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血清a-L-岩藻糖苷酶和甲胎蛋白在原发性肝癌中的临床应用 被引量:15
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作者 李小月 李宗光 沈继龙 《安徽医学》 2011年第7期924-925,共2页
目的探讨血清甲胎蛋白(AFP)和a-L-岩藻糖苷酶(AFU)联合检测对原发性肝癌诊断的临床价值。方法对60例原发性肝癌组、32例其他肿瘤组和42例健康体检组血清AFP和AFU同步测定并进行对照。结果原发性肝癌患者血清AFP、AFU水平及阳性率均明显... 目的探讨血清甲胎蛋白(AFP)和a-L-岩藻糖苷酶(AFU)联合检测对原发性肝癌诊断的临床价值。方法对60例原发性肝癌组、32例其他肿瘤组和42例健康体检组血清AFP和AFU同步测定并进行对照。结果原发性肝癌患者血清AFP、AFU水平及阳性率均明显高于健康对照组及其他肿瘤组,差异有统计学意义(P<0.05);联合检测的敏感性和准确性均高于单项检测。结论联合检测血清中的AFP和AFU能提高原发性肝癌诊断的敏感性和准确性。 展开更多
关键词 原发性肝癌 AFP AFU 诊断价值
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日本血吸虫卵壳蛋白编码基因的扩增和克隆 被引量:4
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作者 唐小牛 汪学龙 +1 位作者 沈继龙 陈文魁 《皖南医学院学报》 CAS 2002年第1期8-10,共3页
目的 克隆日本血吸虫卵壳蛋白基因 ,以研究其在诊断和作为候选疫苗分子的作用。方法 设计合成引物 ,以日本血吸虫雌性成虫cDNA第一链为模板 ,用PCR法扩增日本血吸虫卵壳蛋白 (SchistosomajaponicumeggshellproteinSjEP)基因编码序列 ... 目的 克隆日本血吸虫卵壳蛋白基因 ,以研究其在诊断和作为候选疫苗分子的作用。方法 设计合成引物 ,以日本血吸虫雌性成虫cDNA第一链为模板 ,用PCR法扩增日本血吸虫卵壳蛋白 (SchistosomajaponicumeggshellproteinSjEP)基因编码序列 ,并克隆入pGEM T质粒载体。结果 PCR法扩增出大小为 62 4bp的单一条带 ,将其克隆入载体获重组质粒 pGEM T SjEP ,经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段。结论 日本血吸虫卵壳蛋白的编码基因重组质粒的成功构建 ,为进一步研究提供了条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 卵壳蛋白 基因扩增 分子克隆 编码基因
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荧光定量PCR和抗酸染色在联合诊断结核病及其疗效考核中的应用 被引量:9
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作者 张祖平 李小月 +4 位作者 李宗光 曹亮 郑辉 徐元宏 沈继龙 《安徽医学》 2010年第11期1353-1355,共3页
目的探讨荧光定量PCR法和抗酸染色检测技术在结核病联合诊断中的价值。方法对89例临床确诊的结核病患者和22例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本同时应用荧光定量PCR法和痰涂片抗酸染色法检测结核杆菌,并检测外周血血清结核抗体,对3种检... 目的探讨荧光定量PCR法和抗酸染色检测技术在结核病联合诊断中的价值。方法对89例临床确诊的结核病患者和22例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本同时应用荧光定量PCR法和痰涂片抗酸染色法检测结核杆菌,并检测外周血血清结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果治疗前后荧光定量PCR阳性率为60.67%、25.84%,涂片抗酸染色法阳性率为23.60%、6.74%,结核抗体阳性率为71.91%和86.51%。痰标本的荧光定量PCR法阳性率均要高于抗酸染色法阳性率,比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论荧光定量PCR技术对肺结核诊断方面灵敏度和特异性较高,同时反映抗结核治疗过程中痰标本中结核杆菌数量的变化,不仅提高了结核菌检出的阳性率,同时对抗结核药物有一定的疗效考核效果。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 抗酸染色 结核病
