PSMD10在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制研究 被引量：3

1

作者 吴欣妍 焦运 +6 位作者 王青青 徐龙 张辉 郭伟 杨安宁 郝银菊 姜怡邓 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期535-541,共7页

目的探讨26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基10(PSMD10)在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制。方法选取cbs^(+/+)和cbs^(+/-)小鼠各8只,2%高蛋氨酸饮食饲养8周。全自动生化仪检测血清中AST和ALT水平;Western blot检测肝脏LC3... 目的探讨26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基10(PSMD10)在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制。方法选取cbs^(+/+)和cbs^(+/-)小鼠各8只,2%高蛋氨酸饮食饲养8周。全自动生化仪检测血清中AST和ALT水平;Western blot检测肝脏LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA表达;100μmol Hcy干预肝细胞(HL-7702);ELISA检测培养液上清中AST和ALT水平;Western blot检测LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA的表达;转染PSMD10 siRNA或过表达腺病毒,Western blot检测LC3B和p62的表达;ELISA检测AST和ALT水平。结果与cbs^(+/+)组比较,cbs^(+/-)组血清AST和ALT的水平增加(P<0.01),自噬水平增加(P<0.01),PSMD10表达水平增加(P<0.05);细胞水平与动物水平结果一致;与Hcy+siNC组相比,LC3Ⅱ/Ⅰ的比值降低(P<0.01),p62的蛋白表达增加(P<0.01),AST和ALT的浓度降低(P<0.01);与ad-GFP组相比,ad-PSMD10组LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P<0.01),p62的蛋白表达降低(P<0.01),AST和ALT的浓度增加(P<0.01)。结论Hcy通过上调PSMD10的表达导致肝细胞过度自噬,造成肝脏损伤。 展开更多

关键词 PSMD10 同型半胱氨酸 肝细胞 自噬 肝损伤 AST ALT

在线阅读 下载PDF 职称材料

FoxO1/p38 MAPK信号通路在LPS致急性肺损伤中的作用研究 被引量：5

2

作者 杨亚丽 田荣 +2 位作者 袁茵 王艳佳 杨晓玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期36-42,共7页

目的探讨叉头状转录因子O1(forkhead transcription factors of O class1,FoxO1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中的作用及其调控机制。方法采用LPS模拟诱导ALI模型。HE染色法观察肺组织的病理变... 目的探讨叉头状转录因子O1(forkhead transcription factors of O class1,FoxO1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中的作用及其调控机制。方法采用LPS模拟诱导ALI模型。HE染色法观察肺组织的病理变化;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;免疫组化染色观察FoxO1在小鼠肺组织的表达;Western blot检测FoxO1、DNA甲基转移酶和p38 MAPK的磷酸化水平;qRT-PCR检测FoxO1、IL-6、TNF-α和DNA甲基转移酶的mRNA水平;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测肺组织中FoxO1启动子区DNA甲基化的水平变化;培养肺血管内皮细胞(pulmonary vascular endothelial cells,PVECs)并转染FoxO1 siRNA,Western blot检测p38 MAPK的磷酸化水平;采用Pearson方法分析FoxO1甲基化水平与炎症因子的相关性。结果与Control组相比,LPS组小鼠肺泡炎性细胞明显增多,肺组织水肿、充血明显;TNF-α和IL-6的水平分别升高52.2%和150.4%(P<0.05);p38 MAPK磷酸化水平及FoxO1表达分别增加134.1%和61.8%(P<0.05),而FoxO1启动子区DNA甲基化水平降低17.2%(P<0.05),体外转染FoxO1 siRNA后,p38磷酸化水平降低,Pearson分析显示,FoxO1甲基化水平与炎症因子成负相关。结论FoxO1启动子区低甲基化调控FoxO1/p38 MAPK信号通路是LPS诱导急性肺损伤的重要机制。 展开更多

关键词 FOXO1 LPS 急性肺损伤 DNA甲基化 p38 MAPK信号通路 肺血管内皮细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)下调MMP2表达抑制人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移 被引量：1

3

作者 吴凯 刘圆 +3 位作者 张辉 王艳华 张慧萍 姜怡邓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期736-742,共7页

目的探讨DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)通过调控迁移相关因子基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达对人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移的影响。方法收集子痫前期(PE)患者和正常孕妇的胎盘组织(对照组)各20例,Masson染色观察胎盘组织结构改变,... 目的探讨DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)通过调控迁移相关因子基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达对人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移的影响。方法收集子痫前期(PE)患者和正常孕妇的胎盘组织(对照组)各20例,Masson染色观察胎盘组织结构改变,免疫荧光组织化学染色检测胎盘组织滋养层细胞MMP2的表达;实时荧光定量PCR检测DINO的表达;将HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞转染DINO小干扰片段(si-DINO)后,实时荧光定量PCR验证DINO、MMP2 mRNA表达,Western blot法检测MMP2蛋白表达;Transwell^(TM)侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移情况。结果与对照组相比,PE患者血压、蛋白尿水平明显增高;胎盘组织可见纤维素样坏死,绒毛膜绒毛减少;免疫荧光显示胎盘滋养层细胞MMP2表达减弱、DINO表达增加;转染si-DINO后,DINO表达降低,而MMP2 mRNA及蛋白表达增加,HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移能力显著增加。结论DINO下调MMP2表达,抑制胎盘滋养层细胞的侵袭与迁移。 展开更多

