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大鼠神经干细胞的体外分离培养及分化研究
1
作者
徐鹏
宋斾文
+2 位作者
章仁杰
刘超
申才良
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2014年第4期443-447,共5页
目的建立新生SD大鼠神经干细胞(NSCs)的分离培养、体外分化、鉴定及体外长期培养的方法,并探讨血清浓度对NSCs分化的影响。方法取新生SD大鼠大脑组织,用无血清培养技术培养NSCs。采用免疫荧光技术对NSCs进行鉴定,检测其巢蛋白(Nestin)...
目的建立新生SD大鼠神经干细胞(NSCs)的分离培养、体外分化、鉴定及体外长期培养的方法,并探讨血清浓度对NSCs分化的影响。方法取新生SD大鼠大脑组织,用无血清培养技术培养NSCs。采用免疫荧光技术对NSCs进行鉴定,检测其巢蛋白(Nestin)表达。用含有不同胎牛血清(FBS)浓度(2%、5%、10%)的DMEM/F-12培养基诱导NSCs分化,分别用神经元特异性微管相关蛋白2(MAP-2)抗体、神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体行免疫荧光染色鉴定分化细胞。通过Western blot法检测不同FBS浓度的分化条件下MAP-2与GFAP的表达情况。结果获得大量未分化且悬浮生长的NSCs球,并能分化为神经元和神经胶质细胞。随着血清浓度的增加,各组MAP-2的表达逐渐增加(P<0.05),GFAP的表达逐渐减少(P<0.05)。结论应用无血清培养技术可成功在体外培养出具有增殖、自我更新及多潜能分化能力的新生大鼠NSCs,可于含有不同FBS浓度(2%、5%、10%)的分化条件下进一步分化为神经元及神经胶质细胞,含低浓度血清的条件培养基促进NSCs向神经元方向分化,而高浓度血清则有利于NSCs向神经胶质细胞方向分化。
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关键词
大鼠
神经干细胞
细胞培养
免疫印迹
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职称材料
乳源六肽通过FoxO3a-MnSOD通路减少酒精诱导的氧化应激缓解肝损伤
被引量：
1
2
作者
李安琪
祝晓梅
+2 位作者
黄九九
秦宜德
戚楠
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022年第12期1864-1869,共6页
目的研究乳源六肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺(PGPIPN)和其截短五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法60只昆明小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘...
目的研究乳源六肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺(PGPIPN)和其截短五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法60只昆明小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘肽(GSH)组、PGPIPN组、截短五肽PGPIP组。采用梯度酒精灌胃的方法建立小鼠慢性酒精性肝损伤模型,造模的同时给予药物干预,共12周。肝脏HE染色分析各处理组对小鼠酒精性肝损伤的病理学影响。体外分离培养小鼠原代肝细胞和人正常肝细胞系L-02,水溶性四氮唑-1(WST-1)细胞增殖及细胞毒性检测确定各种细胞合适的PGPIPN诱导浓度。持续诱导L-02细胞不同时间,Western blot检测人叉头框蛋白O3(FoxO3a)和磷酸化FoxO3a蛋白质的表达,确定合适的诱导时间。免疫荧光染色检测FoxO3a在L-02细胞中的亚细胞定位。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同处理组小鼠原代肝细胞和L-02细胞FoxO3a和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因mRNA的变化。结果PGPIPN组和PGPIP组病理学检查类似GSH组,小鼠肝脏损伤明显减轻。分别选择中浓度和高浓度PGPIPN诱导小鼠原代肝细胞和L-02细胞。在16 h,L-02细胞FoxO3a蛋白表达显著增加,并且FoxO3a蛋白主要表达于细胞核内。此外,在相应剂量PGPIPN诱导后,两种类型细胞中mRNA水平的显著增加。结论PGPIPN和截短五肽PGPIP能减少小鼠慢性酒精性肝损伤,其机制可能是通过FoxO3a-MnSOD信号通路,减少酒精诱导的氧化应激从而发挥作用。
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关键词
PGPIPN
酒精性肝损伤
氧化应激
FOXO3A
MNSOD
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职称材料
TRPV4-SK_(Ca)在老年大鼠气管平滑肌中改变及对其收缩的影响
3
作者
申永刚
尹胜
+4 位作者
蒋森
丁圣刚
吕正梅
沈兵
杜鹃
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2016年第6期765-768,共4页
目的阐明瞬时受体电位离子通道家族(TRP)中香草素受体亚家族(TRPV)成员TRPV4和小电导钙激活钾通道3(SK3)复合物对老年大鼠气管平滑肌收缩的影响。方法运用离体气管张力实验,观察高钾、卡巴胆碱对年轻、老年大鼠气管收缩的影响,以及瞬时...
