浅析中医药大学开设生命科学类通识教育课程的必要性和方法 被引量：2

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作者 储俊 吴家文 李庆林 《安徽农学通报》 2015年第13期129-131,共3页

生命科学的快速发展已经对整个社会的进步起着巨大的推动作用。为了完善高等学校的人才培养方案,国内外很多高校都将生命科学类课程作为大学生的通识教育模块的核心组成。该文初步讨论了在中医药类大学开设生命科学类通识教育课程的意义... 生命科学的快速发展已经对整个社会的进步起着巨大的推动作用。为了完善高等学校的人才培养方案,国内外很多高校都将生命科学类课程作为大学生的通识教育模块的核心组成。该文初步讨论了在中医药类大学开设生命科学类通识教育课程的意义,教学内容、教学方法及考核方式等,为这类课程在学校的顺利开展提供了参考。 展开更多

关键词 通识教育 生命科学 教学改革

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毛茛中与苯丙烷生物合成途径相关的1R-MYB类转录因子的鉴定与分析

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作者 樊金世博 钟欣欣 +3 位作者 单婷玉 张京晶 王郅炜 吴家文 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期478-487,共10页

1R-MYB家族在植物生长发育、抗胁迫、次生代谢物合成中具有重要的调控作用。本研究基于毛茛(Ranunculus japonicus Thunb.)的全长转录组测序数据库,分析了其1R-MYB家族成员的基序、系统进化关系、表达特性、空间结构及功能。结果共鉴定... 1R-MYB家族在植物生长发育、抗胁迫、次生代谢物合成中具有重要的调控作用。本研究基于毛茛(Ranunculus japonicus Thunb.)的全长转录组测序数据库,分析了其1R-MYB家族成员的基序、系统进化关系、表达特性、空间结构及功能。结果共鉴定出221个1R-MYB基因,其中18个通过KEGG富集到苯丙烷生物合成途径,可能调控此途径中的过氧化物酶。研究结果为深入探究毛茛1R-MYB转录因子调控苯丙烷的生物合成机制奠定了基础。 展开更多

关键词 毛茛 转录因子 全长转录组 1R-MYB 苯丙烷生物合成途径

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电针针刺内关、郄门穴对急性心肌缺血模型大鼠心肌能量代谢的影响 被引量：8

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作者 周婧 丁丽 +6 位作者 邓坤 章燕 李广兵 朱涛 周巧 王堃 张宸 《海南医学院学报》 CAS 2021年第15期1127-1131,1136,共6页

目的:观察电针针刺内关、郄门穴对冠脉结扎所致的急性心肌缺血大鼠模型的心肌能量代谢的影响。方法:将40只标准SD大鼠随机分为内关组、郄门组、模型组、假手术组。采用冠脉结扎的方法制备急性心肌缺血大鼠模型,假手术组只穿线不结扎。... 目的:观察电针针刺内关、郄门穴对冠脉结扎所致的急性心肌缺血大鼠模型的心肌能量代谢的影响。方法:将40只标准SD大鼠随机分为内关组、郄门组、模型组、假手术组。采用冠脉结扎的方法制备急性心肌缺血大鼠模型,假手术组只穿线不结扎。造模成功后,内关组电针针刺内关穴、郄门组电针针刺郄门穴。模型组与假手术组不予以电针针刺治疗,于每天同一时间使用与内关组及郄门组相同的方法进行抓取和固定,每天1次,连续14 d。实验结束后,采用HE染色法观察各组大鼠心肌病理学的动态变化、试剂盒检测游离脂肪酸(FFA)、三磷酸腺苷(ATP)含量和Na^(+)-K^(+)-ATP酶活力。结果:病理结果显示,针刺郄门、内关可改善缺血心肌细胞损伤;与假手术组相比,模型组FFA增高,ATP含量和Na^(+)-K^(+)-ATP酶活力降低,差异均具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,郄门组、内关组FFA减少,ATP含量和Na^(+)-K^(+)-ATP酶活力增高,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:电针针刺手厥阴心包经腧穴可以改善缺血心肌细胞损伤,改善心肌细胞能量代谢。 展开更多

关键词 针刺 急性心肌缺血 心肌能量代谢

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芪玉三龙汤通过PD-1信号通路增强Th1免疫反应抑制肺癌转移 被引量：6

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作者 焦安男 吴欢 +4 位作者 朱洁 张梅 李平 李泽庚 陈杨 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第11期1718-1724,共7页