关键词 子痫前期 DNA损伤诱导长链非编码RNA(DINO) 基质金属蛋白酶2(MMP2) 侵袭 迁移

在线阅读 下载PDF 职称材料

miR-30a-5p启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致肝损伤中的作用 被引量：11

4

作者 孙磊 郭伟 +5 位作者 马鹏俊 马胜超 杜星辰 张鸣号 郝银菊 姜怡邓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期119-126,共8页

目的:探讨微小RNA-30a-5p(miR-30a-5p)启动子区DNA甲基化在肝损伤中的作用。方法:随机选取4周龄胱硫醚β-合成酶(CBS)基因正常(CBS+/+)小鼠(n=12)及单基因敲除(CBS+/-)小鼠(n=12),均给予高蛋氨酸饮食8周。HL-7702细胞体外常规培养,分为... 目的:探讨微小RNA-30a-5p(miR-30a-5p)启动子区DNA甲基化在肝损伤中的作用。方法:随机选取4周龄胱硫醚β-合成酶(CBS)基因正常(CBS+/+)小鼠(n=12)及单基因敲除(CBS+/-)小鼠(n=12),均给予高蛋氨酸饮食8周。HL-7702细胞体外常规培养,分为对照(control)组、同型半胱氨酸(Hcy)组和Hcy+5-氮杂胞苷(AZC)组。全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;微板法测定肝细胞ALT和AST水平;小鼠肝脏石蜡切片行HE染色观察肝脏损伤情况;细胞活力染色检测肝细胞活力;RT-qPCR法检测小鼠肝脏组织和肝细胞中miR-30a-5p的表达;Pearson相关性分析肝脏miR-30a-5p表达与血清ALT和AST水平的相关性;巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测小鼠肝脏组织以及肝细胞中miR-30a-5p启动子区DNA甲基化水平的变化。结果:与CBS+/+对照组相比,CBS+/-组小鼠血清的Hcy、ALT和AST水平显著升高(P<0.05);HE染色显示肝细胞肿胀,可见核碎裂、溶解;肝脏miR-30a-5p表达明显降低(P<0.01);小鼠肝脏组织中miR-30a-5p的表达与血清ALT和AST的水平呈负相关(r2=0.4557,P=0.0003;r2=0.4626,P=0.0003);miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01)。在细胞水平,与control组相比,Hcy组的ALT和AST水平升高(P<0.05,P<0.01),细胞活力显著降低,肝细胞miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01),而使用AZC后miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平降低(P<0.05),miR-30a-5p的表达上调(P<0.05)。结论:miR-30a-5p启动子区DNA高甲基化可能在肝损伤中发挥重要作用。 展开更多

关键词 微小RNA-30a-5p DNA甲基化 胱硫醚Β-合成酶 肝脏损伤 同型半胱氨酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

丝/苏氨酸蛋白激酶DNA甲基化在同型半胱氨酸致血管内皮细胞凋亡中的作用 被引量：6

5

作者 车双双 徐华 +5 位作者 郭伟 孙磊 张鸣号 杨晓玲 姜怡邓 刘志宏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期709-714,共6页

目的探讨丝/苏氨酸蛋白激酶(MST1)DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致血管内皮细胞凋亡中的作用。方法培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),用100μmol/L Hcy干预48 h。MTT法检测HUVECs的存活率;Hoechst染色观察HUVECs的凋亡情况;Western blo... 目的探讨丝/苏氨酸蛋白激酶(MST1)DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致血管内皮细胞凋亡中的作用。方法培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),用100μmol/L Hcy干预48 h。MTT法检测HUVECs的存活率;Hoechst染色观察HUVECs的凋亡情况;Western blot检测MST1、Bcl-2、BAX和DNMT1的蛋白表达;巢式降落式PCR(nMS-PCR)法检测MST1启动子区DNA甲基化改变。结果与正常对照组相比,Hcy处理后HUVECs的存活率明显降低(P <0.01);Hoechst 33258染色后Hcy组可见核固缩、凋亡小体等典型的凋亡形态学特征;Western blot检测BAX的蛋白表达增加了1.23倍,而Bcl-2的蛋白表达及Bcl-2/BAX明显下调(P <0.05);MST1的蛋白表达升高(P <0.01),与Bcl-2/BAX呈负相关(r^2=0.844 6,P <0.001);同时,MST1 DNA甲基化水平及DNMT1蛋白表达下降(P <0.01)。结论 MST1表达增高可能在Hcy致HUVECs凋亡中发挥重要作用,而DNMT1表达下调引起的MST1启动子区DNA低甲基化可能是其表达增高的重要机制。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 丝/苏氨酸蛋白激酶 DNA甲基化 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用研究 被引量：14

