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新型蒽环类衍生物HYY-014大鼠体内药代动力学和组织分布的研究 被引量：1
1
作者 赵明霞 鲁晓蓉 +3 位作者 张俊东 刘胜利 王界永 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第4期472-476,共5页
目的研究新型蒽环类衍生物HYY-014在大鼠体内的药代动力学和组织分布特征,为临床研究提供实验依据。方法大鼠单次尾静脉注射1.5 mg/kg的HYY-014后,采用LC-MS/MS法测定各时间点血浆和组织中HYY-014及其代谢物HYY-M3的浓度,药代动力学参数... 目的研究新型蒽环类衍生物HYY-014在大鼠体内的药代动力学和组织分布特征,为临床研究提供实验依据。方法大鼠单次尾静脉注射1.5 mg/kg的HYY-014后,采用LC-MS/MS法测定各时间点血浆和组织中HYY-014及其代谢物HYY-M3的浓度,药代动力学参数经DAS 3.0统计软件计算获得。结果采用统计矩方法处理药物浓度时间数据,HYY-014药代动力学参数Cmax、T1/2、Vd、CL、AUC0-t、MRT0-t分别为(1 628.6±618.6)μg/L、(24.4±3.6)h、(23.4±5.2)L/kg、(0.66±0.08)L/kg/h、(2 219.5±276.9)μg/L·h、(15.1±2.4)h;HYY-M3药代动力学参数Cmax、AUC0-t分别为(2.2±0.6)μg/L、(103.1±13.7)μg/L·h。静脉注射该药后,很快向机体的各组织广泛分布,且具有明显的靶向性,主要分布在脾、肾、肺、心脏、肝等组织,脑组织中浓度极低。结论静脉注射HYY-014组织分布广泛,具有明显的靶向性,肺、肝组织中的药物浓度均较高,不能通过血脑屏障。 展开更多
关键词 HYY-014 蒽环类衍生物 药代动力学 组织分布 大鼠 液相色谱-串联质谱
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采用慢病毒载体干扰TRAF2表达的MH7A细胞稳转株的构建及意义
2
作者 陈露颖 蒋励萍 +5 位作者 王伟康 左书俊 蒯佳婕 马旸 韩陈陈 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第2期193-199,共7页
目的 用慢病毒载体构建干扰肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)表达的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞株MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号在MH7A异常增殖的作用。方法 根据人TRAF2的基因序列和shRNA序列设计原则,设计并合成3对TRAF2-sh... 目的 用慢病毒载体构建干扰肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)表达的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞株MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号在MH7A异常增殖的作用。方法 根据人TRAF2的基因序列和shRNA序列设计原则,设计并合成3对TRAF2-shRNA干扰序列,通过PCR对引物进行退火,通过双酶切PLKO.1-puro获得线性载体,将线性化载体与退火后引物通过Solution I连接,连接产物导入感受态细胞,涂板,挑取阳性菌落进行测序。构建3种不同的PLKO.1-TRAF2-shRNA慢病毒重组质粒,借助慢病毒包装质粒对对数生长期的HEK 293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒液感染MH7A细胞,同时使用嘌呤霉素对TRAF2低表达的MH7A稳转株进行筛选。使用CCK-8法、Western blot、qPCR检测MH7A中肿瘤坏死因子TNF-α诱导TRAF2低表达的MH7A增殖功能及下游信号TRAF2、P65蛋白表达和mRNA水平。结果 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1)、PLKO.1-TRAF2-shRNA(2)和PLKO.1-TRAF2-shRNA(3)慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro,将3个TRAF2-shRNA慢病毒载体质粒和对照组慢病毒载体质粒PLKO.1-puro分别与慢病毒包装质粒导入HEK 293T获得病毒液,将病毒液感染MH7A细胞后,经嘌呤霉素(2.00μg/ml)筛选,2 d得到MH7A稳转株;qPCR和Western blot结果显示,PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株中TRAF2 mRNA和蛋白的表达较阴性对照组明显下降;CCK-8和Western blot结果表明,MH7A中TRAF2敲低后,TNF-α诱导的TRAF2低表达的MH7A细胞增殖和P65的磷酸化水平明显下降。结论 成功构建了PLKO.1-TRAF2-shRNA(1) MH7A细胞稳转株,研究TNF-α-TRAF2信号活化介导RA滑膜细胞异常增殖中的作用。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 MH7A 肿瘤坏死因子受体相关因子2 慢病毒载体
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芍药苷-6′-O苯磺酸酯调节GRK2对CIA大鼠巨噬细胞JAK1/STAT3信号通路的影响 被引量：5
3
