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核糖体蛋白S9在多发性骨髓瘤中的表达及对其细胞生物学功能的影响
被引量：
2
1
作者
宋鹍鹏
舒鹏
+2 位作者
马炬雷
王兵
陈博
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期175-182,共8页
目的明确核糖体蛋白S9(RPS9)在多发性骨髓瘤中的表达情况,并明确其对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及相应机制。方法 选取10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON组)与30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞(CD138+组),实时荧光定量PCR检测RPS9在...
目的明确核糖体蛋白S9(RPS9)在多发性骨髓瘤中的表达情况,并明确其对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及相应机制。方法 选取10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON组)与30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞(CD138+组),实时荧光定量PCR检测RPS9在mRNA水平的表达,并选取3例CON与11例CD138+细胞,Westernblot检测RPS9在蛋白水平的变化,同时选取GSE19784数据集,检测RPS9的表达与患者总体生存率、核因子-κB(NF-κB)、类泛素蛋白修饰分子(SUMO)、泛素通路之间的关系。随后构建RPS9-短发夹RNA(shRNA)敲低载体,使用流式细胞仪检测感染效率、实时荧光定量PCR与Westernblot检测敲低效率后。RPMI8226分为CON与RPS9-shRNA组,使用膜联蛋白V别藻青蛋白/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡的变化、CCK8法检测细胞增殖的变化、PI染色法检测细胞周期的变化。并构建类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1(SENP1)过表达载体,Westernblot确定过表达效率后,检测RPS9抑制后SENP1表达的变化,并在RPS9-shRNA中转染SENP1过表达载体,Westernblot检测CON、RPS9-shRNA、RPS9-shRNA-SENP1细胞中NF-κB通路P65、抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的变化,膜联蛋白V/PI双染法检测细胞凋亡的变化。结果 RPS9在10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON)以及30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞中相对表达量分别为1.00±0.12和5.45±0.71(t=4.291,P=0.0036),Westernblot中大多数骨髓瘤CD138+细胞中RPS9呈现高表达,RPS9的高表达同时与患者髓外浸润相关,并在GSE19784数据集中与患者总体生存率相关。RPMI8226在感染CON与RPS9-shRNA慢病毒48h后,流式细胞仪证实两组细胞感染效率均在90%以上,实时荧光定量PCR与Westernblot证实RPS9在mRNA与蛋白水平的表达均受到抑制。RPMI8226CON与RPS9-shRNA感染病毒48h后,CON与RPS9-shRNA组细胞膜联蛋白V阳性细胞比例分别为3.47±0.37和18.60±1.64,RPS9-shRNA组显著高于CON组(t=9.015,P=0.0008)。在增殖中,CON组与RPS9-shRNA组在72h时增殖指数差异有统计学意义(t=6.846,P=0.0024)。而在细胞周期中,CON与RPS9-shRNA组在感染病毒48h时,G2期细胞比例分别为(29.28±3.42)%和(10.43±1.43)%,CON组显著高于RPS9-shRNA组,差异有统计学意义(t=9.329,P=0.0007)。RPS9的表达在GSE19784数据集中与SENP1正相关,并与IκBα编码基因NFKBIA呈负相关,Westernblot进一步证实RPS9的敲低能够抑制SENP1的表达,并抑制NF-κB亚基P65、抑制因子IKBα的磷酸化,促进IKBα的表达,而SENP1的过表达不仅能够阻碍这一效应,也能够使RPS9诱导的凋亡减少。结论 RPS9在多发性骨髓瘤CD138+细胞中高表达,且与患者总体生存率、髓外浸润相关。RPS9的抑制能够促进骨髓瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制增殖。RPS9能够通过SENP1影响NF-κB通路的活化,并影响细胞的凋亡,提示SENP1可能为RPS9生物学效应的关键因素。
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关键词
核糖体蛋白S9
多发性骨髓瘤
核因子-ΚB信号通路
类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1
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职称材料
泛素E3连接酶对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成能力的影响
被引量：
1
2
作者
纪超
马炬雷
舒鹏
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期194-202,共9页
目的明确泛素E3连接酶(DTL)对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成的影响,并探讨其机制。方法提取34例多发性骨髓瘤患者骨髓中CD138+细胞后,以14例健康志愿者骨髓单个核细胞为对照,实时定量PCR检测DTL在mRNA水平的变化,并选取12例骨髓瘤患者...