6

作者 吴琪瑞 王艳华 +5 位作者 刘林英 高丽娜 殷荷 张玉月 韩可栋 张慧萍 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期601-605,共5页

目的探讨miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用。方法qRT-PCR检测胎盘组织中miR-488-3p的表达;并与子痫前期患者的临床特征进行相关性分析;同时,体外培养人绒毛膜滋养层细胞,并转染miR-488-3p mimic和inhibitor;Transw... 目的探讨miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用。方法qRT-PCR检测胎盘组织中miR-488-3p的表达;并与子痫前期患者的临床特征进行相关性分析;同时,体外培养人绒毛膜滋养层细胞,并转染miR-488-3p mimic和inhibitor;Transwell观察miR-488-3p对滋养层细胞侵袭和迁移的影响;生物信息学软件预测miR-488-3p下游作用靶点,并在胎盘组织中验证其表达;最后,qRT-PCR检测滋养层细胞中miR-488-3p对MMP2表达的影响。结果与正常孕妇比较,子痫前期患者胎盘组织中miR-488-3p表达水平明显升高,并与收缩压、舒张压呈正相关,而MMP2表达水平降低;过表达miR-488-3p后抑制滋养层细胞侵袭和迁移能力,MMP2表达水平降低;而抑制miR-488-3p表达则相反。结论miR-488-3p在子痫前期胎盘组织中升高,可能通过沉默MMP2,抑制滋养层细胞的侵袭和迁移参与子痫前期的发病。 展开更多

关键词 子痫前期 miR-488-3p 滋养层细胞 侵袭 迁移 MMP2

在线阅读 下载PDF 职称材料

miR-5088-5p在同型半胱氨酸致肝细胞焦亡中的保护作用研究

7

作者 董小艳 刘达越 +5 位作者 徐灵博 顾铃毓 姜怡邓 杨安宁 焦运 李桂忠 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1565-1570,共6页

目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平... 目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平;采用qRT-PCR检测miR-5088-5p的表达水平;将CBS^(+/-)小鼠和CBS^(+/+)小鼠给予高蛋氨酸饮食12周,采用全自动生化仪检测小鼠血清中Hcy水平;采用免疫荧光检测小鼠肝组织中焦亡相关蛋白的表达水平。结果与Control组相比,Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平增加(P<0.01);miR-5088-5p表达水平降低(P<0.01);转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic并给予Hcy干预后,与Hcy组相比,miR-5088-5p NC+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达无差异,与miR-5088-5p NC+Hcy组相比,miR-5088-5p mimic+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05);与CBS^(+/+)小鼠相比,全自动生化分析仪结果显示CBS^(+/-)小鼠血清Hcy水平明显升高(P<0.01),免疫荧光染色结果显示CBS^(+/-)组小鼠肝脏中NLRP3、caspase 1、IL-1β荧光强度增高(P<0.01)。结论miR-5088-5p对同型半胱氨酸诱导的肝细胞焦亡具有保护作用。 展开更多

关键词 CBS小鼠 肝细胞 高同型半胱氨酸血症 MIRNA miR-5088-5p 焦亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

FoxO1经ATF6调控Hcy诱导的肝细胞凋亡 被引量：7

8

作者 王青青 焦运 +6 位作者 吴欣妍 海秀玲 徐龙 张辉 郭伟 郝银菊 姜怡邓 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期203-209,共7页

目的探讨叉头状转录因子(FoxO1)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导肝细胞凋亡中的作用及机制。方法随机选取10周龄雄性cbs^+/-与cbs+/+小鼠各8只饲以2%高蛋氨酸饮食12周,qRT-RCR和Western blot检测肝脏中FoxO1和ATF6的表达;100μmol·L^-1 Hc... 目的探讨叉头状转录因子(FoxO1)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导肝细胞凋亡中的作用及机制。方法随机选取10周龄雄性cbs^+/-与cbs+/+小鼠各8只饲以2%高蛋氨酸饮食12周,qRT-RCR和Western blot检测肝脏中FoxO1和ATF6的表达;100μmol·L^-1 Hcy处理肝细胞(HL-7702)48 h后,qRT-PCR和Western blot检测FoxO1和ATF6的表达改变;转染FoxO1和ATF6 siRNA后,Western blot检测ATF6、Bax和Bcl2蛋白表达,流式细胞术观察肝细胞凋亡情况;FoxO1过表达腺病毒与ATF6 siRNA共转至肝细胞,Western blot检测Bax和Bcl2蛋白表达。结果与cbs+/+组相比,cbs^+/-组肝脏中FoxO1和ATF6的表达水平显著增加(P<0.01);与Control组相比较,Hcy组FoxO1和ATF6的表达显著上调(P<0.01);与Hcy+siNC组相比,Hcy+siFoxO1组的ATF6和Bax表达水平明显降低,Bcl2的表达显著增加,肝细胞凋亡率显著降低(P<0.01);与Ad-FoxO1组相比,Ad-FoxO1+siATF6组Bax的表达显著降低,Bcl2的表达显著增加(P<0.01)。结论FoxO1介导的ATF6表达上调是Hcy致肝细胞凋亡进而引起肝损伤的重要机制之一。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 FOXO1 ATF6 内质网应激 肝细胞凋亡 肝损伤