目的探讨芪玉三龙汤(QYSLD)通过PD-1信号通路调节肿瘤免疫微环境抑制肺癌及对肺癌荷瘤小鼠Th1免疫反应的影响。方法应用Lewis肺癌细胞株(LLC)细胞培养移植法建立小鼠皮下移植瘤模型,将72只模型小鼠随机分为对照组、顺铂组、QYSLD组和联... 目的探讨芪玉三龙汤(QYSLD)通过PD-1信号通路调节肿瘤免疫微环境抑制肺癌及对肺癌荷瘤小鼠Th1免疫反应的影响。方法应用Lewis肺癌细胞株(LLC)细胞培养移植法建立小鼠皮下移植瘤模型,将72只模型小鼠随机分为对照组、顺铂组、QYSLD组和联合组,每组18只。观察小鼠一般生存情况;应用ELISA法检测小鼠肿瘤抗原特异性Th1细胞反应情况;流式细胞术检测小鼠脾脏T细胞中PD-1阳性细胞比例及记忆性CD4^(+)T细胞凋亡情况;药物处理小鼠21 d后,在解剖显微镜下计数肺表面转移瘤结节的数目与体积。结果QYSLD可改善肺癌荷瘤小鼠一般生存情况,上调小鼠CD4^(+)T细胞免疫反应及CD8^(+)T细胞特异性杀肿瘤细胞效应,下调小鼠脾脏T细胞中PD-1阳性细胞及CD4^(+)记忆性T细胞中凋亡细胞的比例;抑制小鼠肿瘤细胞的肺转移。结论QYSLD可改善肺癌荷瘤小鼠的生存状态并通过介导PD-1信号通路,增强Th1免疫反应,调节肿瘤免疫微环境,抑制肿瘤细胞免疫逃逸,从而达到抑制肺癌转移的作用。 展开更多

关键词 肺癌 芪玉三龙汤 PD-1 TH1 转移

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Ferrostatin-1通过抑制Ferroptosis保护谷氨酸诱导的HT-22细胞损伤 被引量：6

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作者 刘晨旭 宋蕊 李庆林 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2016年第10期1126-1131,共6页

目的:观察谷氨酸诱导HT-22细胞发生Ferroptosis的现象,以及初步探讨Ferrostatin-1对谷氨酸损伤的HT-22细胞保护作用机制。方法:建立谷氨酸损伤HT-22细胞研究模型,并采用MTT检测细胞存活率,同时观察3-Methyladenine、Z-VAD-FMK、Necrosta... 目的:观察谷氨酸诱导HT-22细胞发生Ferroptosis的现象,以及初步探讨Ferrostatin-1对谷氨酸损伤的HT-22细胞保护作用机制。方法:建立谷氨酸损伤HT-22细胞研究模型,并采用MTT检测细胞存活率,同时观察3-Methyladenine、Z-VAD-FMK、Necrostatin-1、Ferrostatin-1对细胞存活率的影响;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测乳酸脱氢酶的漏出率;流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的含量变化;生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)变化。结果:5mmol/L谷氨酸作用HT-22细胞24 h后,能明显抑制细胞生长(P<0.01);增加细胞LDH的释放;ROS含量增加;SOD活性下降;GSH水平下降。Ferrostatin-1预处理后,谷氨酸诱导的HT-22细胞存活率显著增加(P<0.01),而3-Methyladenine、Z-VAD-FMK、Necrostatin-1不能显著阻止谷氨酸对HT-22细胞的生长抑制作用;同时,Ferrostatin-1能够阻止谷氨酸引起的细胞内LDH释放,减少ROS生成;SOD活性增加;促进GSH水平增加。结论:谷氨酸损伤的HT-22细胞可以被Ferroptosis特异性抑制剂Ferrostatin-1阻断,不能被其他死亡抑制剂阻断,表明谷氨酸诱导的HT-22细胞发生了Ferroptosis。谷氨酸通过引起ROS升高,降低细胞内GSH水平、SOD活性诱导HT-22细胞发生Ferroptosis。Ferrostatin-1对谷氨酸损伤的HT-22细胞具有保护作用,其作用机制与抗氧化的发生有关。 展开更多

关键词 谷氨酸 HT-22 Ferroptosis Ferrostatin-1 神经保护

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UPLC-ESI-QTOF/MS^E结合UNIFI快速分析华蟾素注射液化学成分 被引量：15

