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褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)IgM的分子特征与表达分析
1
作者
何亮银
曾智军
+6 位作者
陈伟鑫
陈楠洁
周薇
温靖宇
黄淑怡
孙赵韩
李进寿
《海洋与湖沼》
北大核心
2025年第3期724-735,共12页
IgM是硬骨鱼类最主要的免疫球蛋白,在鱼体抵抗病原感染中发挥重要作用。为认识褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)IgM的分子组成与序列特征,并探究其免疫应答规律,本研究纯化了褐菖鲉血清IgM蛋白并制备了其鼠源多克隆抗体;克隆了褐菖鲉IgM...
IgM是硬骨鱼类最主要的免疫球蛋白,在鱼体抵抗病原感染中发挥重要作用。为认识褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)IgM的分子组成与序列特征,并探究其免疫应答规律,本研究纯化了褐菖鲉血清IgM蛋白并制备了其鼠源多克隆抗体;克隆了褐菖鲉IgM重链(SmIgMH)基因并对其序列和进化特性进行了分析;检测了SmIgMH基因mRNA在雌性和雄性鱼体各组织中的分布情况,以及LPS或Poly I:C刺激后基因的表达变化;对SmIgMH的恒定区进行了原核表达,并检测了重组蛋白与血清IgM鼠源抗血清的结合。结果显示:利用饱和硫酸铵盐析结合Protein A亲和层析法纯化获得了高纯度的IgM蛋白,其由重轻链组成,分子量分别为74 kDa和27 kDa。血清IgM免疫小鼠制备的多抗效价达1∶500000,且能特异性识别IgM的重轻链条带。克隆的SmIgMH基因cDNA全长1982 bp,包含一个1746 bp的ORF,编码581个氨基酸,对应蛋白质的相对分子质量为65.1 kDa,包含信号肽、1个可变区和4个恒定区结构域。SmIgMH与斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的IgMH亲缘关系最近,序列相似度达63.5%。SmIgMH基因mRNA在脾脏、头肾和肾脏组织中表达量最高,且雌性和雄性鱼体中没有显著差异。LPS或Poly I:C刺激后,脾脏和头肾组织中SmIgMH基因均呈先升高后下降趋势,表明其能有效应答病原感染。原核表达获得的SmIgMH恒定区重组蛋白大小约66.8 kDa,且能被血清IgM鼠源抗血清特异性识别。研究结果有助于加深对褐菖鲉免疫系统的认识,并为后续免疫检测提供工具,也为深入研究IgM参与褐菖鲉抗病原感染机制奠定基础。
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关键词
褐菖鲉
IGM
分子特征
组织分布
表达分析
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职称材料
大黄鱼(Larimichthys crocea)dazl基因的分子鉴定和组织表达
2
作者
李菲艳
曾思源
+2 位作者
韩坤煌
孙赵韩
周莉
《海洋与湖沼》
2025年第4期968-975,共8页
dazl是重要的母源生殖基因,在鱼类生殖细胞发育和配子产生中具有重要意义。以大黄鱼(Larimichthys crocea)为研究对象,通过同源比对,从大黄鱼基因组中获得dazl基因序列,进行多重比较和进化分析,并借助分子手段半定量RT-PCR检测其在各组...
dazl是重要的母源生殖基因,在鱼类生殖细胞发育和配子产生中具有重要意义。以大黄鱼(Larimichthys crocea)为研究对象,通过同源比对,从大黄鱼基因组中获得dazl基因序列,进行多重比较和进化分析,并借助分子手段半定量RT-PCR检测其在各组织的表达情况,进一步通过原位杂交分析其在性腺生殖细胞的分布。多重比较表明其含有保守的DAZ及DAZL结构域,且进化树显示其与鲈形目鱼类形成一个大支,证实其为大黄鱼dazl基因。半定量RT-PCR进一步分析显示dazl特异性表达于性腺,且精巢表达量高于卵巢。随后,利用原位杂交技术对dazl的时空表达进行定位,发现其在早期生殖细胞表达量较高,随着细胞的发育,表达逐渐减弱,甚至检测不到。dazl在卵巢中主要在卵原和早期卵母细胞中表达,而在精巢中则主要在精原和初级精母细胞中表达,暗示着dazl在雌雄大黄鱼性腺发育过程中发挥重要的作用。研究结果可为探究dazl基因对大黄鱼生殖发育调控机制及两性配子发生奠定基础。
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关键词
大黄鱼
dazl基因
半定量RT-PCR
原位杂交
发育
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职称材料
题名
褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)IgM的分子特征与表达分析
1
作者
何亮银
曾智军
陈伟鑫
陈楠洁
周薇
温靖宇
黄淑怡
孙赵韩
李进寿
机构
宁德
师范学院
海洋
学院
闽东水产品精深加工福建省高等学校工程研究中心
