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人sTRAIL基因的克隆、表达纯化及对人A549细胞的抗肿瘤活性作用
被引量：
8
1
作者
范清林
魏伟
+1 位作者
邹文艺
宋礼华
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期228-233,共6页
目的人TRAIL基因胞外区片段(114-281氨基酸残基,sTRAIL)的克隆、表达、纯化及对人肺腺癌A549细胞的抗肿瘤活性研究。方法采用PCR技术从人胎盘和肺cD-NA文库中扩增出全长人TRAIL基因,克隆到pUC19质粒载体上进行测序。然后再采用PCR技术,...
目的人TRAIL基因胞外区片段(114-281氨基酸残基,sTRAIL)的克隆、表达、纯化及对人肺腺癌A549细胞的抗肿瘤活性研究。方法采用PCR技术从人胎盘和肺cD-NA文库中扩增出全长人TRAIL基因,克隆到pUC19质粒载体上进行测序。然后再采用PCR技术,以全长人TRAIL基因为模板,扩增出sTRAIL基因片段并定向克隆到pET-11 a表达载体中,转化大肠杆菌BL21进行表达。表达后的产物经变性、复性和分离纯化,纯化后的sTRAIL用结晶紫染色法和流式细胞仪法测定其对人肺癌细胞A549的细胞毒性作用。结果从人胎盘和肺cDNA文库中都能扩增出全长人TRAIL基因,经测序表明与已发表的人TRAIL基因序列一致。扩增出的人sTRAIL基因克隆到表达质粒载体pET-11a,经IPTG诱导表达,表达量占细菌全菌蛋白的50%,纯化后的sTRAIL纯度大于98%,结晶紫法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性作用的IC50为(24±5.2)μg.L-1,流式细胞仪法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性具有明显的效应-时间依赖关系。结论本实验成功地克隆了人sTRAIL基因并实现其高表达,摸索出包涵体sTRAIL的变性、复性及其纯化方法,纯化后的sTRAIL蛋白对人A549肺癌细胞具有明显的细胞毒性作用,为进一步研究其功能与临床应用奠定了基础。
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关键词
人sTRAIL基因
克隆
表达
细胞毒性
A549细胞
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题名
人sTRAIL基因的克隆、表达纯化及对人A549细胞的抗肿瘤活性作用
被引量：
8
1
作者
范清林
魏伟
邹文艺
宋礼华
机构
安徽医科大学临床药理研究所.安徽省高校省级抗炎免疫药理学重点实验室
安徽
安科生物工程股份有限公司
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期228-233,共6页
基金
安徽省"十五"生物医药重大专项资助项目(No01303001)
安徽省自然科学基金资助项目(No01043302)
文摘
目的人TRAIL基因胞外区片段(114-281氨基酸残基,sTRAIL)的克隆、表达、纯化及对人肺腺癌A549细胞的抗肿瘤活性研究。方法采用PCR技术从人胎盘和肺cD-NA文库中扩增出全长人TRAIL基因,克隆到pUC19质粒载体上进行测序。然后再采用PCR技术,以全长人TRAIL基因为模板,扩增出sTRAIL基因片段并定向克隆到pET-11 a表达载体中,转化大肠杆菌BL21进行表达。表达后的产物经变性、复性和分离纯化,纯化后的sTRAIL用结晶紫染色法和流式细胞仪法测定其对人肺癌细胞A549的细胞毒性作用。结果从人胎盘和肺cDNA文库中都能扩增出全长人TRAIL基因,经测序表明与已发表的人TRAIL基因序列一致。扩增出的人sTRAIL基因克隆到表达质粒载体pET-11a,经IPTG诱导表达,表达量占细菌全菌蛋白的50%,纯化后的sTRAIL纯度大于98%,结晶紫法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性作用的IC50为(24±5.2)μg.L-1,流式细胞仪法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性具有明显的效应-时间依赖关系。结论本实验成功地克隆了人sTRAIL基因并实现其高表达,摸索出包涵体sTRAIL的变性、复性及其纯化方法,纯化后的sTRAIL蛋白对人A549肺癌细胞具有明显的细胞毒性作用,为进一步研究其功能与临床应用奠定了基础。
关键词
人sTRAIL基因
克隆
表达
细胞毒性
A549细胞
Keywords
sTRAIL
cDNA cloning
expression
cytotoxicity
A549 cell line
分类号
R329.25 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R342.3 [医药卫生—基础医学]
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作者
出处
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1
人sTRAIL基因的克隆、表达纯化及对人A549细胞的抗肿瘤活性作用
范清林
魏伟
邹文艺
宋礼华
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
8
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