在线阅读 下载PDF 职称材料

circRNA RBM39与miR-5088-5p在缺氧诱导的滋养细胞自噬中的作用 被引量：9

9

作者 吴琪瑞 王艳华 +6 位作者 柴丽芬 张辉 李淑霞 刘林英 石青 吴凯 张慧萍 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期570-574,共5页

目的探讨circRNA RBM39与miR-5088-5p在缺氧诱导的胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo),分为正常组和缺氧组。采用Western blot检测各组细胞自噬标志蛋白LC3B和p62的表达水平;运用qRT-PCR检测circRNA ... 目的探讨circRNA RBM39与miR-5088-5p在缺氧诱导的胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo),分为正常组和缺氧组。采用Western blot检测各组细胞自噬标志蛋白LC3B和p62的表达水平;运用qRT-PCR检测circRNA RBM39的表达水平;同时,检测circRNA RBM39在HTR8-S/Vneo细胞胞浆/胞核中的表达水平,分析其表达位置;通过TargetScan生物信息学分析circRNA RBM39可竞争结合的miRNAs;而后qRT-PCR检测miR-5088-5p的表达;分别将circRNA RBM39和miR-5088-5p的表达水平与LC3B和p62的表达水平进行相关性分析。结果与正常组相比,缺氧组LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.001),而p62蛋白表达降低(P<0.001);另外,circRNA RBM39在缺氧组中表达上调(P<0.05),并且主要在胞浆中分布;生物信息学发现circRNA RBM39可竞争性结合miR-5088-5p,而且miR-5088-5p在缺氧组中表达下调(P<0.05);最后,通过相关性分析发现circRNA RBM39与自噬水平呈正相关(P<0.01),miR-5088-5p与自噬水平呈负相关(P<0.01)。结论circRNA RBM39及miR-5088-5p与滋养细胞自噬密切相关,而circRNA RBM39可能通过竞争性结合miR-5088-5p在调节缺氧诱导的滋养细胞自噬中发挥重要作用。 展开更多

关键词 缺氧 滋养细胞 自噬 circRNA MIRNAS

在线阅读 下载PDF 职称材料

叶酸和维生素B12在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用 被引量：6

10

作者 马鹏俊 张鸣号 +4 位作者 郭伟 马胜超 孙磊 李桂忠 姜怡邓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1951-1956,共6页

目的:探讨叶酸和维生素B12在同型半胱氨酸(Hcy)通过哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用及机制。方法:将HUVECs分为3组,分别为对照组(0μmol/L Hcy)、Hcy组(100μmol/L Hcy)和干预组(100μmol/L Hcy... 目的:探讨叶酸和维生素B12在同型半胱氨酸(Hcy)通过哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用及机制。方法:将HUVECs分为3组,分别为对照组(0μmol/L Hcy)、Hcy组(100μmol/L Hcy)和干预组(100μmol/L Hcy+30μmol/L叶酸+30μmol/L维生素B12)。细胞处理72 h后,流式细胞术检测HUVECs的凋亡率;荧光倒置显微镜观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)过表达腺病毒转染的效率;RT-qPCR和Western blot分别检测MST1及DNMT1的mRNA和蛋白表达水平;巢式甲基化特异性PCR法检测MST1启动子区的甲基化水平。结果:与正常对照组比较,Hcy组HUVECs的凋亡率升高(P<0.01),MST1的mRNA(P<0.01)与蛋白(P<0.05)表达水平明显增加,DNMT1的mRNA水平降低(P<0.01);而叶酸和维生素B12干预可明显抑制Hcy引起的HUVECs凋亡、MST1 mRNA水平升高(P<0.01)及DNMT1 mRNA水平降低(P<0.01),MST1的mRNA水平与HUVECs凋亡率呈正相关(r=0.943 9,P<0.001)。转染DNMT1过表达腺病毒后,可见HUVECs中大量绿色荧光蛋白表达;同时,DNMT1的mRNA和蛋白表达(P<0.01)以及MST1启动子区的DNA甲基化水平明显增加(P<0.01),而MST1的蛋白水平下降(P<0.01)。结论:MST1表达增加可以诱导HUVECs凋亡,而叶酸和维生素B12在缓解Hcy介导的HUVECs凋亡中发挥重要作用,其保护机制可能是通过上调MST1启动子区DNA甲基化实现的。这将为进一步研究动脉粥样硬化的发病机制提供理论依据。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 叶酸 维生素B12 哺乳动物不育系20样激酶1 DNA甲基化

