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弓形虫ME49株ROP8基因的原核表达优化及功能研究 被引量:1
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作者 余一然 姚余有 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期110-115,共6页
为了明确假激酶ROP8在弓形虫抵抗宿主免疫中的作用,我们成功构建弓形虫ROP8原核表达体系并研究了多克隆抗体对弓形虫增殖的影响。根据基因分析结果,在ME49虫株中获得ROP8-C的369 bp的截短片段并克隆入pET28a载体中。将此质粒转化入BL21(... 为了明确假激酶ROP8在弓形虫抵抗宿主免疫中的作用,我们成功构建弓形虫ROP8原核表达体系并研究了多克隆抗体对弓形虫增殖的影响。根据基因分析结果,在ME49虫株中获得ROP8-C的369 bp的截短片段并克隆入pET28a载体中。将此质粒转化入BL21(DE3)感受态大肠杆菌IPTG,诱导并筛选诱导条件,用纯化后的蛋白免疫新西兰兔后获得多克隆抗体。Western blot显示弓形虫裂解蛋白产生了两个条带,表明以ME49虫株为总DNA模板,成功扩增出369 bp的ROP8截短基因,构建出pET28a-ROP8质粒,经过测序和比对后与基因文库中的蛋白序列完全相同。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物显示,在20 kDa有特异性条带且在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达6 h时表达量最高。弓形虫增殖实验结果显示,该多克隆抗体能够抑制弓形虫的增殖,可为研究ROP8在弓形虫增殖过程中的作用及其机制奠定基础,并为其作为疫苗候选分子提供新线索。 展开更多
关键词 弓形虫 假激酶 ROP8 多克隆抗体
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GRA15_(Ⅱ)在小鼠肿瘤微环境中促进巨噬细胞极化抗肝癌
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作者 余焱霞 张远 +1 位作者 王艳玲 蔡亦红 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期36-47,共12页
肿瘤相关巨噬细胞(TAM)与肿瘤的转归密切相关,探索刚地弓形虫致密颗粒蛋白分子(GRA15_(Ⅱ))在肿瘤微环境中通过诱导巨噬细胞(Mφ)极化抑制肿瘤生长的作用机制。通过构建肝细胞癌小鼠,注射LV-gra15_(Ⅱ)重组慢病毒后,采用实时荧光定量PC... 肿瘤相关巨噬细胞(TAM)与肿瘤的转归密切相关,探索刚地弓形虫致密颗粒蛋白分子(GRA15_(Ⅱ))在肿瘤微环境中通过诱导巨噬细胞(Mφ)极化抑制肿瘤生长的作用机制。通过构建肝细胞癌小鼠,注射LV-gra15_(Ⅱ)重组慢病毒后,采用实时荧光定量PCR、酶联免疫法、免疫组化、流式细胞术和共聚焦显微镜分析肿瘤微环境中的免疫应答情况。结果显示,GRA15_(Ⅱ)可在体外诱导M2样Mφ向M1表型偏移。而且,在荷瘤小鼠注射LV-gra15_(Ⅱ)后,肿瘤体积明显减小,进一步分析发现,在肿瘤微环境中GRA15_(Ⅱ)主要通过TRAF6途径激活NF-κB,诱导TAM从M2向M1偏移,且NO、IL-12、TNF-α的表达上调,发挥Th1免疫应答。GRA15_(Ⅱ)能够抑制肿瘤生长,此研究为肿瘤免疫治疗提供新的思路和策略,为开发新的药物提供实验室基础。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白 肝细胞癌 巨噬细胞 极化
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去铁酮对弓形虫慢性感染小鼠肝损伤中铁代谢紊乱的治疗作用 被引量:1
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作者 刘敏 高南南 +1 位作者 王崇 蔡亦红 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第7期1094-1098,共5页
目的观察弓形虫慢性感染小鼠服用去铁酮(DFP)后,肝脏中铁及其他金属元素和炎症因子γ干扰素(IFN-γ)的变化情况,探讨DFP治疗弓形虫慢性感染所致肝损伤的疗效。方法将6周龄的雌性C57BL/6小鼠随机分为4组:control组、control+DFP组、TgCt... 目的观察弓形虫慢性感染小鼠服用去铁酮(DFP)后,肝脏中铁及其他金属元素和炎症因子γ干扰素(IFN-γ)的变化情况,探讨DFP治疗弓形虫慢性感染所致肝损伤的疗效。方法将6周龄的雌性C57BL/6小鼠随机分为4组:control组、control+DFP组、TgCtWh6组、TgCtWh6+DFP组,每组6只,control组无菌灌胃PBS;TgCtWh6+DFP组每日灌胃50μg/kg DFP,TgCtWh6组灌胃20个弓形虫包囊,TgCtWh6+DFP组灌胃20个弓形虫包囊且每日灌胃50μg/kg DFP,饲养45 d后处死小鼠并取其肝脏组织。采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)检测小鼠肝脏组织中铁及其他金属元素含量;采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)和Western blot分别检测小鼠肝脏组织中IFN-γ、铁蛋白重链(Fth)mRNA的表达水平和蛋白水平。结果慢性弓形虫感染的小鼠肝脏中铁、锰和锌的组织留存水平增高,在服用DFP后其肝脏中铁元素含量明显下调(P<0.01),与TgCtWh6组相比,TgCtWh6+DFP组在服用DFP后肝脏中Fth含量下调(P<0.01),铁代谢紊乱得到了有效改善,同时肝脏中IFN-γ含量明显下调(P<0.01),肝脏的炎症反应也有所减轻。结论DFP可以有效改善小鼠弓形虫感染后肝脏中的铁代谢紊乱及减轻肝脏的炎症性损伤。 展开更多
关键词 去铁酮 铁代谢 肝损伤 铁蛋白 弓形虫感染
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弓形虫Chinese 1基因型虫株感染对小鼠海马体细胞超微结构的影响 被引量:2
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作者 王崇 蔡亦红 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第10期1564-1568,共5页
目的观察弓形虫Chinese 1优势基因型TgCtwh3和TgCtwh6虫株对小鼠海马体细胞超微结构的影响。方法6周龄的雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:对照组、TgCtwh3感染组、TgCtwh6感染组,每组6只。对照组腹腔注射无菌PBS;TgCtwh3感染组腹腔注射4000... 目的观察弓形虫Chinese 1优势基因型TgCtwh3和TgCtwh6虫株对小鼠海马体细胞超微结构的影响。方法6周龄的雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:对照组、TgCtwh3感染组、TgCtwh6感染组,每组6只。对照组腹腔注射无菌PBS;TgCtwh3感染组腹腔注射4000个TgCtwh3速殖子,饲养6 d;TgCtwh6感染组灌胃20个TgCtwh6包囊,饲养6周。所有动物经取材、制片,并用透射电子显微镜观察。结果与对照组相比,TgCtwh3感染组海马体细胞出现核皱缩坏死,胞质、轴突肿胀,细胞器消失,轴索断裂等病理变化。与对照组相比,TgCtwh6感染组海马体细胞出现线粒体肿胀、空泡化、嵴断裂消失、膜破裂,脂褐素沉积,高尔基体扩张等病理变化。结论TgCtwh3和TgCtwh6感染小鼠均出现海马体细胞超微结构的改变,TgCtwh3感染组多表现为不可逆的细胞坏死,而TgCtwh6感染组表现出线粒体结构破坏为主的慢性细胞损伤,这为探讨弓形虫脑病的致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 弓形虫 海马 超微结构 小鼠
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