苦参碱逆转乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药与PI3K/AKT通道的关系 被引量：24

1

作者 魏昌晟 沈义军 +2 位作者 张智 王健 周炳刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第22期2254-2258,共5页

目的探索苦参碱对乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度苦参碱和MK2206作用MCF-7/ADR细胞24 h后的生长抑制率,以抑制率为10%的药物浓度为检测标准;用荧光RT-PCR、Western blot法检测不同浓度苦... 目的探索苦参碱对乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度苦参碱和MK2206作用MCF-7/ADR细胞24 h后的生长抑制率,以抑制率为10%的药物浓度为检测标准;用荧光RT-PCR、Western blot法检测不同浓度苦参碱作用MCF-7/ADR细胞24 h后MDR1、MRP1、PTEN、AKT基因mRNA和蛋白的表达。结果荧光定量RT-PCR结果显示0.6、1.2 g/L的苦参碱干预组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高,耐药基因MDR1、MRP1的表达量逐渐降低(0.6 g/L苦参碱组MDR1基因的相对表达量为0.659±0.074,MRP1基因的相对表达量为0.503±0.058,与空白对照组相比P<0.01);PI3K/AKT信号通路中的PTEN基因表达量逐渐增高而AKT基因的表达量逐渐降低;相同抑制率的苦参碱组(0.6 g/L)和MK2206组(0.05μmol/L)相比,两组降低MDR1、MRP1、AKT基因表达量的差异不明显(P>0.05),MK2206组更能增高PTEN基因的表达量。Western blot检测结果显示0.3、0.6、1.2 g/L不同浓度苦参碱干预组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高耐药蛋白p-gp、MRP1表达量逐渐降低(0.6 g/L苦参碱组p-gp蛋白的相对表达量为0.316±0.033,MRP1蛋白的相对表达量为0.134±0.014,与空白对照组相比P<0.01),PI3K/AKT信号通路中的p-AKT蛋白表达量逐渐降低,PTEN蛋白表达量逐渐增高,总AKT基因表达量变化不明显;相同抑制率的苦参碱组(0.6 g/L)和MK2206组(0.05μmol/L)相比,苦参碱组更能降低p-gp、MRP1的蛋白表达量且更能增高PTEN的蛋白表达量,但MK2206组更能降低p-AKT的蛋白表达量,对总AKT蛋白表达量两组差异不明显(P>0.05)。结论苦参碱具有逆转乳腺癌多药耐药的作用,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT通道发挥作用。 展开更多

关键词 苦参碱 乳腺癌耐药株 MCF-7/ADR 多药耐药 PI3K/AKT信号通路

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GAD67-GFP精神分裂症小鼠行为学改变及海马齿状回颗粒细胞层GABA能神经元的表达 被引量：11

2

作者 张潇剑 张姣 +2 位作者 韩怀钦 马全瑞 刘娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期332-336,共5页

目的:探讨谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠制备精神分裂症模型后学习与记忆功能的改变及海马齿状回颗粒细胞层GABA能神经元的表达。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)鉴定GAD67-GFP基因敲入小鼠,MK-801连续腹腔注射2周... 目的:探讨谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠制备精神分裂症模型后学习与记忆功能的改变及海马齿状回颗粒细胞层GABA能神经元的表达。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)鉴定GAD67-GFP基因敲入小鼠,MK-801连续腹腔注射2周制备精神分裂症动物模型,通过悬尾实验、Morris水迷宫实验、免疫荧光标记技术等,观察GAD67-GFP基因敲入小鼠的学习与记忆功能的改变及GABA能神经元在海马齿状回颗粒细胞层的表达。结果:停药后实验组与对照组比较:(1)实验组体重增加明显低于对照组(P<0.05);(2)行为学改变:1悬尾实验:实验组不动时间明显小于对照组(P<0.05);2Morris水迷宫实验:定位航行实验中实验组逃避潜伏期,游泳总路程明显长于对照组(P<0.05),而其平均游泳速度与对照组没有明显差异(P>0.05);空间探查实验中实验组经过平台所在点的次数和在平台所在象限的时间明显小于对照组(P<0.05);(3)在海马齿状回颗粒细胞层中实验组的GFP阳性细胞明显多于对照组(P<0.05)。结论:通过对GAD67-GFP基因敲入小鼠进行腹腔注射MK-801制备精神分裂症模型后,其学习与记忆功能显著下降,且海马齿状回颗粒细胞层GABA能神经元明显增加。提示精神分裂症后学习记忆功能减退可能与GABA能神经元的表达有关。 展开更多