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日本血吸虫14-3-3蛋白质编码基因在原核细胞中的表达 被引量:3
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作者 汪学龙 沈继龙 蒋作君 《安徽医学》 2001年第2期5-7,共3页
目的 :为了寻找日本血吸虫病新的诊断和候选疫苗分子 ,克隆日本血吸虫 14 -3 -3蛋白质编码基因 ,并进行表达。方法 :提取日本血吸虫成虫RNA ,设计合成引物 ,用RT -PCR法扩增出日本血吸虫 14 -3 -3抗原 (Sj14 -3 -3 )基因编码序列 ,将其... 目的 :为了寻找日本血吸虫病新的诊断和候选疫苗分子 ,克隆日本血吸虫 14 -3 -3蛋白质编码基因 ,并进行表达。方法 :提取日本血吸虫成虫RNA ,设计合成引物 ,用RT -PCR法扩增出日本血吸虫 14 -3 -3抗原 (Sj14 -3 -3 )基因编码序列 ,将其克隆入pGEM -T载体 ,然后在真核表达载体 pBKCMV中亚克隆 ,用IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE观察表达结果。结果 :RT -PCR法扩增出一条大小约 765bp的特异性片断 ,克隆质粒pGEM -Sj14 -3 -3和真核表达质粒pBKCMV经双酶切和以重组质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段 ,诱导表达后 ,经SDS -PAGE可见一条约 3 2 5kDa大小的融合蛋白条带。结论 :本实验成功地克隆了日本血吸虫 14 -3 -3抗原的编码基因 ,并在原核细胞中进行表达 ,为进一步的免疫诊断和核酸疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 14-3-3蛋白质 基因克隆 原核细胞
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日本血吸虫14-3-3蛋白epsilon亚型基因扩增及表达载体的构建 被引量:1
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作者 唐小牛 汪学龙 +1 位作者 沈继龙 蒋作君 《皖南医学院学报》 CAS 2002年第3期171-173,共3页
目的 扩增日本血吸虫 1 4 3 3蛋白epsilon亚型编码基因并构建其表达载体 ,以研究其在血吸虫信号转导以及免疫预防和诊断方面的作用。方法 以日本血吸虫成虫总RNA为模板逆转录合成cDNA链 ,设计合成引物 ,用PCR法扩增 1 4 3 3蛋白epsi... 目的 扩增日本血吸虫 1 4 3 3蛋白epsilon亚型编码基因并构建其表达载体 ,以研究其在血吸虫信号转导以及免疫预防和诊断方面的作用。方法 以日本血吸虫成虫总RNA为模板逆转录合成cDNA链 ,设计合成引物 ,用PCR法扩增 1 4 3 3蛋白epsilon亚型基因编码序列 ,将其克隆入pGEM T载体 ,双酶切和以质粒为模板的PCR鉴定后 ,将基因片段亚克隆入表达载体pBK CMV ,转染大肠杆菌BL2 1 ,经双酶切后鉴定。结果 RT PCR扩增出一条约 753bp的特异性条带 ,TA克隆重组质粒的双酶切和以质粒为模板的PCR均获得了一条与RT PCR扩增出大小相同条带 ,pBK Sj1 4 3 3表达载体经双酶切后也同样获得了一条约 753bp的特异性条带。 结论 在体外成功的扩增了日本血吸虫 1 4 3 3蛋白epsilon亚型编码基因并构建了 pBK Sj1 4 3 3表达载体 ,为进一步的免疫预防和免疫诊断研究提供了条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 714-3-3蛋白 epsilon亚型 基因扩增 表达载体 免疫预防 免疫诊断
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乳腺癌14-3-3 sigma基因表达及其临床意义 被引量:1
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作者 钟政荣 沈继龙 +4 位作者 胡元生 李小月 胡建国 李兴武 王凤超 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期93-95,共3页
