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DA大鼠骨髓来源PD-L1^(hi)tol-DC构建及其免疫学功能鉴定
1
作者
杨志琦
侯培博
+3 位作者
吴浪
刘晶
丁洋
李明皓
《器官移植》
北大核心
2025年第1期83-90,共8页
目的构建DA大鼠骨髓来源程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-LI)hi耐受性树突状细胞(tol-DC)并鉴定其免疫学功能。方法提取DA大鼠骨髓细胞,联合应用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组小鼠白细胞介素(IL)-4,体外培养6 d诱导骨髓细胞分...
目的构建DA大鼠骨髓来源程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-LI)hi耐受性树突状细胞(tol-DC)并鉴定其免疫学功能。方法提取DA大鼠骨髓细胞,联合应用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组小鼠白细胞介素(IL)-4,体外培养6 d诱导骨髓细胞分化为未成熟树突状细胞(imDC);应用脂多糖刺激细胞成熟,继续培养2 d收集成熟树突状细胞(mDC);加入PD-L1慢病毒载体病毒原液或同等剂量慢病毒病毒原液,培养2 d后收集PD-L1^(hi)tol-DC和Lv-imDC。应用倒置相差显微镜及透射电镜观察PD-L1^(hi)tol-DC形态;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法及流式细胞术检测细胞表面特异性标志物表达水平。将imDC、mDC、Lv-imDC及PD-L1^(hi)tol-DC分别与Lewis大鼠脾脏来源CD8^(+)T细胞共培养,酶联免疫吸附试验检测各组上清液炎症因子水平,流式细胞术分析各组T细胞凋亡及调节性T细胞(Treg)分化情况。结果经PD-L1基因修饰构建的PD-L1^(hi)tol-DC形态符合tol-DC特征,表面CD80、CD86、主要组织相容性复合体(MHC)表达水平较低。与CD8^(+)T细胞混合培养后,PD-L1^(hi)tol-DC组上清液IL-10、转化生长因子(TGF)-β1水平较高,肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-17A水平较低,T细胞凋亡及Treg分化增多。结论通过慢病毒载体过表达PD-L1可成功诱导构建DA大鼠骨髓来源PD-L1^(hi)tol-DC,促进抑炎因子分泌及T细胞凋亡,诱导Treg分化,抑制同种异体CD8^(+)T细胞免疫反应,这为下一步器官移植免疫耐受研究提供了实验依据。
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关键词
树突状细胞
器官移植
免疫耐受
免疫抑制
程序性细胞死亡蛋白配体1
T细胞
调节性T细胞
炎症因子
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职称材料
枸杞多糖通过促进胆囊癌细胞铁死亡抑制其恶性进展
2
作者
辛国军
王建承
+6 位作者
杨勇
雷鹏
张亚文
李宝定
张多强
梁琦
卜阳
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期452-457,共6页
目的探究枸杞多糖(LBP)通过调控细胞铁死亡对胆囊癌细胞(NOZ和SGC-996)增殖和转移的影响。方法不同剂量的LBP处理体外培养NOZ和SGC-996细胞;将细胞分为对照组(Control)、20μmol/LLBP组、40μmol/LLBP组、60μmol/LLBP组、80μmol/LLBP...
目的探究枸杞多糖(LBP)通过调控细胞铁死亡对胆囊癌细胞(NOZ和SGC-996)增殖和转移的影响。方法不同剂量的LBP处理体外培养NOZ和SGC-996细胞;将细胞分为对照组(Control)、20μmol/LLBP组、40μmol/LLBP组、60μmol/LLBP组、80μmol/LLBP组、LBP+Fer-1组。用MTT法检测细胞活力;EdU法检测细胞增殖能力;Tran swell检测细胞侵袭能力;比色法检测Fe^(2+)的水平,BODIPYTM581/591C11分子探针测定活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的水平;Westernblot检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)酰基辅酶a合成酶长链家族成员4(ACSL4)、β-catenin和Wnt3A蛋白表达。结果与对照组比较,40μmol/LLBP组、60μmol/LLBP组细胞活力、增殖、侵袭能力显著降低(均P<0.05),Fe^(2+)水平、ROS、MDA活性明显增加(均P<0.05),GPX4、β-catenin和Wnt3A蛋白表达显著减少,ACSL4蛋白表达明显增加(均P<0.05)。与LBP组比较,LBP+Fer-1组细胞活力、增殖、侵袭能力显著提高(均P<0.05)。结论LBP通过诱导胆囊癌细胞铁死亡进而抑制其细胞的增殖和转移。
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关键词
枸杞多糖
铁死亡
胆囊癌
增殖
侵袭
谷胱甘肽过氧化物酶4
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职称材料
题名
DA大鼠骨髓来源PD-L1^(hi)tol-DC构建及其免疫学功能鉴定
1
作者
杨志琦
侯培博
吴浪
刘晶
丁洋
李明皓
机构
宁夏回族自治区
人民医院
(
宁夏
医科
大学
附属
自治区人民医院
)
肝胆
外科
出处
《器官移植》
北大核心
2025年第1期83-90,共8页
基金
宁夏自然科学基金(2021AAC03308、2024AAC03450)
