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甜叶菊遗传转化体系的建立与优化 被引量:1
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作者 王静 赵雨萌 张虹 《核农学报》 北大核心 2025年第6期1129-1136,共8页
为了建立甜叶菊高效率的遗传转化体系,以甜叶菊中山2号叶片为外植体,首先对诱导愈伤形成和不定芽分化及生根的生长调节剂进行了筛选;设计正交试验,探讨了影响农杆菌介导法转化效率的农杆菌种类、菌液浓度、共培养时间,以及抗生素的使用... 为了建立甜叶菊高效率的遗传转化体系,以甜叶菊中山2号叶片为外植体,首先对诱导愈伤形成和不定芽分化及生根的生长调节剂进行了筛选;设计正交试验,探讨了影响农杆菌介导法转化效率的农杆菌种类、菌液浓度、共培养时间,以及抗生素的使用范围。为了进一步提高甜叶菊遗传转化效率,探讨了影响基因枪法转化效率的轰击压力、轰击距离。结果表明,最佳的愈伤组织和不定芽分化培养基为MS+30 mg·L^(-1)蔗糖+0.5 mg·L^(-1)吲哚乙酸(IAA)+1.5 mg·L^(-1)6-苄氨基嘌呤(BAP)+0.5 mg·L^(-1)激动素(KT),不定芽分化率为67.5%;生根最适培养基为1/2 MS+0.5 mg·L^(-1)萘乙酸(NAA)+2 mg·L^(-1)赤霉素(GA4+7),生根率为95.7%;农杆菌介导法适宜的农杆菌菌株为GV3101,农杆菌菌液浓度OD550为0.4~0.6,共培养2 d,阳性愈伤转化率为90.3%,阳性转基因再生植株的获得率为47.3%,导入的外源sGFP基因均有较高的表达水平;基因枪法适宜的轰击压力为1100 psi,轰击距离为9 cm,但是转基因外植体分化能力明显下降。本研究为甜叶菊基因功能研究及利用基因工程技术进行品种改良提供了技术基础。 展开更多
关键词 甜叶菊 组织培养 农杆菌介导法 基因枪法 遗传转化
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植物免疫诱抗剂对枸杞生长及根腐病抗性的影响
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作者 冯睿 刘璇 +7 位作者 兰航 刘朔 高寒 马云妮 池礼鑫 岳思君 石晶 郑蕊 《南方农业学报》 北大核心 2025年第7期2239-2248,共10页
【目的】研究新型植物免疫诱抗剂智能聪(ZNC)对宁夏枸杞的促生作用及对枸杞根腐病的诱抗效果,为ZNC在枸杞栽培生产中的推广应用提供理论依据。【方法】以宁夏枸杞品种宁杞1号、宁杞5号、宁杞7号和杞鑫1号为试验材料,测定0、5、10、50和1... 【目的】研究新型植物免疫诱抗剂智能聪(ZNC)对宁夏枸杞的促生作用及对枸杞根腐病的诱抗效果,为ZNC在枸杞栽培生产中的推广应用提供理论依据。【方法】以宁夏枸杞品种宁杞1号、宁杞5号、宁杞7号和杞鑫1号为试验材料,测定0、5、10、50和100 ng/mL ZNC处理后的枸杞种子萌发率及根长,并以上述浓度对枸杞幼苗进行灌根处理,测定灌根后60 d的株高、叶面积和叶绿素含量。采用枸杞离体叶片接菌及伤根接菌试验,观察叶片表型和菌斑大小,测定超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸酶(PAL)和多酚氧化酶(PPO)活性,评价ZNC对感病品种宁杞5号的诱抗效果。【结果】宁杞1号、宁杞5号、宁杞7号和杞鑫1号分别在10、100、50和10 ng/mL ZNC处理下的萌发效果最好。50 ng/mL ZNC对宁杞1号、宁杞7号和杞鑫1号幼苗根长的促进效果较好,而100 ng/mL ZNC对宁杞5号幼苗根长的促进效果较好;50和100 ng/mL ZNC可明显促进枸杞株高和叶面积增加;不同浓度ZNC对枸杞叶片叶绿素积累也有明显促进作用,50 ng/mL ZNC处理下4个品种叶片叶绿素含量分别较0 ng/mL处理显著增加114.47%、99.07%、151.70%和58.67%(P<0.05)。接菌试验结果表明,50 ng/mL ZNC处理后的离体枸杞叶片上菌斑生长速度较慢,菌斑直径最小,为2.58 mm。此外,50 ng/mL ZNC处理后的宁杞5号枸杞叶片SOD、PAL和PPO活性均高于未处理对照,SOD和PPO活性在接菌后3 h达最大值,分别为398.35和65.00 U/g;PAL活性在接菌后12 h达最大值,为6.14 U/g。【结论】适宜浓度的ZNC可促进枸杞种子萌发及幼苗生长,但不同品种的适宜ZNC浓度存在差异。灌根施用50 ng/mL ZNC可有效增强枸杞自身免疫,激活SOD、PAL和PPO等保护酶活性,抑制根腐病病原菌生长,进而达到抗病效果。 展开更多