目的探讨乳腺癌14-3-3sigma基因表达及其临床意义。方法采用RT-PCR和western-blot方法,分别对40例乳腺癌患者肿瘤组织和18例乳腺良性病变的乳腺组织,半定量检测14-3-3sigma基因的表达情况。结果40例乳腺癌患者中,有35例(35/40,87.5%)没... 目的探讨乳腺癌14-3-3sigma基因表达及其临床意义。方法采用RT-PCR和western-blot方法,分别对40例乳腺癌患者肿瘤组织和18例乳腺良性病变的乳腺组织,半定量检测14-3-3sigma基因的表达情况。结果40例乳腺癌患者中,有35例(35/40,87.5%)没有检测出14-3-3sigma mRNA;western-blot也证明,40例中有32例14-3-3sigma蛋白表达缺失(32/40,80.0%),两种试验同时阴性的有31例(77.5%),另各有2例低表达。而在18例乳腺良性病变的患者,RT-PCR和western-blot均检测出14-3-3sigma基因表达。结论14-3-3sigma基因表达缺失或低表达是乳腺癌的经常性事件,研究乳腺癌14-3-3sigma基因表达情况,可为乳腺癌的诊断提供实验室依据。 展开更多
关键词 乳腺癌 14—3—3蛋白 sigma亚型 表达
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日本血吸虫(大陆株)26ku谷胱甘肽转移酶基因真核表达载体构建及序列分析
7
作者 唐小牛 汪学龙 《皖南医学院学报》 CAS 2003年第1期10-13,共4页
目的 构建日本血吸虫大陆株 2 6ku谷胱甘肽转移酶 (GST)基因真核表达质粒 pBK SjGST并进行序列分析 ,为进一步进行重组蛋白的表达及保护性免疫研究提供条件。方法 根据日本血吸虫菲律宾株 2 6kuGST核苷酸序列 ,设计合成一对引物 ,以... 目的 构建日本血吸虫大陆株 2 6ku谷胱甘肽转移酶 (GST)基因真核表达质粒 pBK SjGST并进行序列分析 ,为进一步进行重组蛋白的表达及保护性免疫研究提供条件。方法 根据日本血吸虫菲律宾株 2 6kuGST核苷酸序列 ,设计合成一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA为模板 ,通过RT PCR合成日本血吸虫中国大陆株 2 6kuGSTcDNA片段。将其克隆入 pGEM T载体 ,经双酶切及PCR鉴定后 ,再亚克隆入 pBK CMV真核表达质粒 ,构建重组质粒pBK SjGST ,转化到大肠杆菌BL2 1感受态细胞 ,提取重组质粒双酶切鉴定并进行序列分析。结果 PCR、pGEM T SjGST及 pBK SjGST分别经双酶切获得一特异性基因片段 .经测序分析该片段具有一个 670bp的全基因序列 ,而其开放阅读框 (openreadingframe,ORF)为 65 7bp ,编码 2 18个氨基酸 ,并对其基因序列及编码的蛋白质进行了分析。结论 成功地构建了日本血吸虫中国大陆株 2 6kuGST基因真核表达重组质粒 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 谷胱甘肽转移酶 GST 序列分析 基因表达 真核表达载体 序列分析
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日本血吸虫重组疫苗的研究概况
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作者 唐小牛 汪学龙 《皖南医学院学报》 CAS 2003年第2期154-156,共3页
血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病.它威胁着全世界74个国家和地区约6亿人口的健康,估计感染人口约为2亿,患者2千万左右[1].世界卫生组织(WHO)认为该病是所有寄生虫病中分布范围最广、危害最严重的疾病之一.多年来,防治血... 血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病.它威胁着全世界74个国家和地区约6亿人口的健康,估计感染人口约为2亿,患者2千万左右[1].世界卫生组织(WHO)认为该病是所有寄生虫病中分布范围最广、危害最严重的疾病之一.多年来,防治血吸虫病一直是靠传统的吡喹酮药物化疗和杀灭钉螺的方法.但效果并非尽如人意,其原因包括多方面:首先,吡喹酮对已造成的损害组织作用甚微,且化疗药物的应用,还可能造成临床症状的不典型,使血吸虫的早期诊断难度加大,同时大规模使用吡喹酮治疗时有诱发某些虫株产生耐药性的可能;同时,血吸虫保虫宿主种类繁多,如牛、羊、鼠等哺乳动物,据统计全世界有54万头病畜,都可以作为其传染源;其次,作为血吸虫的中间宿主钉螺,其分布的水域面积广阔,有螺面积估计约34亿平方米,加之山区丘陵地形复杂等原因,使消灭钉螺具有相当难度;第三,血吸虫尾蚴感染速度非常之快及感染后不能获得持久性的免疫力,易重复感染等.因此,要从根本上控制和消灭血吸虫病应考虑借助于疫苗. 展开更多
关键词 日本血吸虫病 重组疫苗 谷胱甘肽-S转移酶 97ku副肌球蛋白 磷酸丙糖异构酶 23ku表膜蛋白
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