6

作者 吴欢 唐卯星 +4 位作者 陶欣怡 占翔 仇静文 高波 李庆林 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期498-506,共9页

采用超高效液相色谱-电喷雾离子源-四级杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-QTOF/MS)结合UNIFI天然产物信息平台快速分析华蟾素注射液化学成分。利用QTOF/MS非信息依赖扫描的MS^E模式采集复杂组分质谱信息,将采集的质谱数据文件和自建化学成分库导... 采用超高效液相色谱-电喷雾离子源-四级杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-QTOF/MS)结合UNIFI天然产物信息平台快速分析华蟾素注射液化学成分。利用QTOF/MS非信息依赖扫描的MS^E模式采集复杂组分质谱信息,将采集的质谱数据文件和自建化学成分库导入UNIFI,进行智能匹配,随后使用MassLynx工作站逐个核对。本实验共辨识76个化学成分,其中蟾蜍二烯羟酸内酯类36个、生物碱类12个(包括1种新成分)、小分子肽类13个、有机酸类7个、酰胺类4个、甾醇类2个、其他类2个。本方法能快速分离、分析华蟾素注射液复杂组分,为该制剂的毒-效成分及质量控制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 华蟾素注射液 UPLC-ESI-QTOF/MS UNIFI 化学成分

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基于转录组测序的细风轮花青素合成途径及关键酶基因分析 被引量：11

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作者 赵历强 单春苗 +3 位作者 张声祥 施圆圆 马克龙 吴家文 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期886-896,共11页

为进一步理解细风轮花青素合成途径,本研究利用华大基因BGISEQ-500平台对细风轮中的根、茎、叶、花4个组织进行了转录组测序,从头组装后得到128856个Unigene。KEGG通路表明有40个Unigene编码了细风轮的花青素生物合成途径中6个关键酶。... 为进一步理解细风轮花青素合成途径,本研究利用华大基因BGISEQ-500平台对细风轮中的根、茎、叶、花4个组织进行了转录组测序,从头组装后得到128856个Unigene。KEGG通路表明有40个Unigene编码了细风轮的花青素生物合成途径中6个关键酶。我们对其中的关键酶DFR(二氢黄酮醇还原酶)进行同源比对和空间结构模拟,结果显示DFR序列和结构均具有良好的保守性,且具有高度保守的NAD+结合位点,其二级结构主要由α螺旋和β折叠组成,在空间上α螺旋包裹着β折叠,形成“夹心饼干”样结构。 展开更多

关键词 细风轮 花青素 转录组 单基因 二氢黄酮醇还原酶

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异叶天南星苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与蛋白结构分析 被引量：9

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作者 施圆圆 张声祥 +3 位作者 赵德蕊 王晨凯 马克龙 吴家文 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期221-229,共9页

以异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume)为材料,采用逆转录PCR(RT-PCR)法扩增其苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase,PAL)基因Ah PAL,获得该基因的开放读码框(ORF),并通过系统的生物信息学软件分析Ah PAL的结构和理化性质... 以异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume)为材料,采用逆转录PCR(RT-PCR)法扩增其苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase,PAL)基因Ah PAL,获得该基因的开放读码框(ORF),并通过系统的生物信息学软件分析Ah PAL的结构和理化性质。结果显示,Ah PAL的ORF全长为2184 bp,编码727个氨基酸;Ah PAL与郁金香(Tulipa fosteriana W. Irving) PAL的亲缘关系最近,序列相似性达88%。空间结构模型分析结果显示,Ah PAL为同型四聚体,每个单体由3个结构域组成,其中MIO结构域含有PAL酶家族的保守序列和Ala-Ser-Gly三肽活性中心,是Ah PAL酶活性的决定性结构域。利用荧光定量PCR方法检测3个Ah PAL Unigene在根、块茎和叶中的表达情况,发现它们在根中表达量均最高,而在叶和块茎中表达较低。 展开更多

关键词 异叶天南星 苯丙氨酸解氨酶 基因克隆 生物信息学分析

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三叶木通转录组分析及三萜皂苷生物合成途径关键酶基因的发掘 被引量：1

9

作者 钱程程 赵历强 +3 位作者 杨亚湉 韩邦兴 吴家文 欧金梅 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期378-389,共12页