关键词 宁夏枸杞 智能聪 促生作用 酶活性 根腐病抗性
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甜叶菊中9种甜菊醇糖苷积累与其生物合成关键基因表达量的相关性 被引量:5
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作者 张虹 路国栋 +2 位作者 袁春春 郎思睿 陈任 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期75-82,共8页
为了研究甜叶菊中主要甜菊醇糖苷积累特点与其生物合成关键基因表达量的关系,本研究选取3个品种甜叶菊(普赛科3号、中山2号、同心)为试验材料,定期在幼苗期、营养生长期、花蕾期采收植株的上位3对叶片,采用液相色谱-质谱法(LC-MS)检测9... 为了研究甜叶菊中主要甜菊醇糖苷积累特点与其生物合成关键基因表达量的关系,本研究选取3个品种甜叶菊(普赛科3号、中山2号、同心)为试验材料,定期在幼苗期、营养生长期、花蕾期采收植株的上位3对叶片,采用液相色谱-质谱法(LC-MS)检测9种甜菊醇糖苷,即莱宝迪苷A、B、C、D、E、F(RA、RB、RC、RD、RE、RF)、甜菊糖苷(ST)、甜茶糖苷(RBS)和杜尔可苷A(DA)含量,同时利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析糖苷生物合成的3个UDP-糖基转移酶(UGTs)关键基因,即SrUGT91D2e、SrUGT74G1和SrUGT76G1的表达水平。结果表明,甜味糖苷RA在普塞科3号营养生长期含量最高(1.60 mg·g^(-1)),RD在普塞科3号的花蕾期含量最高(1.58 mg·g^(-1));苦味糖苷ST、RC、DA在普塞科3号中的积累量显著低于中山2号和同心(普塞科3号ST为0.50 mg·g^(-1)、RC为0.26 mg·g^(-1)、DA为0.01 mg·g^(-1)),因此普塞科3号可作为甜味糖苷高产选育品种。对甜菊醇糖苷生物合成关键基因表达量与糖苷含量进行相关性分析,甜味糖苷RD和RA的含量与其关键影响因子SrUGT91D2e和SrUGT76G1的表达量显著相关,苦味糖苷RC、ST、DA的含量与其关键影响因子SrUGT74G1的表达量显著相关。本试验为甜叶菊不同甜度糖苷的品种选育及采收时间的确定提供了依据。 展开更多
关键词 甜叶菊 甜菊醇糖苷 基因表达 相关性分析
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黑果枸杞高效植株再生与遗传转化体系的建立 被引量:8
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作者 张虹 安迎瑞 +2 位作者 张君 郎思睿 陈任 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期929-936,共8页
为建立高效的黑果枸杞组织培养与遗传转化体系,本研究以黑果枸杞叶片、茎节、茎段为外植体,在含有不同浓度组合的NAA和BAP培养基上进行愈伤组织和不定芽诱导比较;选择黑果枸杞叶片为材料,采用农杆菌介导法,将带有绿色荧光蛋白基因(sGFP... 为建立高效的黑果枸杞组织培养与遗传转化体系,本研究以黑果枸杞叶片、茎节、茎段为外植体,在含有不同浓度组合的NAA和BAP培养基上进行愈伤组织和不定芽诱导比较;选择黑果枸杞叶片为材料,采用农杆菌介导法,将带有绿色荧光蛋白基因(sGFP)的双元表达载体导入黑果枸杞,探讨侵染时间和抗生素浓度对遗传转化效果的影响。结果表明,黑果枸杞的最适植株再生体系为:以叶片为外植体,MS基本培养基中添加0.5 mg·L^(-1)NAA和0.3 mg·L^(-1)BAP,愈伤组织诱导率为88.56%,不定芽诱导率为54.54%,将不定芽置于1/2MS培养基中进行生根诱导,生根率为95%;稳定高效的遗传转化体系为:农杆菌侵染液OD_(600)为0.25,共培养3 d,卡那霉素(kanamycin)和羧苄西林(carbenicillin)浓度分别为25和250 mg·L^(-1)。愈伤组织和不定芽诱导时经卡那霉素和荧光标记双重选拔,愈伤组织阳性率为85.47%,出芽生根后经PCR鉴定,阳性转化率为29%;利用实时荧光定量PCR检测转基因植株,导入的外源sGFP基因均有较高的表达水平。本研究为利用基因工程技术对黑果枸杞进行品种改良提供了技术支撑。 展开更多
关键词 黑果枸杞 组织培养 植株再生 遗传转化 农杆菌介导
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