在线阅读 下载PDF 职称材料

脂肪酸结合蛋白4在同型半胱氨酸致大鼠心肌细胞焦亡中的作用 被引量：3

11

作者 董小艳 刘达越 +6 位作者 徐灵博 顾铃毓 马胜超 杨安宁 杨勇 刘云 姜怡邓 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期33-38,共6页

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)... 目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况;采用qRT-PCR检测FABP4 mRNA表达变化;采用免疫荧光染色法检测焦亡相关蛋白的表达变化;用FABP4抑制剂(BMS-309403)处理心肌细胞,然后将细胞分为对照组(0 mmol/L Hcy)、Hcy组(3 mmol/L Hcy)及Hcy+BMS-309403组(3 mmol/L Hcy和50μmol/L BMS-309403),再次检测焦亡相关蛋白的表达水平。结果 Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显升高(P<0.05);qRT-PCR结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4表达水平明显升高(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,Hcy组NLRP3、caspase-1、IL-1β荧光强度明显增强。加入FABP4抑制剂(BMS-309403)同时给予Hcy干预后,与Hcy组比较,Hcy+BMS-309403组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论 FABP4可能对Hcy诱导的大鼠心肌细胞焦亡有促进作用。 展开更多

关键词 心肌细胞 焦亡 同型半胱氨酸 脂肪酸结合蛋白4

在线阅读 下载PDF 职称材料

环状RNA BRAF_2在子痫前期胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制 被引量：8

12

作者 张玉月 朱亚飞 +6 位作者 高丽娜 殷荷 马朝霞 吴玉珠 王艳华 吴凯 张慧萍 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期374-382,共9页

目的 探讨环状RNABRAF_2(circRNABRAF_2)在子痫前期(PE)胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 收集2018年1月-2019年2月宁夏医科大学总医院正常妊娠与PE孕妇的胎盘组织(n=21),采用qRTPCR检测两组胎盘组织中circRNABRAF_2的表... 目的 探讨环状RNABRAF_2(circRNABRAF_2)在子痫前期(PE)胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 收集2018年1月-2019年2月宁夏医科大学总医院正常妊娠与PE孕妇的胎盘组织(n=21),采用qRTPCR检测两组胎盘组织中circRNABRAF_2的表达水平,并分析circRNABRAF_2表达水平与血压的相关性。体外培养人源胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo):(1)将细胞分为对照组与缺氧组,采用qRT-PCR检测circRNA BRAF_2的表达;(2)在HTR8-S/Vneo中转染circRNABRAF_2慢病毒空载体和过表达慢病毒,分为对照组、circRNABRAF_2阴性对照组及circRNA BRAF_2过表达组,使用qRT-PCR对circRNA BRAF_2进行过表达验证;(3)在circRNA BRAF_2过表达慢病毒转染成功的基础上,将细胞分为对照组、circRNA BRAF_2阴性对照组、circRNA BRAF_2过表达组、缺氧组、缺氧+circRNABRAF_2阴性对照组与缺氧+circRNABRAF_2过表达组,采用EdU和CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2及Bax的表达。采用qRT-PCR检测circRNABRAF_2在HTR8-S/Vneo细胞质和细胞核中的表达水平,通过生物信息学分析筛选与circRNABRAF_2可能结合的miRNA并检测其在组织和细胞中的表达水平。结果 与正常妊娠组比较,PE组孕妇胎盘组织中circRNA BRAF_2表达水平明显降低(P<0.001),且circRNA BRAF_2表达水平与收缩压、舒张压呈负相关(r=±0.4531,P<0.01;r=±0.4381,P<0.01)。qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,缺氧组circRNABR AF_2表达水平明显降低(P<0.01)。circRNA BRAF_2阴性对照组circRNA BRAF_2表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);与circRNA BRAF_2阴性对照组比较,circRNA BRAF_2过表达组circRNA BRAF_2表达水平明显升高(P<0.001)。EdU及CCK-8法检测结果显示,与对照组比较,缺氧组EdU阳性细胞百分比明显下降(P<0.001),滋养细胞增殖能力降低(P<0.001);与缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组比较,缺氧+circRNA BRAF_2过表达组滋养细胞EdU阳性细胞百分比明显升高(P<0.001),滋养细胞增殖能力明显增强(P<0.001)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,缺氧组细胞凋亡率明显增高(P<0.001);与缺氧+circRNABRAF_2阴性对照组比较,缺氧+circRNABRAF_2过表达组细胞凋亡率明显降低(P<0.001)。Westernblotting检测结果显示,与对照组比较,缺氧组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平升高(P<0.01或P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01);与缺氧+circRNA BRAF_2阴性对照组比较,缺氧+circRNA BRAF_2过表达组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白表达水平降低(P<0.001或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,circRNA BRAF_2主要在细胞质中表达,生物信息学分析结果显示,circRNA BRAF_2与miR-7855-5p存在结合位点。qRT-PCR检测结果显示,与正常妊娠组比较,miR-7855-5p在PE胎盘组织中高表达(P<0.05);与对照组细胞比较,缺氧组miR-7855-5p明显高表达(P<0.001)。结论 circRNA BRAF_2可促进PE胎盘滋养细胞增殖并抑制其凋亡,作用机制可能与miR-7855-5p有关。 展开更多