宁夏回族自治区人民医院科技创新人才项目(院党发〔2023〕72号)
宁夏回族自治区人民医院国家自然科学基金预实验项目(2024GZRYSY0015)。
文摘
目的构建DA大鼠骨髓来源程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-LI)hi耐受性树突状细胞(tol-DC)并鉴定其免疫学功能。方法提取DA大鼠骨髓细胞,联合应用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组小鼠白细胞介素(IL)-4,体外培养6 d诱导骨髓细胞分化为未成熟树突状细胞(imDC);应用脂多糖刺激细胞成熟,继续培养2 d收集成熟树突状细胞(mDC);加入PD-L1慢病毒载体病毒原液或同等剂量慢病毒病毒原液,培养2 d后收集PD-L1^(hi)tol-DC和Lv-imDC。应用倒置相差显微镜及透射电镜观察PD-L1^(hi)tol-DC形态;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法及流式细胞术检测细胞表面特异性标志物表达水平。将imDC、mDC、Lv-imDC及PD-L1^(hi)tol-DC分别与Lewis大鼠脾脏来源CD8^(+)T细胞共培养,酶联免疫吸附试验检测各组上清液炎症因子水平,流式细胞术分析各组T细胞凋亡及调节性T细胞(Treg)分化情况。结果经PD-L1基因修饰构建的PD-L1^(hi)tol-DC形态符合tol-DC特征,表面CD80、CD86、主要组织相容性复合体(MHC)表达水平较低。与CD8^(+)T细胞混合培养后,PD-L1^(hi)tol-DC组上清液IL-10、转化生长因子(TGF)-β1水平较高,肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-17A水平较低,T细胞凋亡及Treg分化增多。结论通过慢病毒载体过表达PD-L1可成功诱导构建DA大鼠骨髓来源PD-L1^(hi)tol-DC,促进抑炎因子分泌及T细胞凋亡,诱导Treg分化,抑制同种异体CD8^(+)T细胞免疫反应,这为下一步器官移植免疫耐受研究提供了实验依据。
关键词
树突状细胞
器官移植
免疫耐受
免疫抑制
程序性细胞死亡蛋白配体1
T细胞
调节性T细胞
炎症因子
Keywords
Dendritic cell
Organ transplantation
Immune tolerance
Immunosuppression
Programmed cell death protein-ligand 1
T cell
Regulatory T cell
Inflammatory factor
分类号
R617 [医药卫生—外科学]
R392.4 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
枸杞多糖通过促进胆囊癌细胞铁死亡抑制其恶性进展
2
作者
辛国军
王建承
杨勇
雷鹏
张亚文
李宝定
张多强
梁琦
卜阳
机构
宁夏回族自治区
人民医院
(
宁夏
医科
大学
附属
自治区人民医院
)
肝胆
外科
上海交通
大学
医学院
附属
瑞金
医院
胰腺
外科
中心
宁夏
医科
大学
总
医院
肝胆
外科
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期452-457,共6页
基金
宁夏回族自治区自然科学基金资助项目(No.2023AAC03506)。
文摘
目的探究枸杞多糖(LBP)通过调控细胞铁死亡对胆囊癌细胞(NOZ和SGC-996)增殖和转移的影响。方法不同剂量的LBP处理体外培养NOZ和SGC-996细胞;将细胞分为对照组(Control)、20μmol/LLBP组、40μmol/LLBP组、60μmol/LLBP组、80μmol/LLBP组、LBP+Fer-1组。用MTT法检测细胞活力;EdU法检测细胞增殖能力;Tran swell检测细胞侵袭能力;比色法检测Fe^(2+)的水平,BODIPYTM581/591C11分子探针测定活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的水平;Westernblot检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)酰基辅酶a合成酶长链家族成员4(ACSL4)、β-catenin和Wnt3A蛋白表达。结果与对照组比较,40μmol/LLBP组、60μmol/LLBP组细胞活力、增殖、侵袭能力显著降低(均P<0.05),Fe^(2+)水平、ROS、MDA活性明显增加(均P<0.05),GPX4、β-catenin和Wnt3A蛋白表达显著减少,ACSL4蛋白表达明显增加(均P<0.05)。与LBP组比较,LBP+Fer-1组细胞活力、增殖、侵袭能力显著提高(均P<0.05)。结论LBP通过诱导胆囊癌细胞铁死亡进而抑制其细胞的增殖和转移。
关键词
枸杞多糖
铁死亡
胆囊癌
增殖
侵袭
谷胱甘肽过氧化物酶4
Keywords
lycium barbarum polysaccharide
ferroptosis
gallbladder cancer
proliferation
invasion
GPX4
分类号
R735.8 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
DA大鼠骨髓来源PD-L1^(hi)tol-DC构建及其免疫学功能鉴定
杨志琦
侯培博
吴浪
刘晶
丁洋
李明皓
《器官移植》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
枸杞多糖通过促进胆囊癌细胞铁死亡抑制其恶性进展
辛国军
王建承
杨勇
雷鹏
张亚文
李宝定
张多强
梁琦
卜阳
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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