目的明确泛素E3连接酶(DTL)对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成的影响,并探讨其机制。方法提取34例多发性骨髓瘤患者骨髓中CD138+细胞后,以14例健康志愿者骨髓单个核细胞为对照,实时定量PCR检测DTL在mRNA水平的变化,并选取12例骨髓瘤患者和2例对照,Westernblot检测DTL在蛋白水平的变化。同时,人骨髓瘤细胞系RPMI8226分为对照(CON)与DTL敲低(DTL-shRNA)组,感染10感染复数CON与DTL-shRNA病毒48h,使用流式细胞仪确认慢病毒的感染效率、实时定量基因扩增荧光检测系统和Westernblot确认在mRNA和蛋白水平的敲低效率,使用细胞增殖及毒性检测试剂盒检测细胞在随后的0、24、48、72、96h的细胞数量变化,将CON与DTL-shRNA细胞培养于半固体培养基中,10d后倒置相差显微镜观察大于50个细胞的克隆数量,并使用膜联蛋白V/碘化丙啶双染法检测凋亡的变化,碘化丙啶染色检测细胞周期的变化。使用Westernblot检测核因子-κB(NF-κB)通路中P65和抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的改变、凝胶迁移实验检测NF-κB转录活性的变化。结果健康志愿者骨髓单个核细胞与骨髓瘤患者CD138+细胞中,DTL的表达量分别为1.00±0.12和9.36±3.71(t=3.65,P=0.0024),DTL在骨髓瘤CD138+细胞中蛋白水平同样呈现过表达。RPMI8226感染CON与DTL-shRNA病毒48h后,绿色荧光蛋白阳性细胞的比率为90%,CON组与DTL-[JP2]shRNA组DTL在mRNA水平相对表达量分别为1.00±0.01和0.21±0.04(t=33.19,P<0.0001),在蛋白水平DTL的相对表达量分别为0.52±0.13和0.11±0.02(t=5.399,P=0.0057)。CCK8检测CON组与DTL-shRNA组细胞增殖后显示0、24、48、72、96h的细胞增殖倍数分别为1.00±0.03比1.00±0.02、2.19±0.28比1.47±0.13、3.50±0.14比2.24±0.19、5.43±0.41比3.08±0.14、7.42±0.17比4.29±013(F=24.58,P=0.001)。检测CON组与DTL-shRNA组的克隆形成后显示,DTL-shRNA组大于50个细胞的克隆不可见,CON与DTL-shRNA克隆形成数量分别为76±4比0(P<0.01),在细胞周期中,CON与DTL-shRNA组G1期细胞比例分别为(28.61±8.64)%比(57.25±10.37)%(t=3.675,P=0.0213),细胞凋亡中,CON与DTL-shRNA组膜联蛋白V+细胞比例为(3.21±0.89)%比(34.71±18.68)%(t=2.895,P=0.0443)。RPMI8226感染CON与DTL-shRNA慢病毒48h后,CON与DTL-shRNA磷酸化P65相对表达量分别为1.52±0.14和0.82±0.11(t=6.81,P=0.0024),而P65的表达分别为0.25±0.04和0.24±0.08(t=0.19,P=0.85),差异无统计学意义,CON与DTL-shRNA磷酸化IκBα的相对表达量分别为0.19±0.03和0.13±0.02(t=2.882,P=0.0449),而IκBα相对表达量分别为0.22±0.05和1.01±0.06(t=17.52,P<0.0001)。凝胶迁移实验检测DTL-shRNANF-κB转录活性进一步确定了DTL的下调抑制了NF-κB转录活性。结论DTL在多发性骨髓瘤细胞中高表达,且DTL的下调抑制了细胞增殖,阻断了克隆形成,促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,而DTL对骨髓瘤细胞生物学功能的影响与NF-κB通路的改变相关。
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关键词
E3泛素连接酶
多发性骨髓瘤
增殖
克隆形成
核因子-ΚB
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职称材料
题名
核糖体蛋白S9在多发性骨髓瘤中的表达及对其细胞生物学功能的影响
被引量：
2
1
作者
宋鹍鹏
舒鹏
马炬雷
王兵
陈博
机构
宁波市北仑区人民医院浙江大学附属第一医院北仑分院手足外科
宁波市
北仑区
人民医院
浙江大学附属第一医院
北
仑
分院
分子实验室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期175-182,共8页
基金
宁波市社发重大专项项目(2017C510009)~~
文摘