关键词 GAD67-GFP 精神分裂症 海马 GABA能神经元 小鼠

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神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间STAT3信号的交互作用 被引量：5

3

作者 刘雅琦 顾金海 +1 位作者 孟锐 安芳玲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期432-437,共6页

目的:探讨神经胶质瘤细胞(A172/U251)与人血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell,HBMEC)之间STAT3信号通路的交互作用。方法:建立A172、U251细胞与HBMEC的Transwell共培养体系,ELISA检测A172、U251细胞及其分泌因子V... 目的:探讨神经胶质瘤细胞(A172/U251)与人血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell,HBMEC)之间STAT3信号通路的交互作用。方法:建立A172、U251细胞与HBMEC的Transwell共培养体系,ELISA检测A172、U251细胞及其分泌因子VEGF对HBMEC分泌IL-6的影响,Western blotting检测HBMEC与A172/U251细胞共培养30 min时HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞STAT3蛋白及其磷酸化状态p-STAT3的影响,CCK-8、Transwell侵袭实验分别检测HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞增殖和侵袭的影响。结果:VEGF(50 ng/ml)组和共培养组(HBMEC分别和A172,U251细胞共培养)HBMEC的IL-6的表达量明显高于对照组(P<0.01)。共培养30 min时,A172/U251细胞的IL-6(50ng/ml)组、共培养组及(共培养+AZD1480)组的STAT3/p-STAT3蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01),(共培养+AZD1480)组的胶质瘤细胞STAT3/p-STAT3蛋白的表达能力显著低于共培养组(P<0.01)。IL-6(50 ng/ml)组,共培养组及(共培养+AZD1480)组的A172/U251细胞增殖及侵袭能力明显高于对照组(P<0.01),(共培养+AZD1480)组的细胞增殖及侵袭能力显著低于共培养组(P<0.01)。结论:神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间存在信号交互作用,且与JAK2/STAT3信号通路密切相关。 展开更多

关键词 神经胶质瘤细胞 人脑微血管内皮细胞 STAT3/p-STAT3 增殖 侵袭

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一种改进的大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法 被引量：7

4

作者 丁娟 丁敬宾 +4 位作者 马小虎 关立锋 杨慧莹 王志军 刘娟 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期349-353,共5页

目的:改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法,从而获取高纯度星形胶质细胞用于神经科学研究。方法:新生大鼠(2~3日龄),75%酒精消毒后断头,于冰上取大脑皮质置于冰冷的D-Hanks液中,去除脑膜和血管,剪碎后用0.25%胰酶消化并分离细胞,以1... 目的:改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法,从而获取高纯度星形胶质细胞用于神经科学研究。方法:新生大鼠(2~3日龄),75%酒精消毒后断头,于冰上取大脑皮质置于冰冷的D-Hanks液中,去除脑膜和血管,剪碎后用0.25%胰酶消化并分离细胞,以1×10~5/ml的密度接种于预铺0.015%多聚赖氨酸的细胞瓶中培养。细胞纯化采用"差速贴壁法"、"梯度血清法"和"十字手摇法",以获取高纯度星形胶质细胞。通过星形胶质细胞特异性表达蛋白即胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)行免疫细胞荧光染色来鉴定细胞纯度。结果:星形胶质细胞纯度大于98%,可多次传代,细胞增殖快,且生长良好。结论:改进的原代星形胶质细胞培养方法,操作简单,细胞纯度高,能满足各种神经科学研究中对高纯度星形胶质细胞培养的实验要求,适宜推广。 展开更多