关键词 子痫前期 circRNA 细胞增殖 细胞凋亡 MIRNAS

在线阅读 下载PDF 职称材料

miR-5088-5p在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其对滋养细胞自噬的影响 被引量：5

13

作者 殷荷 王艳华 +6 位作者 吴琪瑞 张辉 高丽娜 朱亚飞 张慧萍 吴凯 姜怡邓 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第24期3312-3316,3322,共6页

目的探讨胎盘组织miR⁃5088⁃5p表达水平与子痫前期患者临床特征的相关性及其在子痫前期发病机制中的作用。方法qRT⁃PCR检测胎盘组织miR⁃5088⁃5p的表达;将miR⁃5088⁃5p表达水平与临床特征进行相关性分析;免疫荧光检测胎盘组织中LC3B及p62... 目的探讨胎盘组织miR⁃5088⁃5p表达水平与子痫前期患者临床特征的相关性及其在子痫前期发病机制中的作用。方法qRT⁃PCR检测胎盘组织miR⁃5088⁃5p的表达;将miR⁃5088⁃5p表达水平与临床特征进行相关性分析;免疫荧光检测胎盘组织中LC3B及p62的表达;同时,体外培养人源胎盘滋养细胞株(HTR8⁃S/Vneo),分为常氧组和缺氧组,转染miR⁃5088⁃5p mimics后,Western blot检测各组胎盘滋养细胞LC3B和p62蛋白的表达。结果miR⁃5088⁃5p在子痫前期胎盘组织中明显低表达(P<0.01),且表达水平与收缩压、舒张压、血小板计数呈负相关,而与新生儿体重呈正相关(P<0.05);免疫荧光显示LC3B在子痫前期组胎盘组织中增加,而p62减少;另外,与常氧组比较,缺氧组细胞LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.05),而p62蛋白表达降低(P<0.05);转染miR⁃5088⁃5p mimics后,LC3BⅡ/Ⅰ表达降低(P<0.01),p62表达增加(P<0.05)。结论miR⁃5088⁃5p在子痫前期胎盘组织中显著下调,其过表达可显著抑制胎盘滋养细胞自噬的发生,有望成为子痫前期的诊断分子标记物和治疗靶点。 展开更多

关键词 miR⁃5088⁃5p 子痫前期 缺氧 滋养细胞 自噬

在线阅读 下载PDF 职称材料

miR-491-5p对缺氧诱导的滋养细胞凋亡的促进作用及其机制 被引量：3

14

作者 全尚琨 张辉 +6 位作者 李昱霖 胡舒彤 盛思琪 张晴 刘达越 姜怡邓 李桂忠 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期42-48,共7页

目的探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组:对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养... 目的探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组:对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养细胞凋亡情况,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,TargetScan数据库预测miR-491-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p与B-细胞淋巴瘤因子2样蛋白2基因(BCL2L2)的靶向关系。miR-491-5pmimic和inhibitor分别转染滋养细胞后,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,Westernblotting检测BCL2L2蛋白的表达改变,细胞活力染色、Western blotting、流式细胞术检测滋养细胞凋亡情况。结果与对照组比较,缺氧组滋养细胞凋亡率明显增高(P<0.001),miR-491-5p表达明显增高(2.784±0.214 vs.1.000±0.000,P<0.01);生物信息学预测与双荧光素酶检测报告实验显示,miR-491-5p可与BCL2L2结合并调控其表达。与对照组比较,miR-491-5p mimic组miR-491-5p表达明显增高(7659.300±191.300 vs.5.467±0.503,P<0.01),而miR-491-5p inhibit组miR-491-5p表达明显降低(0.139±0.022vs.0.323±0.035,P<0.05)。与缺氧组比较,缺氧+miR-491-5pinhibit组滋养细胞凋亡率降低(11.56%±0.452%vs.16.67%±0.750%,P<0.01),BCL2L2和Bcl-2蛋白相对表达量增高(0.702±0.047vs.0.312±0.007,P<0.001;0.752±0.055vs.0.415±0.005,P<0.01),Bax蛋白表达降低(1.221±0.066vs.1.652±0.085,P<0.05);缺氧+miR-491-5pmimic组滋养细胞凋亡率增高(23.54%±1.233%vs.16.67%±0.750%,P<0.001),BCL2L2和Bcl-2蛋白相对表达量降低(0.211±0.013vs.0.312±0.007,P<0.01;0.203±0.011vs.0.415±0.005,P<0.001),Bax蛋白表达增高(2.362±0.284vs.1.652±0.085,P<0.01)。结论miR-491-5p可负向调控BCL2L2表达,促进缺氧诱导的滋养细胞凋亡,进而加速子痫前期的发展进程。 展开更多