为了解三叶木通(Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.)的三萜皂苷合成途径及其关键酶,本研究对其花、叶、根、茎进行转录组测序,组装获得了57.25 Gb数据,含140859个unigenes,序列平均长度为1350 bp。KEGG代谢通路富集结果显示,517个unigene... 为了解三叶木通(Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.)的三萜皂苷合成途径及其关键酶,本研究对其花、叶、根、茎进行转录组测序,组装获得了57.25 Gb数据,含140859个unigenes,序列平均长度为1350 bp。KEGG代谢通路富集结果显示,517个unigenes参与三萜皂苷合成相关的3条代谢途径,其中415个unigenes编码三萜皂苷生物合成途径的19个关键酶。对三萜皂苷生物合成过程中的关键酶角鲨烯环氧酶(SE)进行序列分析和同源建模,发现其具有保守的底物结合结构域。将三叶木通茎与花、叶、根的基因表达水平进行比较,发现茎与根相比较其上调基因数目最多,其中295个差异表达基因(DEGs)与三萜皂苷生物合成途径相关。 展开更多

关键词 三叶木通 转录组测序 三萜皂苷 生物合成 角鲨烯环氧酶

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蛇床子三螺旋转录因子基因的克隆与表达分析

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作者 王希强 尹登科 +1 位作者 储俊 吴家文 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期24-29,共6页

研究的目的是克隆中药蛇床子[Cnidium monnieri(L.)Cuss.]三螺旋转录因子(Trihelix transcription factor,ttf)基因,诱导、鉴定其蛋白体外表达,并利用生物信息学方法分析该蛋白的结构和性质。主要采用RT-PCR方法扩增目的基因,连接到p MD... 研究的目的是克隆中药蛇床子[Cnidium monnieri(L.)Cuss.]三螺旋转录因子(Trihelix transcription factor,ttf)基因,诱导、鉴定其蛋白体外表达,并利用生物信息学方法分析该蛋白的结构和性质。主要采用RT-PCR方法扩增目的基因,连接到p MDTM19(Simple)-T克隆载体中,核酸序列鉴定正确后再将目的基因克隆到p ET-22b(+)表达载体上,将获得的重组质粒转化到大肠杆菌E.coli BL21细胞中,以不同浓度的诱导剂诱导其表达,进一步利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法检测目的蛋白的表达情况,并利用各种生物学软件对目的蛋白进行生物信息学分析。结果获得了ttf,构建了该基因的克隆和表达重组质粒,该基因在大肠杆菌BL21中能够被诱导表达,Western Blot结果表明,在预计的分子质量21 ku位置得到了目的蛋白;生物信息学分析表明,目的蛋白为可溶性蛋白,可能定位于细胞核和线粒体中;部分区域极有可能形成卷曲螺旋。研究首次成功体外克隆并在原核生物中表达了蛇床子三螺旋转录因子,并对其进行了系统的生物信息学分析,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 蛇床子 三螺旋转录因子 基因克隆 蛋白质表达 生物信息学

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超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法快速辨识芪玉三龙汤化学成分 被引量：12

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作者 黄梦文 吴欢 +5 位作者 于伟 王影 汪逢灿 张纯纯 周龙生 李泽庚 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期730-743,共14页

利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)的数据非依赖性采集(DIA)技术,结合靶向筛查方法,快速辨识芪玉三龙汤(Qi-Yu-San-Long decoction,QYSLD)化学成分。以Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)... 利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)的数据非依赖性采集(DIA)技术,结合靶向筛查方法,快速辨识芪玉三龙汤(Qi-Yu-San-Long decoction,QYSLD)化学成分。以Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)为色谱柱,流速为0.2 mL/min,柱温为35℃,进样量为2μL,以0.1%(v/v)甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾电离(ESI)源,以全信息串联质谱(MSE)技术在正、负离子模式下分别采集QYSLD复杂组分的质谱数据。通过检索文献和在线数据库,建立QYSLD中各单味药材化学成分库。将采集到的样品原始质谱数据与QYSLD化学成分库导入天然产物后处理筛查(UNIFI)平台;在UNIFI平台中设置参数(保留时间偏差为±0.1 min,精确质量数偏差阈值为±5×10^(-6),正离子模式下,选择[M+H]^(+)和[M+Na]^(+)为准分子离子或加合离子,负离子模式下,选择[M-H]^(-)和[M+HCOO]^(-))。经UNIFI平台对MSE模式下采集的质谱数据与自建数据库中成分作靶向筛查,结合化合物准分子离子、质谱裂解途径及部分对照品进行结构确认。从QYSLD中共识别出166种化学成分,其中皂苷类22种,生物碱类13种,黄酮类27种,萜类32种,氨基酸类20种,苯丙素类16种,有机酸类9种,甾醇类6种,蒽醌类6种,其他类15种。其中16种成分使用对照品作验证。研究建立的方法能够快速、可靠的表征QYSLD中的化学成分,为该复方的药效物质及质量控制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱 数据非依赖性采集 靶向筛查 芪玉三龙汤

