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Tec真核表达载体构建及其对细胞信号的影响
1
作者
李菲菲
刘雷
+5 位作者
郑红
周颖
余科科
程洁
王本忠
汪思应
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2005年第3期206-210,共5页
目的构建人Tec酪氨酸蛋白激酶真核表达载体;研究Tec参与肝细胞再生的可能信号途径。方法经PCR扩增、酶切、连接等基因重组技术将人Tec插入pCDNA3.1(hismycTec)真核表达载体中,并经酶切、PCR、测序鉴定;用脂质体法将构建的真核表达载体...
目的构建人Tec酪氨酸蛋白激酶真核表达载体;研究Tec参与肝细胞再生的可能信号途径。方法经PCR扩增、酶切、连接等基因重组技术将人Tec插入pCDNA3.1(hismycTec)真核表达载体中,并经酶切、PCR、测序鉴定;用脂质体法将构建的真核表达载体瞬时转染Hela细胞,用Western方法检测Tec蛋白是否表达。用荧光素酶报告基因系统,检测Tec是否参与HGF刺激信号途径的活化。结果构建的Tec真核表达载体使Hela细胞高表达Tec蛋白;并发现Tec在HGF介导下,对Elk信号分子活化的报告质粒中荧光素酶的表达有明显增强作用。结论构建了Tec真核表达载体,并能使HGF介导的MAPK途径活化,提示Tec可能参与HGF介导肝细胞增殖的信号调控。
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关键词
真核表达载体构建
TEC
细胞信号
Hela细胞
酪氨酸蛋白激酶
Western
pcDNA3
基因重组技术
MAPK途径
信号途径
荧光素酶
肝细胞再生
PCR扩增
肝细胞增殖
HGF
瞬时转染
脂质体法
基因系统
增强作用
信号分子
信号调控
c蛋白
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职称材料
ARIH2抑制LUBAC的线性泛素化连接酶活性
2
作者
陈文哲
李磊
张令强
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第10期1343-1350,共8页
线性泛素化修饰在肿瘤及免疫系统中均发挥着重要作用。线性泛素链组装复合体(linear ubiquitin chain assembly complex,LUBAC)是目前已知的唯一能够催化合成线性泛素链的泛素连接酶。本研究发现,泛素连接酶2(ariadne homolog 2,ARIH2)...
线性泛素化修饰在肿瘤及免疫系统中均发挥着重要作用。线性泛素链组装复合体(linear ubiquitin chain assembly complex,LUBAC)是目前已知的唯一能够催化合成线性泛素链的泛素连接酶。本研究发现,泛素连接酶2(ariadne homolog 2,ARIH2)作为LUBAC新的相互作用蛋白质,能够抑制LUBAC对底物的线性泛素化修饰水平。通过免疫共沉淀实验发现,ARIH2与HOIP存在相互作用,且GST pull-down结果说明,HOIP通过ZF-NZF结构域与ARIH2发生相互作用。进一步的免疫沉淀结果证明,LUBAC并不能线性泛素化修饰ARIH2。反之,ARIH2能够抑制LUBAC对底物的线性泛素化修饰水平,其机制可能是ARIH2影响了SHARPIN的泛素化水平,从而影响LUBAC酶活性,进而导致LUBAC对底物的线性泛素化水平减弱。
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关键词
泛素连接酶
线性泛素化修饰
线性泛素链组装复合体
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职称材料
题名
Tec真核表达载体构建及其对细胞信号的影响
1
作者
李菲菲
刘雷
郑红
周颖
余科科
程洁
王本忠
汪思应
机构
安徽医科大学基础医学院病理生理教研室
安徽医科大学
第一附属医院普外科
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2005年第3期206-210,共5页
基金
安徽省自然科学基金(编号:00044202
01043709)
安徽省人才开发基金(编号:2002Z035)
文摘
目的构建人Tec酪氨酸蛋白激酶真核表达载体;研究Tec参与肝细胞再生的可能信号途径。方法经PCR扩增、酶切、连接等基因重组技术将人Tec插入pCDNA3.1(hismycTec)真核表达载体中,并经酶切、PCR、测序鉴定;用脂质体法将构建的真核表达载体瞬时转染Hela细胞,用Western方法检测Tec蛋白是否表达。用荧光素酶报告基因系统,检测Tec是否参与HGF刺激信号途径的活化。结果构建的Tec真核表达载体使Hela细胞高表达Tec蛋白;并发现Tec在HGF介导下,对Elk信号分子活化的报告质粒中荧光素酶的表达有明显增强作用。结论构建了Tec真核表达载体,并能使HGF介导的MAPK途径活化,提示Tec可能参与HGF介导肝细胞增殖的信号调控。
关键词
真核表达载体构建
TEC
细胞信号
Hela细胞
酪氨酸蛋白激酶
Western
pcDNA3
基因重组技术
MAPK途径
信号途径
荧光素酶
肝细胞再生
PCR扩增
肝细胞增殖
HGF
瞬时转染
脂质体法
基因系统
增强作用
信号分子
信号调控
c蛋白
Keywords
liver regeneration
protein tyrosine kinases
分类号
R780.2 [医药卫生—口腔医学]
R329.453 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
ARIH2抑制LUBAC的线性泛素化连接酶活性
2
作者
陈文哲
李磊
张令强
机构
安徽医科大学基础医学院病理生理教研室
军事科
学院
军事
医学
研究院生命组学研究所国家蛋白质科学中心(北京)
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第10期1343-1350,共8页
基金
国家重点研发计划(No.2021YFA1300200)资助。
文摘
线性泛素化修饰在肿瘤及免疫系统中均发挥着重要作用。线性泛素链组装复合体(linear ubiquitin chain assembly complex,LUBAC)是目前已知的唯一能够催化合成线性泛素链的泛素连接酶。本研究发现,泛素连接酶2(ariadne homolog 2,ARIH2)作为LUBAC新的相互作用蛋白质,能够抑制LUBAC对底物的线性泛素化修饰水平。通过免疫共沉淀实验发现,ARIH2与HOIP存在相互作用,且GST pull-down结果说明,HOIP通过ZF-NZF结构域与ARIH2发生相互作用。进一步的免疫沉淀结果证明,LUBAC并不能线性泛素化修饰ARIH2。反之,ARIH2能够抑制LUBAC对底物的线性泛素化修饰水平,其机制可能是ARIH2影响了SHARPIN的泛素化水平,从而影响LUBAC酶活性,进而导致LUBAC对底物的线性泛素化水平减弱。
关键词
泛素连接酶
线性泛素化修饰
线性泛素链组装复合体
Keywords
ubiquitin ligase
linear ubiquitin modification
linear ubiquitin chain assembly complex(LUBAC)
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Tec真核表达载体构建及其对细胞信号的影响
李菲菲
刘雷
郑红
周颖
余科科
程洁
王本忠
汪思应
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2005
0
在线阅读
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职称材料
2
ARIH2抑制LUBAC的线性泛素化连接酶活性
陈文哲
李磊
张令强
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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职称材料
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