关键词 滋养细胞 miR-491-5p BCL2L2 细胞凋亡 缺氧

在线阅读 下载PDF 职称材料

TLR4/NF-κB信号通路对CBS^(+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响 被引量：9

15

作者 熊建团 顾铃毓 +6 位作者 王青青 丁宁 董小艳 刘达越 徐灵博 焦运 姜怡邓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1227-1232,共6页

目的:探讨TLR4/NF-κB信号通路对胱硫醚β-合成酶(CBS)基因杂合敲除(CB^(S+/-))小鼠非酒精性脂肪性肝病形成的影响。方法:随机选取4周龄CBS基因正常(CBS+/+)小鼠(n=6)及CB^(S+/-)小鼠(n=6),均给予高蛋氨酸饮食12周。应用全自动生化分析... 目的:探讨TLR4/NF-κB信号通路对胱硫醚β-合成酶(CBS)基因杂合敲除(CB^(S+/-))小鼠非酒精性脂肪性肝病形成的影响。方法:随机选取4周龄CBS基因正常(CBS+/+)小鼠(n=6)及CB^(S+/-)小鼠(n=6),均给予高蛋氨酸饮食12周。应用全自动生化分析仪检测小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及同型半胱氨酸(Hcy)水平;分离肝脏并计算肝指数(肝重/体重);ELISA法检测小鼠肝脏组织TC及TG含量变化;苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察小鼠肝脏结构和脂质改变;RT-qPCR和Western blot检测小鼠肝组织中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达;Pearson相关性分析评估小鼠肝脏中TLR4和NF-κB表达与TC和TG含量的相关性。结果:与CBS+/+组小鼠相比较,CB^(S+/-)组小鼠血清Hcy水平升高(P<0.05),肝指数升高(P<0.05),肝组织及血清中TC和TG含量增加(P<0.05或P<0.01);HE和油红O染色结果表明CB^(S+/-)组小鼠肝脏脂肪变性明显;TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);TLR4和NF-κB分别与小鼠肝脏中TC和TG含量呈正相关。结论:TLR4/NF-κB信号通路在CB^(S+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病的形成过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 非酒精性脂肪性肝病 TLR4/NF-κB信号通路 胱硫醚Β-合成酶 同型半胱氨酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

同型半胱氨酸在心肌细胞凋亡和增殖中的作用及其机制 被引量：2

16

作者 刘达越 董小艳 +6 位作者 徐灵博 张慧萍 全尚琨 马胜超 白永生 杨勇 李桂忠 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期984-991,共8页

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠心肌细胞凋亡、增殖的作用及其可能机制。方法将大鼠心肌细胞分为对照组与Hcy组(用终浓度为3 mmol/L的Hcy刺激24 h),采用Western blotting检测TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、磷酸化的NF-κB(p-NF-... 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠心肌细胞凋亡、增殖的作用及其可能机制。方法将大鼠心肌细胞分为对照组与Hcy组(用终浓度为3 mmol/L的Hcy刺激24 h),采用Western blotting检测TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、磷酸化的NF-κB(p-NF-κB),凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,EdU染色观察心肌细胞增殖情况。将TLR4干扰片段转染心肌细胞,采用Western blotting检测TLR4表达情况,对干扰片段进行筛选和验证。将心肌细胞分为干扰片段空载体组(si-NC+Hcy组)与干扰TLR4组(si-TLR4+Hcy组),并加入3 mmol/L的Hcy干预24 h,采用Western blotting检测心肌细胞MyD88、NF-κB、p-NF-κB,凋亡相关蛋白Bax、cleavedcaspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,EdU染色观察心肌细胞增殖情况。结果Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组TLR4、MyD88、p-NF-κB及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3表达水平升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组TLR4、MyD88、p-NF-κB及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3的表达水平降低(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平升高(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,Hcy组细胞凋亡率明显增高(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。EdU染色结果显示,与对照组比较,Hcy组EdU阳性细胞率明显降低(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组EdU阳性细胞率明显增高(P<0.01)。结论Hcy可诱导大鼠心肌细胞凋亡,抑制心肌细胞增殖,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 TLR4/NF-κB信号通路 心肌细胞 细胞凋亡 增殖

在线阅读 下载PDF 职称材料

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)促进同型半胱氨酸致肝细胞自噬作用 被引量：2

17

作者 顾铃毓 徐灵博 +3 位作者 杨安宁 焦运 张慧萍 姜怡邓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期240-245,共6页

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携... 目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携带双荧光蛋白和LC3(mRFP-GFP-LC3)基因的腺病毒,激光扫描共聚焦显微镜技术观察细胞内自噬流水平变化,实时荧光定量PCR检测lncGAS5的表达水平。转染lncGAS5小干涉RNA(si-lncGAS5)及阴性对照小干涉RNA(si-NC),并用Hcy处理,再次检测LC3B和P62及自噬体的变化。结果与对照组比较,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值增加,P62蛋白表达降低,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量增加,lncGAS5表达升高。敲低lncGAS5后,LC3BⅡ/LC3BⅠ比值减小,P62蛋白表达升高,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量减少。结论 lncGAS5促进Hcy致肝细胞自噬。 展开更多