关键词 原代培养 星形胶质细胞 细胞纯化

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低氧条件下PSB603干预后少突胶质前体细胞的改变 被引量：3

5

作者 马全瑞 周惠惠 +2 位作者 孙金萍 马江波 刘娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期661-665,共5页

目的:探讨在低氧条件下,经腺苷受体A2b(A2b AR)拮抗剂PSB603干预后少突胶质前体细胞(OPC)的改变。方法:原代培养新生SD大鼠脑皮层OPC,随机分为对照组、低氧组、PSB603组及实验组,实验组在2%低氧条件下再给予PSB603处理,4 d后用倒置相差... 目的:探讨在低氧条件下,经腺苷受体A2b(A2b AR)拮抗剂PSB603干预后少突胶质前体细胞(OPC)的改变。方法:原代培养新生SD大鼠脑皮层OPC,随机分为对照组、低氧组、PSB603组及实验组,实验组在2%低氧条件下再给予PSB603处理,4 d后用倒置相差显微镜观察各组细胞的形态学差异,并用MTS检测各组细胞吸光值的差异。结果:与对照组比较,PSB603组的吸光值和形态均无明显差异,而低氧组的吸光值明显升高,且具有多分支或网状的细胞明显增多;与低氧组比较,实验组的吸光值明显下降(P<0.01),且具有多分支或网状的细胞明显减少。结论:低氧能够加速OPC的分化,PSB603能部分阻断低氧所诱导OPC的分化,提示A2b AR在低氧所诱导的OPC分化过程中发挥着重要的作用。这将对治疗脱髓鞘相关疾病以及进一步认识A2b AR在神经系统疾病中的作用具有重要意义。 展开更多

关键词 腺苷受体A2b PSB603 低氧 少突胶质前体细胞

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大鼠下丘脑室旁核与orexin神经元的纤维联系及其在癫痫中的活性研究 被引量：2

6

作者 和祯泉 张燕 +5 位作者 丁娜 马康 左娣 黄卓群 孙涛 牛建国 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期470-476,共7页

目的:观察大鼠下丘脑室旁核(PVN)神经元和下丘脑orexin神经元在癫痫发作后的活性变化,以及相互之间的纤维联系。方法:制作匹罗卡品癫痫大鼠模型,免疫组织化学方法检测PVN内神经元和orexin神经元表达c-Fos情况;BDA顺行神经示踪实验观察PV... 目的:观察大鼠下丘脑室旁核(PVN)神经元和下丘脑orexin神经元在癫痫发作后的活性变化,以及相互之间的纤维联系。方法:制作匹罗卡品癫痫大鼠模型,免疫组织化学方法检测PVN内神经元和orexin神经元表达c-Fos情况;BDA顺行神经示踪实验观察PVN内神经元的纤维向orexin神经元分布区域的投射情况;CTb逆行神经示踪实验观察orexin神经元向PVN的投射情况。结果:PVN内神经元和orexin神经元在癫痫大鼠中的活性明显提高;PVN神经元向orexin集中分布的区域有大量的神经纤维投射;orexin神经元也可以投射到PVN。结论:PVN神经元和orexin神经元参与癫痫发作,PVN与orexin神经元之间存在相互神经纤维联系,可能在癫痫发作及伴发功能性障碍中发挥着重要的作用。 展开更多

关键词 癫痫 下丘脑室旁核 OREXIN 大鼠

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S100β对炎症条件下嗅鞘细胞的作用及机制 被引量：2

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作者 曹军 牛建国 +5 位作者 梁雪云 焦旭文 贾桦 丁冬 郝铁成 何仲义 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期351-356,共6页