目的阐明瞬时受体电位离子通道家族(TRP)中香草素受体亚家族(TRPV)成员TRPV4和小电导钙激活钾通道3(SK3)复合物对老年大鼠气管平滑肌收缩的影响。方法运用离体气管张力实验,观察高钾、卡巴胆碱对年轻、老年大鼠气管收缩的影响,以及瞬时受体电位离子通道TRPV4特异性激动剂和抑制剂对卡巴胆碱引起的气管收缩的影响;运用Western blot法检测TRPV4和SK3在年轻、老年大鼠气管平滑肌上表达量的变化。结果与年轻大鼠比较,老年大鼠高钾引起的气管收缩没有显著改变,但卡巴胆碱引起的收缩显著增强,且TRPV4激动剂GSK引起的舒张反应显著降低;两组大鼠用TRPV4阻断剂HC或RN1734预处理后,GSK引起的舒张反应均被显著阻断;Western blot结果显示,与年轻大鼠比较,老年大鼠气管平滑肌组织TRPV4表达显著升高,SK3表达却显著降低。结论 TRPV4-SK3信号复合物在老年大鼠气管平滑肌表达改变可能与老年大鼠气管舒张效应减弱有密切关系。
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关键词
瞬时受体电位离子通道香草素受体4
小电导钙激活钾通道
老年大鼠
气管平滑肌
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职称材料
题名
大鼠神经干细胞的体外分离培养及分化研究
1
作者
徐鹏
宋斾文
章仁杰
刘超
申才良
机构
安徽医科大学
第一附属医院骨科
安徽医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2014年第4期443-447,共5页
文摘
目的建立新生SD大鼠神经干细胞(NSCs)的分离培养、体外分化、鉴定及体外长期培养的方法,并探讨血清浓度对NSCs分化的影响。方法取新生SD大鼠大脑组织,用无血清培养技术培养NSCs。采用免疫荧光技术对NSCs进行鉴定,检测其巢蛋白(Nestin)表达。用含有不同胎牛血清(FBS)浓度(2%、5%、10%)的DMEM/F-12培养基诱导NSCs分化,分别用神经元特异性微管相关蛋白2(MAP-2)抗体、神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体行免疫荧光染色鉴定分化细胞。通过Western blot法检测不同FBS浓度的分化条件下MAP-2与GFAP的表达情况。结果获得大量未分化且悬浮生长的NSCs球,并能分化为神经元和神经胶质细胞。随着血清浓度的增加,各组MAP-2的表达逐渐增加(P<0.05),GFAP的表达逐渐减少(P<0.05)。结论应用无血清培养技术可成功在体外培养出具有增殖、自我更新及多潜能分化能力的新生大鼠NSCs,可于含有不同FBS浓度(2%、5%、10%)的分化条件下进一步分化为神经元及神经胶质细胞,含低浓度血清的条件培养基促进NSCs向神经元方向分化,而高浓度血清则有利于NSCs向神经胶质细胞方向分化。
关键词
大鼠
神经干细胞
细胞培养
免疫印迹
Keywords
rat
neural stem cell
cell culture
Western blot
分类号
R651.2 [医药卫生—外科学]
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职称材料
题名
乳源六肽通过FoxO3a-MnSOD通路减少酒精诱导的氧化应激缓解肝损伤
被引量：
1
2
作者
李安琪
祝晓梅
黄九九
秦宜德
戚楠
机构
安徽医科大学
基础
医学院
生物化学与分子生物学
教研室
安徽医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022年第12期1864-1869,共6页
基金
国家自然科学基金(编号:81472448)
安徽省自然科学基金(编号:1908085MH280)。
文摘
目的研究乳源六肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺(PGPIPN)和其截短五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法60只昆明小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘肽(GSH)组、PGPIPN组、截短五肽PGPIP组。采用梯度酒精灌胃的方法建立小鼠慢性酒精性肝损伤模型,造模的同时给予药物干预,共12周。肝脏HE染色分析各处理组对小鼠酒精性肝损伤的病理学影响。体外分离培养小鼠原代肝细胞和人正常肝细胞系L-02,水溶性四氮唑-1(WST-1)细胞增殖及细胞毒性检测确定各种细胞合适的PGPIPN诱导浓度。持续诱导L-02细胞不同时间,Western blot检测人叉头框蛋白O3(FoxO3a)和磷酸化FoxO3a蛋白质的表达,确定合适的诱导时间。