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猫科动物六种呼吸道病原LAMP微流控检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 杨德全 卢先东 +11 位作者 李鑫 沈海潇 杨显超 葛菲菲 刘艳红 陶田谷晟 王建 王晓旭 夏炉明 龚国华 鞠厚斌 赵洪进 《中国动物传染病学报》 北大核心 2024年第6期105-113,共9页
为建立一种快速鉴别诊断猫科动物呼吸道病原的检测方法,分别针对猫疱疹病毒I型、猫杯状病毒、A型流感病毒、支气管败血波氏杆菌、衣原体和支原体6种病原基因的保守序列设计特异性LAMP引物,利用快速反应体系及微流控芯片仪,开展了特异性... 为建立一种快速鉴别诊断猫科动物呼吸道病原的检测方法,分别针对猫疱疹病毒I型、猫杯状病毒、A型流感病毒、支气管败血波氏杆菌、衣原体和支原体6种病原基因的保守序列设计特异性LAMP引物,利用快速反应体系及微流控芯片仪,开展了特异性、灵敏性和重复性试验,并进行临床应用检测。结果显示:LAMP微流控检测方法具有良好的特异性,各种病原之间无交叉反应;6种病原的最低检出限均为10 copies/μL;重复性好,批内和批间CV值均<3%;利用该方法和荧光RT-PCR对117份猫科动物呼吸道样品进行检测,发现两种方法一致性较好(Kappa值>0.75)。结果表明,本研究建立的LAMP微流控方法特异性好、灵敏度高和重复性佳,检测速度快,可用于猫科动物上呼吸道传染病的现场鉴别诊断。 展开更多
关键词 呼吸道病原 猫疱疹病毒I型 猫杯状病毒 A型流感病毒 支气管败血波氏杆菌 衣原体 支原体 微流控芯片
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虾类十足目虹彩病毒1(DIV1)LAMP-HNB快检方法的建立
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作者 王雯琼 葛明峰 +4 位作者 卢先东 刘艳红 斯烈钢 申屠基康 徐胜威 《安徽农业科学》 CAS 2024年第15期192-196,共5页
[目的]建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法,实现基层养殖户自检。[方法]针对十足目虹彩病毒1(DIV1),设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化,建立LAMP与羟基萘酚蓝(HNB)结合... [目的]建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法,实现基层养殖户自检。[方法]针对十足目虹彩病毒1(DIV1),设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化,建立LAMP与羟基萘酚蓝(HNB)结合的LAMP-HNB可视化快速检测方法。[结果]在LAMP反应体系中添加12 mmol/L Mg^(2+)和250μmol/L HNB,65℃恒温条件下反应60 min最佳;DIV1病原质粒最低检出限为102 copies/μL,稳定性和特异性较好,通过带有靶标基因的阳性质粒进行16次重复性试验结果均较为稳定,多种模板扩增试验均未发生假阳性情况,符合试验要求。[结论]该研究建立的LAMP-HNB可视化快速检测方法,适用于上述对虾DIV1的现场快速检测。 展开更多
关键词 南美白对虾 LAMP HNB 十足目虹彩病毒1 快速检测
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微流控芯片恒温扩增技术快速检测米饭中的蜡样芽孢杆菌 被引量:5
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作者 王珍 贺磊 +4 位作者 肖英平 卢先东 刘艳红 陆雯 王首锋 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期193-202,共10页
