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茶苗嫩根cDNA文库的构建和EST分析 被引量:14
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作者 史成颖 宛晓春 +1 位作者 江昌俊 张正竹 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期126-130,共5页
以茶苗嫩根为材料,采用SMART技术构建了cDNA文库并对其质量进行了鉴定。结果显示,该文库的重组率为92%,库容量为5×105,平均插入片段长度超过1 kb,是一个较高质量的文库。从文库中随机挑取克隆并从5′端单向测定2 651个克隆,获得2 ... 以茶苗嫩根为材料,采用SMART技术构建了cDNA文库并对其质量进行了鉴定。结果显示,该文库的重组率为92%,库容量为5×105,平均插入片段长度超过1 kb,是一个较高质量的文库。从文库中随机挑取克隆并从5′端单向测定2 651个克隆,获得2 600个有效的EST(expressed sequence tag),序列的平均长度为703 bp,用Phrap软件进行拼接,结果获得404个contigs、610个singlets。通过与NCBI的非冗余核酸数据库进行Blastx比对,初步确定已知功能基因734个,推定功能基因102个,未知功能基因178个。该结果既为进一步分离克隆茶树根部功能基因奠定了基础,又为以后的差异杂交获取茶树根部特定代谢途径的酶基因及相关的调控基因提供了平台。 展开更多
关键词 CDNA文库 嫩根 茶树 表达序列标签 测序
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茶树咖啡碱合酶cDNA在大肠杆菌中的表达 被引量:10
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作者 余有本 江昌俊 +2 位作者 王朝霞 李叶云 宛晓春 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期105-109,共5页
通过RT PCR法扩增出茶树咖啡碱合酶 (TCS)cDNA编码区全序列 ,并将其克隆到表达载体pET 32a (+)中 ,得到重组质粒pET TCS ,在表达宿主菌BL2 1trxB (DE3)中高效表达 ,产生相对分子质量约为 6 2 0 0 0的融合蛋白。该融合蛋白包括 112个氨... 通过RT PCR法扩增出茶树咖啡碱合酶 (TCS)cDNA编码区全序列 ,并将其克隆到表达载体pET 32a (+)中 ,得到重组质粒pET TCS ,在表达宿主菌BL2 1trxB (DE3)中高效表达 ,产生相对分子质量约为 6 2 0 0 0的融合蛋白。该融合蛋白包括 112个氨基酸残基的硫氧还原蛋白及 370个氨基酸残基的茶树TCS蛋白。实验结果表明 ,随着诱导时间的延长 ,表达的融合蛋白产量逐渐增加 ,表达蛋白总量最高可达到菌体总蛋白的 39 14 % ;在 15、 2 5和 37℃ 3个不同的诱导温度下 ,均能诱导产生融合蛋白 ,而且产生的总量及其可溶性部分所占比例均随诱导温度升高而增加 ;在菌体的各个部位中 ,融合蛋白主要在细胞质中以可溶的形式进行表达 ,有少量在外周质中表达或以包涵体形式在细胞质中表达。另外 ,体外酶促反应表明 ,表达的融合蛋白能催化可可碱甲基化生成咖啡碱 ,具有正常的生物学活性。 展开更多
关键词 茶树 咖啡碱合酶cDNA 大肠杆菌 表达
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茶树咖啡碱合成酶基因cDNA在烟草中的表达 被引量:5
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作者 余有本 江昌俊 +1 位作者 宛晓春 黎星辉 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第11期181-186,共6页
为了在烟草中合成咖啡碱,将咖啡碱合成酶(Tea caffeine synthase,TCS)基因cDNA全序列克隆到双元载体pBI121中,通过农杆菌叶盘转化法将TCS基因成功转入烟草,结果得到72株转基因烟草植株。对其中3株转基因植株进行PCR检测和PCR-Southern检... 为了在烟草中合成咖啡碱,将咖啡碱合成酶(Tea caffeine synthase,TCS)基因cDNA全序列克隆到双元载体pBI121中,通过农杆菌叶盘转化法将TCS基因成功转入烟草,结果得到72株转基因烟草植株。对其中3株转基因植株进行PCR检测和PCR-Southern检测,证实TCS基因已整合到基因组中;RT-PCR和Northern分析显示,TCS在这些植株中均能正常转录。用从转基因植株中提取的粗酶液进行体外酶促反应,能催化7-甲基黄嘌呤和可可碱向咖啡碱的转变,由此表明,转基因烟草植株中能产生具有正常生物学活性的TCS,但从3株转基因烟草中均未检测到咖啡碱。 展开更多
关键词 咖啡碱 咖啡碱合成酶 转基因烟草
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茶多酚双液相氧化制取茶色素工艺研究 被引量:5
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作者 李立祥 萧伟祥 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期99-104,共6页
研究了茶多酚双液相氧化制取茶色素工艺。结果表明 :放大实验较优化实验茶色素中茶黄素 (TFs)含量更高 ;反应液中TFs萃取效率以第 1次最高 ,其他各次效率依次降低。对茶色素进行Tris HCl (pH 8 0 )洗涤 ,其洗涤效率也以第 1次最高 ,TFs... 研究了茶多酚双液相氧化制取茶色素工艺。结果表明 :放大实验较优化实验茶色素中茶黄素 (TFs)含量更高 ;反应液中TFs萃取效率以第 1次最高 ,其他各次效率依次降低。对茶色素进行Tris HCl (pH 8 0 )洗涤 ,其洗涤效率也以第 1次最高 ,TFs含量随洗涤次数增多呈现递增趋势 ,但被洗液体积呈递减趋势 ,并存在脱没食子酰基作用。 展开更多
关键词 茶多酚 儿茶素 酸性氧化 茶色素 茶黄素 双液相 工艺
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酸性条件对茶多酚酸性氧化的影响 被引量:3
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作者 李立祥 《中国茶叶加工》 2003年第2期28-30,共3页
经酸性氧化条件筛选及对茶多酚酸性氧化影响的研究,结果表明:茶多酚酸性氧化均可在有机酸和无机盐酸性盐的酸性环境中进行,无机酸性盐的酸性环境更有利子茶多酚酸性氧化形成TFs。
关键词 茶多酚 酸性氧化 茶色素 双液相系统 茶黄素
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