目的:明确S100β对干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)诱导的炎症条件下嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的作用,并探讨其发挥作用的机制。方法:将采用改良差速贴壁联合胰酶限时消化3 min法纯化培养的大鼠OECs分为空白对照组... 目的:明确S100β对干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)诱导的炎症条件下嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的作用,并探讨其发挥作用的机制。方法:将采用改良差速贴壁联合胰酶限时消化3 min法纯化培养的大鼠OECs分为空白对照组、炎症模型组、S100β组等3组,每组种板1×106/ml;空白对照组采用常规培养体系培养OECs,炎症模型组采用重组IFN-γ诱导炎症建立OECs体外炎症模型,S100β组在炎症模型组基础上加入S100β蛋白进行干预;采用免疫荧光染色进行OECs鉴定及纯度分析;利用MTT法检测OECs的增殖情况并筛选IFN-γ诱导OECs炎症模型的适宜浓度;利用TUNEL染色法判断各组OECs的凋亡状况;采用Real-Time PCR检测各组OECs表达炎症相关因子i NOS、IL-1β、TNF-α的mRNA水平。根据以上结果,判断在炎症环境中S100β对OECs的影响及可能机制。结果:采用改良方法原代培养的大鼠OECs能够获得80%纯度;与5 ng/ml的浓度相比,10 ng/ml的IFN-γ对OECs的抑制率更高,凋亡细胞更多;与炎症模型组比较,S100β干预组细胞增殖能力升高,凋亡细胞减少;炎症相关因子i NOS、IL-1β以及TNF-α的基因表达水平下降。结论:S100β可以下调IFN-γ激活的炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-α的基因表达水平,提示S100β可能是通过抑制炎症因子的表达从而减少了OECs凋亡的发生。本研究结果为深入研究S100β联合嗅鞘细胞移植对周围神经损伤的修复作用奠定了基础。 展开更多

关键词 嗅鞘细胞 S100Β 炎症 凋亡

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大鼠中脑导水管周围灰质向下丘脑orexin神经元的纤维投射 被引量：1

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作者 韩怀钦 张博闻 +5 位作者 顾金海 赵奇 和祯泉 任双来 何仲义 牛建国 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期321-327,共7页

目的:明确中脑导水管周围灰质(PAG)神经元调节下丘脑orexin神经元的解剖学基础。方法:首先采用逆行示踪技术,将霍乱毒素B亚单位(CTb)作为逆行示踪剂注射到下丘脑orexin神经元胞体分布的区域,免疫组织化学方法染色观察PAG内CTb逆行标记... 目的:明确中脑导水管周围灰质(PAG)神经元调节下丘脑orexin神经元的解剖学基础。方法:首先采用逆行示踪技术,将霍乱毒素B亚单位(CTb)作为逆行示踪剂注射到下丘脑orexin神经元胞体分布的区域,免疫组织化学方法染色观察PAG内CTb逆行标记细胞的分布特点;接着采用顺行示踪技术和免疫组化相结合的方法,将生物素化葡聚糖胺(BDA)作为顺行示踪剂注射到PAG,观察下丘脑内BDA标记的神经纤维与orexin神经元的重叠分布特点;最后运用免疫电镜技术观察BDA标记轴突终末与orexin神经元之间的突触联系。结果:CTb注射到单侧下丘脑orexin神经元区域后,在PAG观察到大量CTb标记神经元,注射点同侧标记细胞数明显占优,其中PAG外侧区(lPAG)和腹外侧区(vlPAG)可见大量CTb逆标神经元,背外侧区(dlPAG)和背内侧区(dm PAG)可见少量标记神经元;注射点对侧lPAG及vlPAG区域也观察到少量CTb标记神经元。BDA注射到单侧lPAG后,下丘脑内双侧均可观察到BDA标记的神经纤维,但注射点同侧标记神经纤维数量明显占优。BDA标记纤维与orexin神经元胞体在穹窿背侧接近不定带(ZI)的区域(本文中将此区域称作"穹窿上区")形成显著的重叠分布。透射电镜下观察到BDA标记的轴突终末与orexin神经元之间形成突触联系,且多为非对称性类型。结论:lPAG投射到下丘脑的神经纤维在穹窿上区与orexin神经元形成优势重叠分布、并与orexin神经元的胞体或树突形成以非对称性为主的突触联系,提示orexin神经元可能在lPAG的直接支配下发挥其调节觉醒状态、摄食行为等功能。 展开更多