为建立米饭中的蜡样芽孢杆菌微流控芯片恒温扩增快速检测方法,利用蜡样芽孢杆菌公开的hblA基因序列设计引物,加入荧光染料SYTO-9,采用微流控芯片通过环介导恒温扩增进行实时荧光读数,并通过24株菌株验证其特异性;分别用阳性质粒和阳性... 为建立米饭中的蜡样芽孢杆菌微流控芯片恒温扩增快速检测方法,利用蜡样芽孢杆菌公开的hblA基因序列设计引物,加入荧光染料SYTO-9,采用微流控芯片通过环介导恒温扩增进行实时荧光读数,并通过24株菌株验证其特异性;分别用阳性质粒和阳性菌株测试其灵敏度、检出限和重复性。结果表明:2株蜡样芽孢杆菌呈阳性,22株非蜡样芽孢杆菌呈阴性;微流控芯片恒温扩增技术检测蜡样芽孢杆菌菌液的灵敏度为170 CFU/mL,检测时间在35 min内;使用合成的蜡样芽孢杆菌阳性质粒样品,其灵敏度为10μL-1,检测时间在15 min内,比传统分离鉴定方法的灵敏度高10倍;人工污染米饭中蜡样芽孢杆菌的检出限为570 CFU/g,并可在45 min内完成结果判定;蜡样芽孢杆菌阳性质粒检测重复性好,其变异系数(coefficient of variation, CV)为2.02%。综上所述,微流控芯片恒温扩增快速检测方法特异性好、灵敏度高、结果准确,可用于米饭类食品中蜡样芽孢杆菌的快速检测。 展开更多
关键词 微流控芯片 环介导恒温扩增 蜡样芽孢杆菌 米饭 检测
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微流控芯片技术检测虾四种病原微生物方法的建立 被引量:2
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作者 刘洋 陈本龙 +6 位作者 吴冬雪 黄晨 王乃福 李丹丹 王绥家 卢先东 刘艳红 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期23-28,37,共7页
针对虾的白斑综合征病毒、桃拉综合征病毒、黄头病毒和十足目虹彩病毒1的基因保守序列设计LAMP引物,将引物包被于芯片反应槽中,将微流控芯片技术与LAMP等温扩增技术相结合,建立针对这四种病毒的高效准确检测方法。用不同浓度的病毒阳性... 针对虾的白斑综合征病毒、桃拉综合征病毒、黄头病毒和十足目虹彩病毒1的基因保守序列设计LAMP引物,将引物包被于芯片反应槽中,将微流控芯片技术与LAMP等温扩增技术相结合,建立针对这四种病毒的高效准确检测方法。用不同浓度的病毒阳性模板检测了建立的检测方法对4种虾病毒与另1种常见虾病毒的特异性,并对20份阳性和30份阴性虾组织样本的特异性、敏感性和重复性进行了临床对比验证实验。结果表明:本研究方法灵敏度高,特异性强,重复性好,各病毒间无交叉反应,为同时快速检测虾的四种病毒提供了技术手段。 展开更多
关键词 白斑综合征病毒 桃拉综合症病毒 黄头病毒 十足目虹彩病毒1 微流控芯片
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微流控芯片技术检测虾肝肠胞虫及其在浙江省对虾流行病学调查中的应用
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作者 孙福英 白斐 +2 位作者 祝波 卢先东 钱冬 《南方农业》 2023年第6期200-205,共6页
南美白对虾是浙江省养殖的主要虾类,虾肝肠胞虫感染(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)是南美白对虾养殖中危害最大的疾病,引起严重的生长迟缓,造成极大的损失。虾肝肠胞虫个体微小,给显微镜检测造成较大的困难,因此尝试建立快速、灵敏... 南美白对虾是浙江省养殖的主要虾类,虾肝肠胞虫感染(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)是南美白对虾养殖中危害最大的疾病,引起严重的生长迟缓,造成极大的损失。虾肝肠胞虫个体微小,给显微镜检测造成较大的困难,因此尝试建立快速、灵敏的定量检测微流控芯片检测技术。结果表明,所建立的微流控芯片检测方法特异性良好,重复性良好,扩增结果稳定可靠,最低检出限为3.23×100 copies·μL^(-1)。将该检测技术应用于浙江省对虾流行病学特点分析中,发现三门县和舟山市对虾肠胞虫感染率比较高,除嘉兴市未出现对虾通用型传染皮下及造血组织坏死病毒感染,其他地方均有感染。试验证明,微流控芯片快速检测技术有望应用于对虾规模化养殖中虾肝肠胞虫感染的快速检测。 展开更多
关键词 微流控芯片技术 虾肝肠胞虫 流行病学 浙江省
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