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miR-153-3p通过靶向FZD3调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭与迁移 被引量：5
1
作者 张曹 何亚琴 +1 位作者 钱海权 叶晶晶 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期885-892,共8页
目的:探讨miR-153-3p对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制。方法:收集2018年5月至2020年6月宁夏医科大学总医院收治的60例胃癌患者的癌和配对癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系NCI-N87、AGS、SNU-5、SGC7901和胃上皮细胞GES-1... 目的:探讨miR-153-3p对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制。方法:收集2018年5月至2020年6月宁夏医科大学总医院收治的60例胃癌患者的癌和配对癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系NCI-N87、AGS、SNU-5、SGC7901和胃上皮细胞GES-1,qPCR法检测miR-153-3p在胃癌组织与细胞中的表达水平。将miR-153-3p mimic及mimic对照序列转染至SGC7901细胞,用CCK-8、克隆形成、流式细胞术、TUNEL、Transwell和划痕愈合实验分别检测上调miR-153-3p对SGC7901细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。构建裸鼠SGC7901细胞移植瘤模型,观察miR-153-3p对肿瘤生长的影响。通过生物信息学数据库和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-153-3p与FZD3靶向关系,WB法检测miR-153-3p对FZD3蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达的影响。结果:miR-153-3p在胃癌组织和细胞中表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞(均P<0.01),以SGC7901细胞中表达水平最低。上调miR-153-3p显著抑制SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并提高细胞凋亡率(均P<0.01),同时上调细胞中E-cadherin表达而下调N-cadherin、MMP2和MMP9表达(均P<0.01)。在体内实验表明,静脉注射miR-153-3p mimic显著降低移植瘤体积和瘤组织中Ki-67表达而上调P57表达(均P<0.01)。机制分析表明,miR-153-3p靶向结合FZD3基因的3′UTR区域,上调miR-153-3p会抑制FZD3表达并上调β-catenin、TCF-4和cyclin D1水平(均P<0.01)。结论:miR-153-3p靶向FZD3并通过Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 miR-153-3p FZD3基因 胃癌 SGC7901细胞 增殖 侵袭 迁移 WNT/Β-CATENIN信号通路
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S100A6 siRNA的构建及鉴定 被引量：1
2
作者 冯珊珊 杨博 +2 位作者 刘爱琴 武婧 翟惠虹 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期754-757,761,共5页
目的利用小片段干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制S100A6蛋白的表达,为研究CacyBP/SIP核转位机制提供有利的工具。方法设计S100A6的siRNA序列,用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA转染至人结肠癌SW480细胞中,在荧光显微镜下观... 目的利用小片段干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制S100A6蛋白的表达,为研究CacyBP/SIP核转位机制提供有利的工具。方法设计S100A6的siRNA序列,用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA转染至人结肠癌SW480细胞中,在荧光显微镜下观察转染效率,用Real-time PCR及Western blot方法检测S100A6在人结肠癌SW480细胞内的mRNA和蛋白表达。结果构建了3对S100A6-siRNA,荧光显微镜下检测转染人结肠癌SW480细胞成功;RT-PCR证明了在SW480细胞内S100A6的mRNA表达显著降低(P<0.05);Western blot证明了SW480细胞内S100A6蛋白表达显著降低(P<0.05);与S100A6si-1、S100A6si-3组相比,S100A6si-2组对S100A6的mRNA和蛋白抑制效果最明显(P<0.05)。结论成功构建了S100A6-siRNA,为CacyBP/SIP核转位机制研究提供了有利的工具。 展开更多
关键词 结肠癌 S100A6 SIRNA 钙周期素结合蛋白
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Alg13突变致痫小鼠的繁育及鉴定
3
作者 高鹏 霍俊明 +6 位作者 郭宝瑞 于宝利 吴际 王军成 马辉 孙涛 张静 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第22期2256-2265,共10页
目的对Alg13基因敲除(knockout,KO)小鼠进行繁育和鉴定,为研究Alg13在癫痫中的作用提供一种理想的动物模型。方法本研究选用C57BL/6J小鼠,分为Alg13 KO组及野生型(wildtype,WT)组,包括4周龄Alg13 KO小鼠12只(雌雄各6只,体质量6~7 g),WT... 目的对Alg13基因敲除(knockout,KO)小鼠进行繁育和鉴定,为研究Alg13在癫痫中的作用提供一种理想的动物模型。方法本研究选用C57BL/6J小鼠,分为Alg13 KO组及野生型(wildtype,WT)组,包括4周龄Alg13 KO小鼠12只(雌雄各6只,体质量6~7 g),WT小鼠12只(雌雄各6只,体质量7~8 g),8周龄Alg13 KO雄性小鼠18只(体质量21~23 g),WT雄性小鼠18只(体质量22~24 g)。使用PCR、凝胶电泳、DNA测序、TA克隆和蓝白斑筛选综合鉴定Alg13 KO小鼠基因型。免疫组织化学法和免疫印迹法对比验证Alg13 KO小鼠ALG13蛋白的缺失情况。利用同步化视频脑电系统监测Alg13 KO小鼠癫痫发作的行为学表现及脑电特征。免疫印迹分析电压门控钠离子通道α亚基1(sodium channel alpha subunit 1,SCN1A)蛋白表达情况。结果凝胶电泳、DNA测序及蓝白斑筛选结果均显示Alg13 KO小鼠中存在5个碱基的缺失。与WT组相比,免疫组织化学结果证实Alg13 KO小鼠的皮质、小脑和海马区ALG13表达量显著降低(P<0.001;P<0.05;P<0.001),且蛋白免疫印迹结果也说明Alg13 KO小鼠的皮质、小脑和海马区ALG13表达更少(P<0.001)。视频脑电结果显示:部分Alg13 KO小鼠出现频繁的自发性癫痫发作,具有典型癫痫发作的行为学表现和脑电改变;相较于WT组,所有的Alg13 KO组小鼠脑电δ和θ波能量值均显著升高(P<0.001)。Alg13 KO小鼠海马和皮质中SCN1A的表达水平显著高于WT小鼠(P<0.05;P<0.01)。结论成功繁育Alg13基因敲除小鼠模型,该模型表现出显著的癫痫易感性,可用于遗传异常导致癫痫的机制研究。 展开更多
关键词 Alg13 小鼠 基因敲除 癫痫 鉴定
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