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基因共表达对人源LysoPLD异源可溶性表达、纯化及酶学性质的影响 被引量:1
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作者 马文君 滕琳 +2 位作者 王培培 卫宏远 郑春阳 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第7期102-109,共8页
目的:为实现人源溶血磷脂酶D(LysoPLD)的原核异源可溶性表达。方法:通过NCBI检索,确定人源LysoPLD基因序列(GenBank:L46720.1)。采用密码子优化后的序列,克隆至pET-28a表达载体中,采用共表达麦芽糖结合蛋白融合标签(MBP)和共表达促蛋白... 目的:为实现人源溶血磷脂酶D(LysoPLD)的原核异源可溶性表达。方法:通过NCBI检索,确定人源LysoPLD基因序列(GenBank:L46720.1)。采用密码子优化后的序列,克隆至pET-28a表达载体中,采用共表达麦芽糖结合蛋白融合标签(MBP)和共表达促蛋白正确折叠分子伴侣触发因子Trigger factor(tig)两种方式提高LysoPLD蛋白在大肠杆菌中的异源可溶性表达,建立对应蛋白的纯化工艺包括离子柱纯化,硫酸铵盐析,疏水柱纯化,淀粉树脂柱(Amylose Resin)纯化,分离纯化获得的重组酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定蛋白纯度,以对羟基棕榈酸酯为底物对比两种蛋白的酶学性质。结果:成功构建载体pET28a-MBP-LysoPLD和pET28a-pTF16-LysoPLD,并获得工程菌BL21(DE3)-pET28a-MBP-LysoPLD和BL21(DE3)-pET28a-pTf16-LysoPLD。BL21(DE3)-pET28a-MBP-LysoPLD经0.6 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)低温诱导过夜可获得上清表达的MBP-LysoPLD蛋白;BL21(DE3)-pET28a-pTf16-LysoPLD在含有0.5μg/mL L-Arabinose的LB培养基中培养,经0.1 mmol/L IPTG低温诱导表达,可获得可溶性表达的LysoPLD蛋白,经纯化,酶纯度可大于80%。以对羟基棕榈酸酯为底物,对比两种方法得到的蛋白的酶学性质,发现二者催化反应的最适温度、最适pH、最适Ca2+浓度、比酶活基本一致。结论:两种基因共表达方式都可实现人源LysoPLD的在大肠杆菌中的可溶性表达,且酶学性质基本相同。 展开更多
关键词 人源溶血磷脂酶D 异源可溶性表达 麦芽糖结合蛋白融合标签 触发因子 酶学性质
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重组人汗腺抗菌素蛋白的异源可溶表达、发酵优化及分离纯化研究 被引量:1
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作者 马文君 郭校燕 +3 位作者 滕琳 王培培 卫宏远 郑春阳 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第9期114-121,共8页
目的:实现人汗腺抗菌素(Dermcidins,DCD-1L)的原核异源可溶表达,并进行纯化及活性分析。方法:首先检索NCBI确定人DCD-1L的序列,构建载体并转化E.coli ER2566,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后,进行SDS-PAGE电泳进行鉴定。其次,通... 目的:实现人汗腺抗菌素(Dermcidins,DCD-1L)的原核异源可溶表达,并进行纯化及活性分析。方法:首先检索NCBI确定人DCD-1L的序列,构建载体并转化E.coli ER2566,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后,进行SDS-PAGE电泳进行鉴定。