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骨保护素修饰的Beagle犬骨髓基质细胞表达体系的建立与鉴定 被引量:1
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作者 赵春晖 操小马 梅陵宣 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期673-676,共4页
目的利用pSecTag2/B-OPG真核分泌表达穿梭载体,建立经骨保护素基因(OPG)修饰的Beagle犬骨髓基质细胞(BMSC)瞬时表达体系并检测其表达能力,为基因工程与组织工程联合治疗牙周病提供细胞基础。方法体外分离、培养Beagle犬BMSC,通过脂质体... 目的利用pSecTag2/B-OPG真核分泌表达穿梭载体,建立经骨保护素基因(OPG)修饰的Beagle犬骨髓基质细胞(BMSC)瞬时表达体系并检测其表达能力,为基因工程与组织工程联合治疗牙周病提供细胞基础。方法体外分离、培养Beagle犬BMSC,通过脂质体法将已鉴定的目的基因瞬时转染至BMSC,并用RT-PCR鉴定OPG是否有转录,同时通过Westernblot方法检测OPG在6周内的表达水平。结果重组质粒pSecTag2/B-OPG经HindⅢ单酶切及EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,电泳显示切下的片段均与预期大小相符,经测序证实此基因与GeneBank中[gi:33878056]提供的序列一致;鉴定正确的重组质粒在BMSC中有转录,并且在39d内都明显有OPG表达。结论建立了骨保护素基因修饰的骨髓基质细胞瞬时表达体系。 展开更多
关键词 成骨细胞 骨髓基质细胞 基因表达
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变链素的纯化
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作者 杨柳 许晓芳 +2 位作者 杨佰霞 柳雯 李颂 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期565-569,共5页
目的从变异链球菌临床株中分离纯化变链素,为进一步从分子水平研究变链素奠定基础。方法通过抑菌活性检测,从变异链球菌临床株中选择出抑菌活性较强的菌株。用氯仿抽提法从该菌株培养液中粗提变链素,经固相萃取和反相高效液相色谱(RP-HP... 目的从变异链球菌临床株中分离纯化变链素,为进一步从分子水平研究变链素奠定基础。方法通过抑菌活性检测,从变异链球菌临床株中选择出抑菌活性较强的菌株。用氯仿抽提法从该菌株培养液中粗提变链素,经固相萃取和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对粗提物进行纯化。结果获得变链素活性较强的菌株1G。从其200 mL液体培养基中粗提出变链素约15μg,经固相萃取柱洗脱,再经过RP-HPLC的2次纯化,得到有抑菌活性的成分,此为纯化的变链素。结论变链素相对分子质量小,分离提纯步骤复杂,本实验得到纯化的变链素,为下一步研究变链素的氨基酸序列和基因序列奠定了基础。 展开更多
关键词 变异链球菌 变链素 反相高效液相色谱
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