作者 斯梦 张春梅 +1 位作者 姜玲 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期781-790,共10页
目的明确芍药苷-6′-O苯磺酸酯(代号CP-25)调节G蛋白偶联受体激酶2(G protein coupled receptor kinase 2,GRK2)发挥对胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠巨噬细胞JAK1/STAT3信号通路的抑制作用。方法SD雄性大鼠随机分为... 目的明确芍药苷-6′-O苯磺酸酯(代号CP-25)调节G蛋白偶联受体激酶2(G protein coupled receptor kinase 2,GRK2)发挥对胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠巨噬细胞JAK1/STAT3信号通路的抑制作用。方法SD雄性大鼠随机分为4组:正常组、模型组、CP-25(50 mg·kg-1·d-1)组、MTX(0.5 mg·kg-1·3d-1)组。在造模后连续21 d灌胃给药。观察检测大鼠整体指标,检测大鼠腹腔巨噬细胞培养上清和外周血血清中IL-6、PGE2的水平、CD86/CD206的比值、GRK2的胞膜表达及GRK2与JAK1共定位、JAK1/STAT3蛋白表达及p-STAT3入核情况。提取正常大鼠腹腔巨噬细胞,体外IL-6、PGE2刺激24 h后,分别检测上述指标。结果CP-25可明显改善大鼠关节肿胀和全身炎症情况,降低大鼠腹腔巨噬细胞培养上清和外周血中IL-6和PGE2的水平,CP-25明显降低巨噬细胞CD86/CD206、JAK1/STAT3蛋白表达及GRK2胞膜表达、p-STAT3入核,增加GRK2与JAK1的共定位结合率。结论CP-25对CIA大鼠发挥治疗作用,其重要作用机制之一是通过调节GRK2活性,进而抑制JAK1/STAT3信号通路。 展开更多
关键词 胶原性关节炎 巨噬细胞 GRK2 JAK1 STAT3 CP-25
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性别对咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型建立的影响 被引量：4
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作者 罗婷婷 韩陈陈 +4 位作者 崔东倩 张雨 刘倩 马旸 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第4期634-639,共6页
建立咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病模型,对模型进行评价并探究性别对IMQ诱导小鼠银屑病模型建立的影响。BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为正常对照组、模型组1(雄性)、模型组2(雌性),将IMQ涂抹于小鼠背部皮肤建立小鼠银屑病模型。每天对... 建立咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病模型,对模型进行评价并探究性别对IMQ诱导小鼠银屑病模型建立的影响。BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为正常对照组、模型组1(雄性)、模型组2(雌性),将IMQ涂抹于小鼠背部皮肤建立小鼠银屑病模型。每天对小鼠皮肤进行银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分,HE染色观察皮肤组织病理学改变,计算脾脏指数、胸腺指数,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和免疫荧光法检测内披蛋白的表达情况。与对照组小鼠相比,IMQ诱导的雄性和雌性小鼠皮肤均表现出鳞屑、红斑和增厚现象并持续加重,PASI评分也呈相同的结果。HE染色发现与对照组小鼠相比,IMQ诱导的雄性和雌性小鼠表皮均增厚(P<0.001),表皮浅层可见毛细血管扩张、炎症细胞浸润、角质层可见角化不全、颗粒层变薄甚至消失、棘层肥厚、并有表皮突下延。IMQ诱导的小鼠脾脏指数增大(P<0.001),雌雄小鼠脾脏指数变化差异无统计学意义。IMQ诱导的雄性和雌性小鼠角质形成细胞表达数量增多(P<0.05),且存在异常分化现象,雌雄小鼠PCNA和内披蛋白的表达差异无统计学意义。IMQ诱导的小鼠银屑病模型与人类银屑病具有许多相似性,且性别对IMQ诱导小鼠银屑病模型的建立几乎没有影响。 展开更多
关键词 性别 银屑病 咪喹莫特 动物模型
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小檗碱调节ERK/NF-κB信号通路改善高糖诱导的系膜细胞异常增殖 被引量：4
5
作者 胡亚琴 汪佳佳 +3 位作者 吴昊 刘青 唐丽琴 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第5期671-675,共5页