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酸枣仁皂苷A对脂多糖诱导小胶质细胞活化的影响及神经保护作用 被引量：12

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作者 张睿 李冰洁 李庆林 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第2期126-131,共6页

目的:研究酸枣仁皂苷A(Ju A)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞神经炎症发生的影响及神经炎症导致的神经元细胞损伤的保护作用。方法:以LPS(1μg/mL)刺激BV-2小胶质细胞24 h建立神经炎症模型,采用不同浓度的Ju A(2.5、5、10μmol/L)进行... 目的:研究酸枣仁皂苷A(Ju A)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞神经炎症发生的影响及神经炎症导致的神经元细胞损伤的保护作用。方法:以LPS(1μg/mL)刺激BV-2小胶质细胞24 h建立神经炎症模型,采用不同浓度的Ju A(2.5、5、10μmol/L)进行干预。MTT法检测Ju A单独及联合LPS对BV-2细胞存活率的影响;Griess法检测Ju A对激活的BV-2细胞NO释放的影响;ELISA法检测BV-2细胞上清液中TNF-α、IL-1β分泌水平;DCFH-DA探针法检测BV-2细胞内ROS水平;MTT法检测Ju A干预后的BV-2条件培养基对正常小鼠海马神经元细胞(HT-22)存活率的影响。结果:MTT结果显示,Ju A在浓度范围内对BV-2的存活率无明显影响。Griess和ELISA实验结果表明,Ju A可抑制激活的BV-2细胞NO、TNF-α、IL-1β释放水平,同时Ju A还可抑制细胞内ROS水平。此外,Ju A干预的BV-2条件培养基可抑制神经炎症对HT-22海马神经元细胞的损伤。结论:Ju A可在体外抑制LPS诱导的BV-2细胞的炎症发生并保护HT-22细胞因神经炎症受到的损伤。 展开更多

关键词 酸枣仁皂苷A 小胶质细胞 海马神经元细胞 神经炎症 神经保护

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多花黄精果糖激酶和GDP-甘露糖焦磷酸化酶的基因克隆及酶结构性质 被引量：4

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作者 赵历强 赵德蕊 +3 位作者 单春苗 张声祥 施圆圆 吴家文 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1-6,共6页

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua,PC)果糖激酶(PCFRK)和GDP-甘露糖焦磷酸化酶(PCGMPP)是黄精多糖生物合成中重要的关键酶,为探究它们在黄精多糖生物合成途径中的作用,基于转录组测序数据分析,利用RT-PCR技术对这两种关键酶基因进行... 多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua,PC)果糖激酶(PCFRK)和GDP-甘露糖焦磷酸化酶(PCGMPP)是黄精多糖生物合成中重要的关键酶,为探究它们在黄精多糖生物合成途径中的作用,基于转录组测序数据分析,利用RT-PCR技术对这两种关键酶基因进行克隆,并分析酶蛋白的理化性质及结构特点。PCFRK开放读码框(ORF)为1725 bp,编码574个氨基酸,具有两个磷酸果糖激酶B家族的特征保守基序;PCGMPP的ORF为1086 bp,编码361个氨基酸,具有焦磷酸化酶家族的保守位点和活性位点。系统进化树分析发现在已知数据库中PC FRK与深圳拟兰FRK亲缘关系最近;而PC GMPP与芦笋GMPP亲缘关系最近。基因表达分析说明PCFRK和PCGMPP在根状茎中的基因表达总量明显高于其他组织,这与多花黄精根茎中多糖含量高于其他组织是一致的。研究为PCFRK和PCGMPP两种关键酶功能的进一步研究及黄精多糖生物合成途径的解析奠定基础。 展开更多

关键词 多花黄精 基因克隆 果糖激酶 GDP-甘露糖焦磷酸化酶 生物信息学分析

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人参灵芝胶囊缓解体力疲劳小鼠的试验 被引量：4

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作者 苏婧婧 李庆林 《安徽农业科学》 CAS 2019年第5期176-177,198,共3页