免疫荧光染色检测FoxO3a在L-02细胞中的亚细胞定位。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同处理组小鼠原代肝细胞和L-02细胞FoxO3a和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因mRNA的变化。结果PGPIPN组和PGPIP组病理学检查类似GSH组,小鼠肝脏损伤明显减轻。分别选择中浓度和高浓度PGPIPN诱导小鼠原代肝细胞和L-02细胞。在16 h,L-02细胞FoxO3a蛋白表达显著增加,并且FoxO3a蛋白主要表达于细胞核内。此外,在相应剂量PGPIPN诱导后,两种类型细胞中mRNA水平的显著增加。结论PGPIPN和截短五肽PGPIP能减少小鼠慢性酒精性肝损伤,其机制可能是通过FoxO3a-MnSOD信号通路,减少酒精诱导的氧化应激从而发挥作用。
关键词
PGPIPN
酒精性肝损伤
氧化应激
FOXO3A
MNSOD
Keywords
PGPIPN
alcoholic liver damage
oxidative stress
FoxO3a
MnSOD
分类号
R575.3 [医药卫生—消化系统]
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职称材料
题名
TRPV4-SK_(Ca)在老年大鼠气管平滑肌中改变及对其收缩的影响
3
作者
申永刚
尹胜
蒋森
丁圣刚
吕正梅
沈兵
杜鹃
机构
安徽医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室
安徽医科大学
基础
医学院
生理学
教研室
安徽医科大学
第一附属医院儿科
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2016年第6期765-768,共4页
基金
国家自然科学基金(编号:81371284)
文摘
目的阐明瞬时受体电位离子通道家族(TRP)中香草素受体亚家族(TRPV)成员TRPV4和小电导钙激活钾通道3(SK3)复合物对老年大鼠气管平滑肌收缩的影响。方法运用离体气管张力实验,观察高钾、卡巴胆碱对年轻、老年大鼠气管收缩的影响,以及瞬时受体电位离子通道TRPV4特异性激动剂和抑制剂对卡巴胆碱引起的气管收缩的影响;运用Western blot法检测TRPV4和SK3在年轻、老年大鼠气管平滑肌上表达量的变化。结果与年轻大鼠比较,老年大鼠高钾引起的气管收缩没有显著改变,但卡巴胆碱引起的收缩显著增强,且TRPV4激动剂GSK引起的舒张反应显著降低;两组大鼠用TRPV4阻断剂HC或RN1734预处理后,GSK引起的舒张反应均被显著阻断;Western blot结果显示,与年轻大鼠比较,老年大鼠气管平滑肌组织TRPV4表达显著升高,SK3表达却显著降低。结论 TRPV4-SK3信号复合物在老年大鼠气管平滑肌表达改变可能与老年大鼠气管舒张效应减弱有密切关系。
关键词
瞬时受体电位离子通道香草素受体4
小电导钙激活钾通道
老年大鼠
气管平滑肌
Keywords
transient receptor potential vanilloid 4
small conductance Ca^2 ＋activated potassium channel
aged rat
airway smooth muscle
分类号
Q412 [生物学—生理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大鼠神经干细胞的体外分离培养及分化研究
徐鹏
宋斾文
章仁杰
刘超
申才良
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2014
0
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职称材料
2
乳源六肽通过FoxO3a-MnSOD通路减少酒精诱导的氧化应激缓解肝损伤
李安琪
祝晓梅
黄九九
秦宜德
戚楠
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022
1
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职称材料
3
TRPV4-SK_(Ca)在老年大鼠气管平滑肌中改变及对其收缩的影响
申永刚
尹胜
蒋森
丁圣刚
吕正梅
沈兵
杜鹃
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2016
0
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职称材料
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