宁德市以也海洋产业发展有限公司
出处
《海洋与湖沼》
北大核心
2025年第3期724-735,共12页
基金
国家级大学生创新创业训练计划项目,202410398003号
宁德师范学院科研项目,2024ZX51号。
文摘
IgM是硬骨鱼类最主要的免疫球蛋白,在鱼体抵抗病原感染中发挥重要作用。为认识褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)IgM的分子组成与序列特征,并探究其免疫应答规律,本研究纯化了褐菖鲉血清IgM蛋白并制备了其鼠源多克隆抗体;克隆了褐菖鲉IgM重链(SmIgMH)基因并对其序列和进化特性进行了分析;检测了SmIgMH基因mRNA在雌性和雄性鱼体各组织中的分布情况,以及LPS或Poly I:C刺激后基因的表达变化;对SmIgMH的恒定区进行了原核表达,并检测了重组蛋白与血清IgM鼠源抗血清的结合。结果显示:利用饱和硫酸铵盐析结合Protein A亲和层析法纯化获得了高纯度的IgM蛋白,其由重轻链组成,分子量分别为74 kDa和27 kDa。血清IgM免疫小鼠制备的多抗效价达1∶500000,且能特异性识别IgM的重轻链条带。克隆的SmIgMH基因cDNA全长1982 bp,包含一个1746 bp的ORF,编码581个氨基酸,对应蛋白质的相对分子质量为65.1 kDa,包含信号肽、1个可变区和4个恒定区结构域。SmIgMH与斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的IgMH亲缘关系最近,序列相似度达63.5%。SmIgMH基因mRNA在脾脏、头肾和肾脏组织中表达量最高,且雌性和雄性鱼体中没有显著差异。LPS或Poly I:C刺激后,脾脏和头肾组织中SmIgMH基因均呈先升高后下降趋势,表明其能有效应答病原感染。原核表达获得的SmIgMH恒定区重组蛋白大小约66.8 kDa,且能被血清IgM鼠源抗血清特异性识别。研究结果有助于加深对褐菖鲉免疫系统的认识,并为后续免疫检测提供工具,也为深入研究IgM参与褐菖鲉抗病原感染机制奠定基础。
关键词
褐菖鲉
IGM
分子特征
组织分布
表达分析
Keywords
Sebastiscus marmoratus
IgM
molecular characterization
tissue distribution
expression analysis
分类号
S917.4 [农业科学—水产科学]
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题名
大黄鱼(Larimichthys crocea)dazl基因的分子鉴定和组织表达
2
作者
李菲艳
曾思源
韩坤煌
孙赵韩
周莉
机构
宁德
师范学院
海洋
学院
出处
《海洋与湖沼》
2025年第4期968-975,共8页
基金
宁德师范学院重大科研项目培育计划,2022ZDK02号
宁德师范学院引进人才科研启动项目基金,2022Y06号,2020T03号
福建省自然科学基金项目,2022J05270号,2020J02011号。
文摘
dazl是重要的母源生殖基因,在鱼类生殖细胞发育和配子产生中具有重要意义。以大黄鱼(Larimichthys crocea)为研究对象,通过同源比对,从大黄鱼基因组中获得dazl基因序列,进行多重比较和进化分析,并借助分子手段半定量RT-PCR检测其在各组织的表达情况,进一步通过原位杂交分析其在性腺生殖细胞的分布。多重比较表明其含有保守的DAZ及DAZL结构域,且进化树显示其与鲈形目鱼类形成一个大支,证实其为大黄鱼dazl基因。半定量RT-PCR进一步分析显示dazl特异性表达于性腺,且精巢表达量高于卵巢。随后,利用原位杂交技术对dazl的时空表达进行定位,发现其在早期生殖细胞表达量较高,随着细胞的发育,表达逐渐减弱,甚至检测不到。dazl在卵巢中主要在卵原和早期卵母细胞中表达,而在精巢中则主要在精原和初级精母细胞中表达,暗示着dazl在雌雄大黄鱼性腺发育过程中发挥重要的作用。研究结果可为探究dazl基因对大黄鱼生殖发育调控机制及两性配子发生奠定基础。
关键词
大黄鱼
dazl基因
半定量RT-PCR
原位杂交
发育
Keywords
large yellow croaker(Larimichthys crocea)
dazl
semi-quantitative RT-PCR
in situ hybridization
development
分类号
S917.4 [农业科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)IgM的分子特征与表达分析
何亮银
曾智军
陈伟鑫
陈楠洁
周薇
温靖宇
黄淑怡
孙赵韩
李进寿
《海洋与湖沼》
北大核心
2025
0
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下载PDF
职称材料
2
大黄鱼(Larimichthys crocea)dazl基因的分子鉴定和组织表达
李菲艳
曾思源
韩坤煌
孙赵韩
周莉
《海洋与湖沼》
2025
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