 窦梓菁 陈齐 胡宪文 周玉梅 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第7期741-746,共6页
目的当前临床所选用乳酸钠林格氏液(LR)存在增加血浆乳酸含量,加重患者内环境的紊乱,影响患者的苏醒与预后等缺陷。文中观察碳酸氢钠林格氏液(BRS)对腹腔镜右半肝切除术患者术中乳酸浓度和术后早期恢复质量的影响。方法回顾性分析2020... 目的当前临床所选用乳酸钠林格氏液(LR)存在增加血浆乳酸含量,加重患者内环境的紊乱,影响患者的苏醒与预后等缺陷。文中观察碳酸氢钠林格氏液(BRS)对腹腔镜右半肝切除术患者术中乳酸浓度和术后早期恢复质量的影响。方法回顾性分析2020年10月—2021年4月期间60例于安徽医科大学第二附属医院择期行全身麻醉下腹腔镜右半肝切除术患者临床资料,并采用随机数字表法分为乳酸钠林格氏液组(LR组)和碳酸氢钠林格氏液组(BRS组)。2组患者均采用3~5 mL/(kg·h)为基础输液速度分别使用乳酸钠林格氏液和碳酸氢钠林格氏液。记录术前、术后1 d、3 d早期15项恢复质量量表(QoR-15)评分;记录入室后(T_(1))、手术开始时(T_(2))、肝切除前5 min(T_(3))、肝切除后5 min(T_(4))、手术结束时(T_(5))时患者pH、BE、HCO_(3)^(-)、PCO_(2)、K^(+)值和MAP、HR、CI值以及T_(1-5)、术后2 h(T_(6))、术后1 d(T_(7))、术后2 d(T_(8))Lac值。记录2组患者术中去氧肾上腺素的使用量以及术后睁眼时间、应答时间、拔管时间、术后患者的在AICU停留时间、术后首次通气时间、术后首次下地时间、术后并发症。结果与术前相比,2组患者术后1 d、3 d早期15项恢复质量评分降低(P<0.05)。与T_(1)时比较,T_(3-5)时LR组pH、BE、HCO_(3)^(-)降低,K^(+)、PCO_(2)升高,T_(3-7)时Lac升高(P<0.05);T_(4)、T_(5)时BRS组pH、BE、HCO_(3)^(-)降低,T_(3-5)时PCO_(2)升高(P<0.05),T_(4)、T_(5)时K^(+)升高,T_(4-7)时Lac升高(P<0.05);与LR组比较,T_(3-5)时BRS组pH、BE、HCO_(3)^(-)、PCO_(2)升高,K^(+)降低,T_(4-6)时Lac降低,睁眼时间、应答时间、拔管时间、术后患者AICU停留时间、术后首次通气时间、术后首次下地时间缩短,术后并发症减少,术后1d、3d早期15项恢复质量评分升高(P<0.05)。结论碳酸氢钠林格氏液能减少腹腔镜右半肝切除术的代谢酸中毒的发生,减慢术中和术后早期乳酸升高速度,提高患者的早期恢复质量。 展开更多
关键词 碳酸氢钠林格氏液 腹腔镜右半肝切除术 乳酸 早期恢复质量
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过表达sFRP3对小鼠原代心肌成纤维细胞活化增殖的影响 被引量:1
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作者 江舜祥 涂彬 +3 位作者 宋凯 何缓缓 陶辉 曹炜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期809-814,共6页
目的探讨Wnt信号通路调控剂分泌型卷曲相关蛋白3(sFRP3)在小鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法购入1~3 d的小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离CFs进行培养。细胞贴壁生长后使用转化生长因子(TGF-β1)刺激构建CFs活化增殖... 目的探讨Wnt信号通路调控剂分泌型卷曲相关蛋白3(sFRP3)在小鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法购入1~3 d的小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离CFs进行培养。细胞贴壁生长后使用转化生长因子(TGF-β1)刺激构建CFs活化增殖模型;确认模型构建成功后分别向实验组和对照组细胞转染sFRP3过表达质粒和空载质粒24~48 h。通过Western blot、qRT-PCR的方法在分子层面对sFRP3、Periostin(POSTN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达进行检测;使用MTT法、CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的改变。结果在TGF-β1刺激构建的CFs活化增殖模型中,相较于对照组,模型组sFRP3蛋白及mRNA表达下降,活化增殖相关蛋白PCNA、POSTN和CollagenⅠ表达上调。另外,在质粒转染sFRP3过表达组的CFs中,PCNA、POSTN和CollagenⅠ蛋白及mRNA表达相较于空载组下降。MTT、CCK-8与EdU实验表明,质粒转染sFRP3过表达组的CFs增殖活性较空载组明显下降。结论过表达sFRP3明显抑制CFs活化增殖,提示sFRP3可能是参与调控CFs活化增殖的关键基因。 展开更多
关键词 sFRP3 心肌成纤维细胞 心肌纤维化 活化 增殖
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