目的明确核糖体蛋白S9(RPS9)在多发性骨髓瘤中的表达情况,并明确其对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及相应机制。方法 选取10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON组)与30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞(CD138+组),实时荧光定量PCR检测RPS9在mRNA水平的表达,并选取3例CON与11例CD138+细胞,Westernblot检测RPS9在蛋白水平的变化,同时选取GSE19784数据集,检测RPS9的表达与患者总体生存率、核因子-κB(NF-κB)、类泛素蛋白修饰分子(SUMO)、泛素通路之间的关系。随后构建RPS9-短发夹RNA(shRNA)敲低载体,使用流式细胞仪检测感染效率、实时荧光定量PCR与Westernblot检测敲低效率后。RPMI8226分为CON与RPS9-shRNA组,使用膜联蛋白V别藻青蛋白/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡的变化、CCK8法检测细胞增殖的变化、PI染色法检测细胞周期的变化。并构建类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1(SENP1)过表达载体,Westernblot确定过表达效率后,检测RPS9抑制后SENP1表达的变化,并在RPS9-shRNA中转染SENP1过表达载体,Westernblot检测CON、RPS9-shRNA、RPS9-shRNA-SENP1细胞中NF-κB通路P65、抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的变化,膜联蛋白V/PI双染法检测细胞凋亡的变化。结果 RPS9在10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON)以及30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞中相对表达量分别为1.00±0.12和5.45±0.71(t=4.291,P=0.0036),Westernblot中大多数骨髓瘤CD138+细胞中RPS9呈现高表达,RPS9的高表达同时与患者髓外浸润相关,并在GSE19784数据集中与患者总体生存率相关。RPMI8226在感染CON与RPS9-shRNA慢病毒48h后,流式细胞仪证实两组细胞感染效率均在90%以上,实时荧光定量PCR与Westernblot证实RPS9在mRNA与蛋白水平的表达均受到抑制。RPMI8226CON与RPS9-shRNA感染病毒48h后,CON与RPS9-shRNA组细胞膜联蛋白V阳性细胞比例分别为3.47±0.37和18.60±1.64,RPS9-shRNA组显著高于CON组(t=9.015,P=0.0008)。在增殖中,CON组与RPS9-shRNA组在72h时增殖指数差异有统计学意义(t=6.846,P=0.0024)。而在细胞周期中,CON与RPS9-shRNA组在感染病毒48h时,G2期细胞比例分别为(29.28±3.42)%和(10.43±1.43)%,CON组显著高于RPS9-shRNA组,差异有统计学意义(t=9.329,P=0.0007)。RPS9的表达在GSE19784数据集中与SENP1正相关,并与IκBα编码基因NFKBIA呈负相关,Westernblot进一步证实RPS9的敲低能够抑制SENP1的表达,并抑制NF-κB亚基P65、抑制因子IKBα的磷酸化,促进IKBα的表达,而SENP1的过表达不仅能够阻碍这一效应,也能够使RPS9诱导的凋亡减少。结论 RPS9在多发性骨髓瘤CD138+细胞中高表达,且与患者总体生存率、髓外浸润相关。RPS9的抑制能够促进骨髓瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制增殖。RPS9能够通过SENP1影响NF-κB通路的活化,并影响细胞的凋亡,提示SENP1可能为RPS9生物学效应的关键因素。
关键词
核糖体蛋白S9
多发性骨髓瘤
核因子-ΚB信号通路
类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1
Keywords
ribosomal protein S9
multiple myeloma
nuclear factor-κB pathway
sentrin-specific protease 1
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
泛素E3连接酶对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成能力的影响
被引量：
1
2
作者
纪超
马炬雷
舒鹏
机构
宁波市
北仑区
人民医院
浙江大学附属第一医院
北
仑
分院
检验科
宁波市北仑区人民医院浙江大学附属第一医院北仑分院手足外科
宁波市
北仑区
人民医院
浙江大学附属第一医院
北
仑
分院
分子实验室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期194-202,共9页
基金
宁波市社发重大专项项目(2017C510009)~~
文摘