关键词 OREXIN 中脑水管周围灰质 下丘脑 突触联系 大鼠

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侧脑室注射NMDA受体激动剂后精神分裂症小鼠海马齿状回内NR1和BrdU的改变 被引量：1

9

作者 吕玥 肖培伦 +4 位作者 马全瑞 马江波 周惠惠 张潇剑 刘娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期54-58,共5页

目的:探讨精神分裂症(schizophrenia,SP)小鼠侧脑室注射N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体激动剂后,海马齿状回(dentate gyrus,DG)颗粒细胞层NR1和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数量的改变。方法:选择健康6周龄雄性C57小鼠,地卓西平马... 目的:探讨精神分裂症(schizophrenia,SP)小鼠侧脑室注射N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体激动剂后,海马齿状回(dentate gyrus,DG)颗粒细胞层NR1和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数量的改变。方法:选择健康6周龄雄性C57小鼠,地卓西平马来酸盐(MK-801)慢性给药制备精神分裂症动物模型,实验分为NMDA组、生理盐水组、SP组和空白对照组共四组,NMDA组侧脑室注射NMDA受体激动剂。BrdU标记后行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜下观察和计数DG颗粒细胞层NR1和BrdU阳性细胞的表达和数量变化。结果:(1)NR1阳性细胞数在NMDA组、空白对照组、SP组和生理盐水组分别为16.1±2.08,14.5±2.17,19.4±4.65,19.5±4.33,经比较,NMDA组和空白对照组NR1阳性细胞的数量明显少于SP组(P<0.05),但NMDA组与空白对照组相比无明显差异(P>0.05),SP组与生理盐水组相比也无明显差异(P>0.05)。(2)BrdU阳性细胞数在NMDA组、空白对照组、SP组和生理盐水组分别为5.2±2.53、5.3±0.82、3.4±1.58、3.5±1.35,经比较,NMDA组和空白对照组分别多于SP组(P<0.05),和生理盐水组(P<0.05);但NMDA组较空白对照组无明显差异(P>0.05),SP组较生理盐水组亦无明显差异(P>0.05)。结论:SP小鼠侧脑室注射NMDA受体激动剂后,可引起DG颗粒层NR1阳性细胞数减少和BrdU阳性神经细胞数的增多。 展开更多

关键词 精神分裂症 海马 NMDA NR1 BRDU 小鼠

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侧脑室注射NMDA对精神分裂症小鼠海马颗粒细胞层NMDA受体NR1亚基表达的调控 被引量：1

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作者 周惠惠 马全瑞 +3 位作者 李彦明 张姣 张潇剑 刘娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期327-331,共5页

目的:阐明N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(NR1)在精神分裂症小鼠海马CA1、CA3、DG区颗粒细胞层的表达及NMDA对其表达的调控作用。方法:将小鼠随机分为实验组、对照组及空白组,实验组每日连续腹腔注射MK-801(0.6 mg/kg)14 d后侧脑室注射NM... 目的:阐明N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(NR1)在精神分裂症小鼠海马CA1、CA3、DG区颗粒细胞层的表达及NMDA对其表达的调控作用。方法:将小鼠随机分为实验组、对照组及空白组,实验组每日连续腹腔注射MK-801(0.6 mg/kg)14 d后侧脑室注射NMDA 1次,72 h后取材,应用免疫荧光标记法检测各组小鼠海马CA1、CA3、DG区颗粒细胞层NR1阳性细胞的表达。结果:对照组小鼠DG区NR1阳性细胞的表达比实验组和空白组明显升高(P<0.05);在CA1区,实验组NR1的表达与对照组及空白组相比显著降低(P<0.05);在CA3区,对照组NR1的表达与空白组相比显著降低(P<0.05)。结论:(1)精神分裂症小鼠海马颗粒细胞层NR1阳性细胞的表达在DG区和CA1区显著升高,CA3区显著降低;(2)NMDA可调节精神分裂症小鼠海马结构颗粒细胞层NR1阳性细胞的表达趋于正常水平。 展开更多