关键词 长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5) 同型半胱氨酸(Hcy) 肝细胞 自噬

在线阅读 下载PDF 职称材料

circRNA CPSF6核内转移促进同型半胱氨酸诱导的滋养细胞凋亡 被引量：3

18

作者 高丽娜 吴琪瑞 +6 位作者 殷荷 刘林英 吴玉珠 张玉月 王艳华 吴凯 张慧萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期146-152,共7页

目的探讨环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6)在同型半胱氨酸(Hcy)致滋养细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy处理)与1 mmol/L Hcy处理组。采用免疫荧光细胞化... 目的探讨环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6)在同型半胱氨酸(Hcy)致滋养细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy处理)与1 mmol/L Hcy处理组。采用免疫荧光细胞化学染色检测滋养细胞胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达,Western blot法检测caspase-3蛋白水平;实时定量PCR检测circRNA CPSF6的mRNA表达水平;同时,运用小干涉RNA(siRNA)技术敲低滋养细胞circRNA CPSF6表达,Western blot法检测细胞caspase-3、caspase-9、B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)表达;实时定量PCR检测circRNA CPSF6在Hcy处理前后滋养细胞胞质/胞核中的表达水平。结果与对照组相比,Hcy处理组caspase-3表达明显增加,circRNA CPSF6 mRNA表达上调;敲低circRNA CPSF6后,caspase-3表达降低,线粒体凋亡途径被抑制;正常培养的滋养细胞中circRNA CPSF6在胞质大量表达,而给予Hcy处理后,circRNA CPSF6主要在胞核表达。结论通过circRNA CPSF6核内转移激活线粒体凋亡途径促进Hcy诱导的滋养细胞凋亡。 展开更多

关键词 环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6) 滋养细胞 同型半胱氨酸(Hcy) 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

浸润性乳腺癌组织肝配蛋白A型受体2(EphA2)高表达且与细胞焦亡负相关 被引量：2

19

作者 刘昆 吴立刚 +6 位作者 揭育祯 纳莉 张晴 田荣 李桂忠 卢冠军 马胜超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期981-986,共6页

目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶... 目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测45例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中EphA2表达情况;用Pearson相关系数对患者癌组织EphA2的蛋白表达与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β进行相关性分析。结果与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组中NLRP3、caspase-1、IL-1β和ICAM-1的蛋白表达水平明显降低,EphA2蛋白表达明显升高;EphA2水平与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β均呈负相关性。结论乳腺癌组织EphA2高表达,且与细胞焦亡呈负相关。 展开更多

关键词 乳腺癌 细胞焦亡(pyroptosis) 炎性体 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 肝配蛋白A型受体2(EphA2)

在线阅读 下载PDF 职称材料

同型半胱氨酸通过上调Rap1A表达促进小鼠巨噬细胞增殖及M1极化 被引量：4

20

作者 杨亚丽 田荣 +2 位作者 袁茵 王艳佳 杨晓玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期2113-2121,共9页

目的:研究Ras相关蛋白1A(Rap1A)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的ANA-1小鼠腹腔巨噬细胞增殖和M1极化的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养ANA-1细胞,建立高Hcy血症细胞模型,并将细胞分成对照(control)组、Hcy组、Hcy+Rap1A干扰腺病毒(Ad-s... 目的:研究Ras相关蛋白1A(Rap1A)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的ANA-1小鼠腹腔巨噬细胞增殖和M1极化的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养ANA-1细胞,建立高Hcy血症细胞模型,并将细胞分成对照(control)组、Hcy组、Hcy+Rap1A干扰腺病毒(Ad-shRNA/Rap1A)组和Hcy+阴性对照腺病毒(Ad-shRNA/GFP)组。采用CCK-8法和EdU染色检测各组细胞的增殖能力;ELISA检测细胞培养液中炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;RT-qPCR检测各组细胞Rap1A、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期抑制蛋白p27、M1极化标志物CD80和CD86及M2极化标志物CD163和CD200R的mRNA表达;Western blot检测Rap1A、PCNA和p27蛋白表达。结果:与control组相比,Hcy组细胞活力、EdU阳性细胞数目、细胞培养液中IL-6和TNF-α浓度、CD80和CD86的mRNA表达水平及Rap1A和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),而CD163和CD200R的mRNA表达水平及p27的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与Hcy+Ad-shRNA/GFP组相比,Hcy+AdshRNA/Rap1A组细胞活力、EdU阳性细胞数目、CD80和CD86的mRNA表达水平及Rap1A和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),CD163和CD200R的mRNA表达水平及p27的mRNA水平和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论:Hcy能够促进小鼠巨噬细胞增殖及M1极化,其机制与Hcy上调Rap1A表达有关。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 Ras相关蛋白1A 巨噬细胞 细胞增殖 M1极化

在线阅读 下载PDF 职称材料