目的探讨小檗碱(BBR)对高糖(HG)诱导的系膜细胞(MCs)异常增殖的调节作用及可能的机制。方法体外培养MCs,实验分为对照、高糖模型和BBR给药组(30、60、90μmol/L);CCK-8法检测细胞增殖活力;高内涵系统成像法检测细胞的增殖能力;激光共聚... 目的探讨小檗碱(BBR)对高糖(HG)诱导的系膜细胞(MCs)异常增殖的调节作用及可能的机制。方法体外培养MCs,实验分为对照、高糖模型和BBR给药组(30、60、90μmol/L);CCK-8法检测细胞增殖活力;高内涵系统成像法检测细胞的增殖能力;激光共聚焦法检测细胞外基质沉积蛋白(ECM)Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)表达情况;Western blot法检测细胞上细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、磷酸化促分裂原激活激酶1(p-MSK1)、IκB、p-IκB、p65、p-p65的蛋白表达情况。结果CCK-8法结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)均可抑制MCs的增殖活力;高内涵系统成像结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)可抑制HG诱导的MCs的异常增殖;激光共聚焦实验结果显示,BBR(90μmol/L)能降低ECM上的Col-Ⅳ、FN的表达水平;Western blot实验结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)能降低MCs上p-ERK、p-MSK1、p-IκB、p-p65蛋白的表达水平。结论BBR可能调节MCs上的ERK/NF-κB的信号通路,改善HG诱导的MCs异常增殖。 展开更多
关键词 小檗碱 糖尿病肾病 系膜细胞 细胞外调节蛋白激酶 核转录因子ΚB
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抑制GRK2异常转膜控制JAK1-STAT1信号转导减少CIA小鼠树突状细胞的成熟 被引量：2
6
作者 张春梅 斯梦 +3 位作者 刘潇一 杨雪枝 姜玲 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期832-841,共10页
目的G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)异常活化和JAK1-STAT1信号转导异常参与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的免疫异常反应,但两者关系不清。该文研究了GRK2对胶原性关节炎(collagen-induced art... 目的G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)异常活化和JAK1-STAT1信号转导异常参与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的免疫异常反应,但两者关系不清。该文研究了GRK2对胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠树突状细胞(dendritic cells,DCs)JAK1-STAT1信号通路的作用和机制,为揭示RA的新机制提供依据。方法建立CIA模型,流式细胞术检测DCs共刺激分子水平,ELISA检测小鼠血浆细胞因子水平,免疫组化法检测脾脏组织中p-JAK1、p-STAT1、GRK2的表达。体外用骨髓细胞诱导成DCs,IFN-α和PGE2刺激48 h。流式细胞术检测DCs共刺激分子水平和吞噬能力,ELISA检测细胞上清中细胞因子水平。CO-IP法检测DCs中GRK2和JAK1共定位。Western blot法检测JAK1、STAT1、胞膜GRK2表达。成像流式细胞术检测p-STAT1入核率。结果CIA小鼠中DCs共刺激分子水平升高,脾脏中GRK2与p-JAK1、p-STAT1的表达呈正相关,且CIA组脾脏中GRK2与JAK1共定位明显下降。体外实验表明,GRK2抑制剂降低DCs共刺激分子表达、IL-6和TNF-α水平,JAK1、STAT1表达、GRK2胞膜表达、p-STAT1入核,增加DCs吞噬功能及GRK2与JAK1的共定位。结论DCs中GRK2转膜异常,介导了DCs的成熟和JAK1-STAT1信号通路活化,抑制GRK2转膜可恢复其对DCs的JAK1-STAT1信号转导的控制,减少DCs的成熟,在改善小鼠CIA中发挥重要作用。 展开更多
关键词 树突状细胞 G蛋白偶联受体激酶2 JAK1 STAT1 IFN-Α PGE2
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Cytomics FC500与ImageStream^X MarkⅡ检测大鼠脾脏T、B细胞亚群TDO_2表达的比较 被引量：1
7
作者 张冰洁 李丝雨 +2 位作者 赵英杰 常艳 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第9期1455-1459,共5页
用常规方法制备大鼠脾脏细胞悬液,分别用Cytomics FC500流式细胞仪(FC500)和ImageStream^X MarkⅡ成像流式细胞仪(MarkⅡ)检测大鼠脾脏辅助性T细胞(CD3^+CD4^+)、细胞毒性T细胞(CD3^+CD8^+)、B细胞(CD45R^+)色氨酸2,3双加氧酶(TDO2)的... 用常规方法制备大鼠脾脏细胞悬液,分别用Cytomics FC500流式细胞仪(FC500)和ImageStream^X MarkⅡ成像流式细胞仪(MarkⅡ)检测大鼠脾脏辅助性T细胞(CD3^+CD4^+)、细胞毒性T细胞(CD3^+CD8^+)、B细胞(CD45R^+)色氨酸2,3双加氧酶(TDO2)的表达水平,并观察2种检测技术检测结果的相关性和一致性。结果显示,2种流式细胞仪测得的CD3^+CD4^+T细胞、CD3^+CD8^+T细胞和CD45R^+B细胞表达TDO2的相关性较好(R^2均>0.8)。Bland-Altman法分析2种检测技术测得CD3^+CD4^+细胞、CD3^+CD8^+细胞和CD45R^+细胞表达TDO2的偏倚较小,分别为-1.3%、-8.2%、7.4%。TDO2在大鼠脾脏T、B细胞中均有表达。FC500和MarkⅡ检测结果的相关性和一致性较好。FC500操作方便,速度快。MarkⅡ将传统流式细胞术的高通量分析与细胞形态学分析相结合,精确度高,可获得细胞具体图片。 展开更多
关键词 流式细胞术 T、B细胞 TDO_2 相关性 一致性
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