目的明确泛素E3连接酶(DTL)对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成的影响,并探讨其机制。方法提取34例多发性骨髓瘤患者骨髓中CD138+细胞后,以14例健康志愿者骨髓单个核细胞为对照,实时定量PCR检测DTL在mRNA水平的变化,并选取12例骨髓瘤患者和2例对照,Westernblot检测DTL在蛋白水平的变化。同时,人骨髓瘤细胞系RPMI8226分为对照(CON)与DTL敲低(DTL-shRNA)组,感染10感染复数CON与DTL-shRNA病毒48h,使用流式细胞仪确认慢病毒的感染效率、实时定量基因扩增荧光检测系统和Westernblot确认在mRNA和蛋白水平的敲低效率,使用细胞增殖及毒性检测试剂盒检测细胞在随后的0、24、48、72、96h的细胞数量变化,将CON与DTL-shRNA细胞培养于半固体培养基中,10d后倒置相差显微镜观察大于50个细胞的克隆数量,并使用膜联蛋白V/碘化丙啶双染法检测凋亡的变化,碘化丙啶染色检测细胞周期的变化。使用Westernblot检测核因子-κB(NF-κB)通路中P65和抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的改变、凝胶迁移实验检测NF-κB转录活性的变化。结果健康志愿者骨髓单个核细胞与骨髓瘤患者CD138+细胞中,DTL的表达量分别为1.00±0.12和9.36±3.71(t=3.65,P=0.0024),DTL在骨髓瘤CD138+细胞中蛋白水平同样呈现过表达。RPMI8226感染CON与DTL-shRNA病毒48h后,绿色荧光蛋白阳性细胞的比率为90%,CON组与DTL-[JP2]shRNA组DTL在mRNA水平相对表达量分别为1.00±0.01和0.21±0.04(t=33.19,P<0.0001),在蛋白水平DTL的相对表达量分别为0.52±0.13和0.11±0.02(t=5.399,P=0.0057)。CCK8检测CON组与DTL-shRNA组细胞增殖后显示0、24、48、72、96h的细胞增殖倍数分别为1.00±0.03比1.00±0.02、2.19±0.28比1.47±0.13、3.50±0.14比2.24±0.19、5.43±0.41比3.08±0.14、7.42±0.17比4.29±013(F=24.58,P=0.001)。检测CON组与DTL-shRNA组的克隆形成后显示,DTL-shRNA组大于50个细胞的克隆不可见,CON与DTL-shRNA克隆形成数量分别为76±4比0(P<0.01),在细胞周期中,CON与DTL-shRNA组G1期细胞比例分别为(28.61±8.64)%比(57.25±10.37)%(t=3.675,P=0.0213),细胞凋亡中,CON与DTL-shRNA组膜联蛋白V+细胞比例为(3.21±0.89)%比(34.71±18.68)%(t=2.895,P=0.0443)。RPMI8226感染CON与DTL-shRNA慢病毒48h后,CON与DTL-shRNA磷酸化P65相对表达量分别为1.52±0.14和0.82±0.11(t=6.81,P=0.0024),而P65的表达分别为0.25±0.04和0.24±0.08(t=0.19,P=0.85),差异无统计学意义,CON与DTL-shRNA磷酸化IκBα的相对表达量分别为0.19±0.03和0.13±0.02(t=2.882,P=0.0449),而IκBα相对表达量分别为0.22±0.05和1.01±0.06(t=17.52,P<0.0001)。凝胶迁移实验检测DTL-shRNANF-κB转录活性进一步确定了DTL的下调抑制了NF-κB转录活性。结论DTL在多发性骨髓瘤细胞中高表达,且DTL的下调抑制了细胞增殖,阻断了克隆形成,促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,而DTL对骨髓瘤细胞生物学功能的影响与NF-κB通路的改变相关。
关键词
E3泛素连接酶
多发性骨髓瘤
增殖
克隆形成
核因子-ΚB
Keywords
denticleless E3 ubiquitin protein ligase
multiple myeloma
proliferation
colony formation
nuclear factor-κB
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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核糖体蛋白S9在多发性骨髓瘤中的表达及对其细胞生物学功能的影响
宋鹍鹏
舒鹏
马炬雷
王兵
陈博
《中国医学科学院学报》
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2019
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泛素E3连接酶对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成能力的影响
纪超
马炬雷
舒鹏
《中国医学科学院学报》
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CSCD
北大核心
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