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敲低组织蛋白酶L可挽救D-半乳糖诱导的小鼠卵巢颗粒细胞GRM02衰老的实验研究
1
作者
徐蕊
袁士迪
+4 位作者
张克梅
董洁
马汝钧
陈莉
姚兵
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2025年第9期918-924,共7页
目的探究组织蛋白酶L(CTSL)的敲低对D-半乳糖(D-gal)诱导的小鼠卵巢颗粒细胞系GRM02衰老的影响。方法通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)实验确定培养小鼠卵巢颗粒细胞系GRM02培养基中D-gal的适宜添加浓度。通过细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-g...
目的探究组织蛋白酶L(CTSL)的敲低对D-半乳糖(D-gal)诱导的小鼠卵巢颗粒细胞系GRM02衰老的影响。方法通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)实验确定培养小鼠卵巢颗粒细胞系GRM02培养基中D-gal的适宜添加浓度。通过细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色和炎症衰老相关分泌因子Ccl2、Mmp13、Tgfb的m RNA水平检测,明确D-gal的添加对小鼠卵巢颗粒细胞系GRM02衰老诱导作用。将GRM02分为模型组(D-gal组)、模型敲低对照组(D-gal-siNC组)和模型CTSL敲低组(D-gal-siCTSL组)。SA-β-gal染色确定各组衰老细胞比例。定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞的炎症衰老相关分泌因子Ccl2、Mmp13、Tgfb的m RNA水平。Western blot检测自噬相关LAMP1、P62蛋白的表达。结果CCK8结果显示在培养基中添加D-gal至终浓度10 mg/mL,孵育24 h后,GRM02细胞活力降低(P<0.01),SA-β-gal染色阳性细胞增多(P<0.01),炎症因子Ccl2(P<0.05)、Mmp13(P<0.01)、Tgfb(P<0.01)mRNA水平增加。与D-gal组和D-gal-siNC组相比,Dgal-siCTSL组SA-β-gal染色阳性细胞减少(P<0.01),相关炎症因子Ccl2、Mmp13、Tgfb的m RNA水平降低(均P<0.01),该组细胞衰老状况得到挽救。与D-gal组和D-gal-siNC组相比,P62蛋白表达减少(P<0.01),提示CTSL能够调节D-gal诱导GRM02细胞的P62蛋白表达水平。结论敲低CTSL可降低D-gal诱导的小鼠卵巢颗粒细胞GRM02的自噬活性标志物P62蛋白表达水平,挽救细胞衰老。
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关键词
D-半乳糖
组织蛋白酶L
GRM02
自噬
P62
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题名
敲低组织蛋白酶L可挽救D-半乳糖诱导的小鼠卵巢颗粒细胞GRM02衰老的实验研究
1
作者
徐蕊
袁士迪
张克梅
董洁
马汝钧
陈莉
姚兵
机构
南京
大学
医学院
附属
金陵
医院
(东部战区总
医院
)
生殖
医学科
南京医科
大学
医政学院
宁波大学附属第一医院生殖中心
出处
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2025年第9期918-924,共7页
基金
东部战区总医院院内课题(22JCYYZD7)。
文摘
目的探究组织蛋白酶L(CTSL)的敲低对D-半乳糖(D-gal)诱导的小鼠卵巢颗粒细胞系GRM02衰老的影响。方法通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)实验确定培养小鼠卵巢颗粒细胞系GRM02培养基中D-gal的适宜添加浓度。通过细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色和炎症衰老相关分泌因子Ccl2、Mmp13、Tgfb的m RNA水平检测,明确D-gal的添加对小鼠卵巢颗粒细胞系GRM02衰老诱导作用。将GRM02分为模型组(D-gal组)、模型敲低对照组(D-gal-siNC组)和模型CTSL敲低组(D-gal-siCTSL组)。SA-β-gal染色确定各组衰老细胞比例。定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞的炎症衰老相关分泌因子Ccl2、Mmp13、Tgfb的m RNA水平。Western blot检测自噬相关LAMP1、P62蛋白的表达。结果CCK8结果显示在培养基中添加D-gal至终浓度10 mg/mL,孵育24 h后,GRM02细胞活力降低(P<0.01),SA-β-gal染色阳性细胞增多(P<0.01),炎症因子Ccl2(P<0.05)、Mmp13(P<0.01)、Tgfb(P<0.01)mRNA水平增加。与D-gal组和D-gal-siNC组相比,Dgal-siCTSL组SA-β-gal染色阳性细胞减少(P<0.01),相关炎症因子Ccl2、Mmp13、Tgfb的m RNA水平降低(均P<0.01),该组细胞衰老状况得到挽救。与D-gal组和D-gal-siNC组相比,P62蛋白表达减少(P<0.01),提示CTSL能够调节D-gal诱导GRM02细胞的P62蛋白表达水平。结论敲低CTSL可降低D-gal诱导的小鼠卵巢颗粒细胞GRM02的自噬活性标志物P62蛋白表达水平,挽救细胞衰老。
关键词
D-半乳糖
组织蛋白酶L
GRM02
自噬
P62
Keywords
D-galactose
Cathepsin L
GRM02
autophagy
P62
分类号
R711.75 [医药卫生—妇产科学]
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1
敲低组织蛋白酶L可挽救D-半乳糖诱导的小鼠卵巢颗粒细胞GRM02衰老的实验研究
徐蕊
袁士迪
张克梅
董洁
马汝钧
陈莉
姚兵
《医学研究与战创伤救治》
北大核心
2025
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