[目的]考察人参灵芝胶囊缓解实验性小鼠体力疲劳的作用。[方法]小鼠连续灌胃给予不同剂量(0.9、0.6、0.3 g/kg)的人参灵芝胶囊,阴性对照组给予等量蒸馏水。连续灌胃30 d后,测定小鼠负重游泳时间、运动后血清尿素含量、血乳酸含量、肝糖... [目的]考察人参灵芝胶囊缓解实验性小鼠体力疲劳的作用。[方法]小鼠连续灌胃给予不同剂量(0.9、0.6、0.3 g/kg)的人参灵芝胶囊,阴性对照组给予等量蒸馏水。连续灌胃30 d后,测定小鼠负重游泳时间、运动后血清尿素含量、血乳酸含量、肝糖原含量。[结果]与阴性对照组比较,高、中剂量组小鼠负重游泳时间显著延长,各给药组血清尿素含量明显降低,各给药组肝糖原含量明显升高,中剂量组小鼠游泳后20 min血乳酸值和血乳酸曲线下面积显著降低。[结论]人参灵芝胶囊具有缓解体力疲劳的作用。 展开更多

关键词 人参灵芝胶囊 缓解体力疲劳 负重游泳时间 血清尿素 血乳酸 肝糖原

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基于小RNA测序的风轮菜microRNA及其靶基因分析

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作者 许景垚 单春苗 +3 位作者 单婷玉 赵历强 马克龙 吴家文 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期216-228,共13页

本研究以风轮菜(Clinopodium chinense(Benth.)O.Kuntze)为材料,采用BGISEQ-500测序平台对风轮菜根、茎和叶的小RNA进行转录组测序,并对其黄酮类物质合成途径中参与调控的microRNA(miRNA)及其靶基因进行了分析。结果显示,鉴定出的保守mi... 本研究以风轮菜(Clinopodium chinense(Benth.)O.Kuntze)为材料,采用BGISEQ-500测序平台对风轮菜根、茎和叶的小RNA进行转录组测序,并对其黄酮类物质合成途径中参与调控的microRNA(miRNA)及其靶基因进行了分析。结果显示,鉴定出的保守miRNA有86个,属于26个家族,新发现miRNA 8个,筛选出风轮菜黄酮类物质合成途径中调控3个关键酶的候选miRNA(novel_mir3、miR167d-5p、miR396h)。通过对靶基因编码的关键酶4-香豆酸辅酶A连接酶进行序列分析和同源建模,发现其具有高度保守的底物结合区域、催化结构域及两个保守的肽基序。 展开更多

关键词 风轮菜 转录组测序 MIRNA 黄酮 4-香豆素辅酶A连接酶

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异叶天南星凝集素基因的克隆及蛋白的结构性质分析

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作者 李晟 赵德蕊 +5 位作者 张声祥 施圆圆 杨青山 王晨凯 单春苗 吴家文 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期36-41,共6页

克隆了中药材异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume)叶中凝集素(lectin)基因(Ahltn)的开放阅读框(ORF),并对其编码蛋白AhLTN的性质和结构进行了分析。首先从植物异叶天南星的新鲜叶片中提取总RNA,通过逆转录获取cDNA,经PCR扩增Ahlt... 克隆了中药材异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume)叶中凝集素(lectin)基因(Ahltn)的开放阅读框(ORF),并对其编码蛋白AhLTN的性质和结构进行了分析。首先从植物异叶天南星的新鲜叶片中提取总RNA,通过逆转录获取cDNA,经PCR扩增Ahltn后与pMD19-T载体连接构成重组质粒,然后转化到大肠杆菌感受态细胞中培养,经菌液PCR鉴定后再进行测序验证,确定目的基因被成功克隆,进一步运用各种生物信息学软件对AhLTN的理化性质、进化关系和空间结构进行分析。结果显示,克隆获得了Ahltn的ORF,此基因片段长度为561 bp,编码186个氨基酸的蛋白质,经生物信息学分析AhLTN属于稳定蛋白,AhLTN与铁皮石斛的凝集素亲缘关系最近,四级结构显示其为二聚体,且两个单体的C末端发生了交换,每个单体中含有11个β折叠,呈“三棱镜”型,3个面均有保守的甘露糖结合区域。为天南星植物凝集素基因和蛋白功能的进一步研究和开发利用奠定了基础。 展开更多

关键词 异叶天南星 凝集素 基因克隆 生物信息学分析

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