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Csf1r^(Cre)介导的黄色荧光素蛋白可有效标记各组织定居巨噬细胞
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作者 李晓宇 赵殿元 +2 位作者 张胜权 杨靖 唐丽 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第9期1567-1573,共7页
目的构建Csf1r^(Cre)Rosa26^(YFP)报告基因小鼠,检测Csf1r^(Cre)介导黄色荧光素蛋白(YFP)标记单核细胞及不同组织定居巨噬细胞的效率。方法Rosa26^(YFP)突变小鼠具有一个loxP侧翼的STOP序列,后跟插入Rosa26基因座的黄色荧光蛋白基因(YFP... 目的构建Csf1r^(Cre)Rosa26^(YFP)报告基因小鼠,检测Csf1r^(Cre)介导黄色荧光素蛋白(YFP)标记单核细胞及不同组织定居巨噬细胞的效率。方法Rosa26^(YFP)突变小鼠具有一个loxP侧翼的STOP序列,后跟插入Rosa26基因座的黄色荧光蛋白基因(YFP)。当与表达Csf1r^(Cre)重组酶的小鼠交配时,STOP序列被删除,并在双突变后代Csf1r^(Cre)Rosa26^(YFP)的表达组织中观察到YFP表达。将Csf1r^(Cre)小鼠与Rosa26^(YFP)小鼠交配,通过PCR筛选出Csf1r^(Cre)Rosa26^(YFP)报告基因小鼠。分离成年Csf1r^(Cre)Rosa26^(YFP)小鼠的血液及骨髓单核细胞、肝脏巨噬细胞、肾脏巨噬细胞、肺泡巨噬细胞和脾脏巨噬细胞,标记流式抗体,通过流式细胞术分析Csf1r^(Cre)介导YFP标记组织巨噬细胞的效率。结果Csf1r^(Cre)Rosa26^(YFP)报告基因小鼠中肾脏、肝脏、脾脏、肺泡巨噬细胞表达YFP中位数为93.25%、92.45%、91.10%、94.70%,血液单核细胞表达YFP中位数为98.20%,骨髓单核细胞表达YFP中位数为93.90%。结论Csf1r^(Cre)可以介导YFP对各组织定居巨噬细胞以及骨髓和血液单核细胞进行示踪。同时,Csf1r^(Cre)可用作这些细胞的基因条件性敲除工具鼠。 展开更多
关键词 Csf1r^(Cre)重组酶 报告基因小鼠 流式细胞术 组织定居巨噬细胞 单核细胞 细胞标记效率
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人PTP1B基因cDNA全长的克隆和原核系统表达 被引量:4
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作者 鲁云霞 李俊 +4 位作者 章秋 徐元宏 陈兵 张吕钊 孙玉诚 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-95,共5页
目的构建人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因cD-NA全长的原核表达质粒(pET-28a(+)-hPTP1B)并在大肠杆菌中高效表达。方法取2型糖尿病人(BMI>28kg.m-2)的淋巴细胞提取总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收构建克隆载体pMD-hPTP1B,测序后设计带... 目的构建人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因cD-NA全长的原核表达质粒(pET-28a(+)-hPTP1B)并在大肠杆菌中高效表达。方法取2型糖尿病人(BMI>28kg.m-2)的淋巴细胞提取总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收构建克隆载体pMD-hPTP1B,测序后设计带酶切位点BamHⅠ和EcoRⅠ的引物,PCR后酶切连入pET-28a(+)中,转化DE3,IPTG诱导表达,SDS-PAGE后用Westernblot检测其特异表达,并进一步对rhPTP1B诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化。结果测序证实所得的hPTP1BcDNA序列与其在GenBank中的序列一致,重组质粒pET-28a(+)-hPTP1B的双酶切结果与预期大小完全一致,IPTG诱导后高效表达的蛋白质是其不溶性的包涵体形式。IPTG诱导的最佳浓度是0.05mmol.L-1,时间为5h,温度为37℃。结论成功克隆了人PTP1B基因,构建了相应的原核表达载体并对原核体系诱导表达的条件进行了优化,使其能在DE3中高效表达,为筛选高特异的小分子抑制剂和制备相应的单克隆抗体打下坚实的基础。 展开更多
关键词 蛋白酪氨酸磷酸酶1B CDNA pET-28a(+) 高效表达 包涵体
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乳中生物活性物质的研究进展 被引量:9
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作者 秦宜德 邹思湘 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期188-192,共5页
哺乳动物的乳不仅营养物质丰富,而且含有激素、生长因子、酶、抗体和非抗体保护蛋白等多种生物活性物质,乳蛋白中蕴藏着大量生物活性肽。此外乳中还含有活细胞。这些生物活性物质对婴儿或新生幼仔的代谢、生长发育、免疫和抗菌等有非常... 哺乳动物的乳不仅营养物质丰富,而且含有激素、生长因子、酶、抗体和非抗体保护蛋白等多种生物活性物质,乳蛋白中蕴藏着大量生物活性肽。此外乳中还含有活细胞。这些生物活性物质对婴儿或新生幼仔的代谢、生长发育、免疫和抗菌等有非常重要的作用,有些生物活性物质参与乳腺的生长分化和保护。本文综述了乳源激素和生长因子、酶、抗体、非抗体保护蛋白以及生物活性肽等生物活性物质及其研究进展。 展开更多
关键词 生物活性物质 乳源激素 生长因子 蛋白质 生物活性肽
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羊毛固醇合成酶杂合敲除小鼠全脑转录组学分析 被引量:2
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作者 李艳玲 李昱昊 +3 位作者 孙晓梅 张军 张素梅 张胜权 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第9期1389-1393,共5页
目的探讨羊毛固醇合成酶(LSS)基因功能异常及胆固醇水平变化对大脑功能分子水平的影响。方法通过RNA-Seq分析LSS(+/-)小鼠及野生型(WT)C57BL/6小鼠基因的表达,KEGG富集分析差异基因涉及的信号通路。用实时定量PCR以及Western blot法检... 目的探讨羊毛固醇合成酶(LSS)基因功能异常及胆固醇水平变化对大脑功能分子水平的影响。方法通过RNA-Seq分析LSS(+/-)小鼠及野生型(WT)C57BL/6小鼠基因的表达,KEGG富集分析差异基因涉及的信号通路。用实时定量PCR以及Western blot法检测差异基因的表达。结果通过RNA-Seq分析,LSS(+/-)杂合敲除导致小鼠大脑中320个基因表达出现变化,其中上调基因145个,下调175个,KEGG富集分析差异基因涉及神经活化的受体与配体通路、河马信号途径及谷氨酸能突触途径。实时定量PCR分析结果显示CCKBR与Htr5b分别出现上调。Western blot结果显示CCKBR基因在LSS(+/-)小鼠全脑组织总蛋白中明显高表达。结论LSS(+/-)杂合敲除会影响小鼠大脑功能及行为。 展开更多
关键词 羊毛固醇合成酶 基因敲除小鼠 RNA-SEQ 富集分析
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