其次,通过单因素实验,对不同温度、转速和补料速度等发酵条件进行研究与优化,根据DCD-1L蛋白特性优化蛋白纯化工艺。最后采用质谱和牛津杯法对纯化的蛋白进行分子量和抗菌活性鉴定。结果:经SDS-PAGE凝胶检测,在上清中分子量处检测到条带,证明采用原核表达系统可实现人DCD-1L的可溶表达;通过单因素实验获得最佳DCD-1L的发酵条件为:37℃培养,转速400 r/min,开启蠕动泵以50 mL/30 min补料速度自动加入发酵罐中;研究还建立了包括超滤、Q柱洗脱和分子筛在内的一整套优化的蛋白纯化工艺,获得的产品纯度大于96%,总回收率18.4%;最后,通过牛津杯法检测,纯化的重组人DCD-1L在浓度为50μg/mL时,对表皮葡萄球菌这类革兰氏阳性菌较大肠杆菌具有更明显的抑菌活性。结论:本研究对重组人DCD-1L蛋白实现了原核可溶表达,并建立了稳定可靠的发酵、纯化工艺,并进行了初步的抗菌活性鉴定,为后续重组人DCD-1L蛋白的应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人汗腺抗菌素 载体构建 异源可溶表达 发酵条件优化 蛋白纯化
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乙酰基四肽-11防脱发作用的研究 被引量:1
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作者 石莲莲 马文君 +2 位作者 孙亚萍 王培培 郑春阳 《日用化学工业(中英文)》 CAS 北大核心 2023年第11期1293-1298,共6页
将乙酰基四肽-11应用于小鼠进行脱发研究。通过对C57BL/6雌性小鼠背部进行脱毛处理,实验组连续涂抹3个质量浓度梯度(10,20和30μg/mL)的乙酰基四肽-11水溶液18天,对照组涂抹生理盐水,观察小鼠背部毛发生长情况,HE染色进行组织学分析,并... 将乙酰基四肽-11应用于小鼠进行脱发研究。通过对C57BL/6雌性小鼠背部进行脱毛处理,实验组连续涂抹3个质量浓度梯度(10,20和30μg/mL)的乙酰基四肽-11水溶液18天,对照组涂抹生理盐水,观察小鼠背部毛发生长情况,HE染色进行组织学分析,并初步进行了志愿者试用评估。结果表明,一定质量浓度的乙酰基四肽-11可以预防小鼠脱发,避免毛囊微型化,同时可以维持小鼠表皮紧致。志愿者试用评估表明测试样品对所有志愿者都有防脱发效果,85%志愿者反馈头发密度变大。 展开更多
关键词 乙酰基四肽-11 ⅩⅤⅡ型胶原 脱发 毛囊干细胞
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AIMP1衍生肽的护肤功效研究
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作者 杨秀芬 马文君 +2 位作者 李磊 王培培 郑春阳 《日用化学工业(中英文)》 CAS 北大核心 2023年第2期171-179,共9页
皮肤糖化反应是导致肤色暗黄、色斑、老化的一个重要因素,针对皮肤糖化问题,开发了一种生物活性多肽并进行护肤功效验证。AIMP1衍生肽(AdP)是由氨基酰tRNA合成酶相互作用多功能蛋白质1(AIMP1)衍生而来的寡肽,具有类AIMP1的多种生物活性... 皮肤糖化反应是导致肤色暗黄、色斑、老化的一个重要因素,针对皮肤糖化问题,开发了一种生物活性多肽并进行护肤功效验证。AIMP1衍生肽(AdP)是由氨基酰tRNA合成酶相互作用多功能蛋白质1(AIMP1)衍生而来的寡肽,具有类AIMP1的多种生物活性。采用牛血清白蛋白(BSA)糖化和羰基化体系研究AdP的抗糖化效果,并对含AdP的样品进行了临床功效测试。结果表明:AdP可减缓BSA与葡萄糖的糖基化反应,减少蛋白质羰基的生成,具有浓度依赖性;皮肤角质层含水量显著提高27.32%,TEWL降低12.77%,R2值提高10.34%,ITA°值提高14.25%,皱纹面积减少12.14%,AdP可有效抑制蛋白糖化,具有提升屏障功能、祛黄提亮抗皱的功效。 展开更多
关键词 AIMP1衍生肽 抗糖化 功效研究
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