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GFP-ATZ在HEK 293T中的表达及其细胞毒作用
被引量：
1
1
作者
王海萍
王法财
沈玉先
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2010年第6期733-736,共4页
目的构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标签的α1抗胰蛋白酶Z突变型(ATZ)的真核表达载体,在人胚胎肾细胞(HEK293T)中验证表达情况及检测其对细胞的影响。方法以pcDNA3.1-zeo+-ATZ质粒为模版,设计引物,PCR扩增出ATZ的cDNA序列,插入真核表达载体p...
目的构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标签的α1抗胰蛋白酶Z突变型(ATZ)的真核表达载体,在人胚胎肾细胞(HEK293T)中验证表达情况及检测其对细胞的影响。方法以pcDNA3.1-zeo+-ATZ质粒为模版,设计引物,PCR扩增出ATZ的cDNA序列,插入真核表达载体pEGFP-C1中,构建带有GFP标签的ATZ真核表达载体pEGFP-C1-ATZ,脂质体转染体外培养的HEK293T细胞,Western blot、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜检测GFP-ATZ在细胞中的表达、分布情况及其对细胞形态和分裂的影响。结果 ATZ片段成功插入pEGFP-C1表达质粒,在表达GFP的HEK293T细胞内,绿色荧光呈弥散的全细胞分布,而表达GFP-ATZ的细胞绿色荧光分布于细胞质内;Western blot结果显示特异性条带,分子量大小与GFP-ATZ预期相符;GFP-ATZ的过度表达引起细胞出现不同程度的形态改变、分裂障碍、聚集体出现甚至死亡。结论成功构建了具有绿色荧光标记的ATZ真核表达载体,GFP-ATZ的表达具有细胞毒性。
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关键词
α1抗胰蛋白酶缺乏症/遗传学
突变基因表达
转染
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题名
GFP-ATZ在HEK 293T中的表达及其细胞毒作用
被引量：
1
1
作者
王海萍
王法财
沈玉先
机构
安徽医科大学省部共建重要遗传疾病基因资源利用重点实验室
安徽医科大学
生物药物研究所
安徽医科大学
神经生物学教研室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2010年第6期733-736,共4页
基金
国家自然科学基金(编号:30572219)
安徽省自然科学基金(编号:090413094)
文摘
目的构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标签的α1抗胰蛋白酶Z突变型(ATZ)的真核表达载体,在人胚胎肾细胞(HEK293T)中验证表达情况及检测其对细胞的影响。方法以pcDNA3.1-zeo+-ATZ质粒为模版,设计引物,PCR扩增出ATZ的cDNA序列,插入真核表达载体pEGFP-C1中,构建带有GFP标签的ATZ真核表达载体pEGFP-C1-ATZ,脂质体转染体外培养的HEK293T细胞,Western blot、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜检测GFP-ATZ在细胞中的表达、分布情况及其对细胞形态和分裂的影响。结果 ATZ片段成功插入pEGFP-C1表达质粒,在表达GFP的HEK293T细胞内,绿色荧光呈弥散的全细胞分布,而表达GFP-ATZ的细胞绿色荧光分布于细胞质内;Western blot结果显示特异性条带,分子量大小与GFP-ATZ预期相符;GFP-ATZ的过度表达引起细胞出现不同程度的形态改变、分裂障碍、聚集体出现甚至死亡。结论成功构建了具有绿色荧光标记的ATZ真核表达载体,GFP-ATZ的表达具有细胞毒性。
关键词
α1抗胰蛋白酶缺乏症/遗传学
突变基因表达
转染
Keywords
alpha 1-antitrypsin deficiency/genetics
mutation
gene expression
transfection
分类号
R345 [医药卫生—基础医学]
R394.3 [医药卫生—医学遗传学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GFP-ATZ在HEK 293T中的表达及其细胞毒作用
王海萍
王法财
沈玉先
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2010
1
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