关键词 精神分裂症 NR1 NMDA 海马 小鼠

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Iduna在Aβ诱导大鼠星型胶质细胞损伤中的作用 被引量：1

11

作者 丁娟 黄银 +4 位作者 王佳宁 丁敬宾 马小虎 王志军 刘娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期165-169,共5页

目的:脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积是阿尔茨海默病重要的病理特征。传统认为Aβ沉积能够诱导神经元凋亡。最近发现Aβ沉积同样能够诱导星型胶质细胞凋亡。Iduna是新近发现的内源性神经保护基因。本文的研究目的是探索Iduna在Aβ所致星... 目的:脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积是阿尔茨海默病重要的病理特征。传统认为Aβ沉积能够诱导神经元凋亡。最近发现Aβ沉积同样能够诱导星型胶质细胞凋亡。Iduna是新近发现的内源性神经保护基因。本文的研究目的是探索Iduna在Aβ所致星型胶质细胞损伤机制中的作用。方法:采用大鼠神经胶质瘤细胞株C6进行细胞培养,细胞密度达到80%时传代培养。细胞随机分为对照组和Aβ组,经MTT法、比色法、Western Blot等实验方法,检测Aβ所致C6细胞损伤时细胞培养上清中的超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和C6细胞中聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP1)通路内的Iduna蛋白的表达。结果:与对照组比较,Aβ组中Aβ能够增加C6细胞培养上清液中MDA含量,降低SOD活性;同时,Aβ可下调C6细胞中PARP1通路内的Iduna蛋白的表达。结论:Aβ引起星型胶质细胞损伤可能与神经保护因子Iduna下调从而引起PARP1死亡通路激活有关。 展开更多

关键词 星型胶质细胞 AΒ Iduna

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S100β基因修饰的大鼠嗅鞘细胞与脱细胞异种神经桥接体共培养体系的生物学特性研究 被引量：1

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作者 梁雪云 段昉 +3 位作者 王贺颖 贾桦 牛建国 何仲义 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期127-133,共7页

目的:通过观察S100β基因修饰的SD乳鼠嗅鞘细胞(OECs)在脱细胞异种神经桥接体(ANX)的黏附情况及分泌功能,研究S100β修饰的OECs与ANX共培养体系的生物学特性。方法:用表达S100β的重组慢病毒感染SD乳鼠的OECs (S100β-OECs),利用流式细... 目的:通过观察S100β基因修饰的SD乳鼠嗅鞘细胞(OECs)在脱细胞异种神经桥接体(ANX)的黏附情况及分泌功能,研究S100β修饰的OECs与ANX共培养体系的生物学特性。方法:用表达S100β的重组慢病毒感染SD乳鼠的OECs (S100β-OECs),利用流式细胞术检测细胞的感染效率;将感染成功的细胞注入通过化学萃取法制作的ANX内,通过扫描电镜及免疫荧光染色法观察各组OECs的黏附情况及分泌功能。结果:GFPOECs及S100β-OECs的感染效率分别为(73. 10±2. 69)%和(73. 50±4. 59)%;通过扫描电镜观察到ANX内原有细胞主要结构基本完全去除,仅保留了细胞的的基膜结构,GFP-OECs及S100β-OECs在ANX内沿基膜纵轴方向聚集生长;免疫荧光染色结果发现,生长在ANX上的OECs、GFP-OECs、S100β-OECs均表达NGF、BDNF等神经营养因子,且S100β-OECs组S100β蛋白表达高于其他两组(P <0. 05)。结论:S100β-OECs可稳定的过表达S100β蛋白,在S100β-OECs与ANX共培养体系中,S100β-OECs与ANX的生物相容性良好。 展开更多

关键词 S100Β 嗅鞘细胞 脱细胞异种神经桥接体 共培养

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慢病毒感染稳定过表达A2bAR基因的大鼠少突胶质前体细胞系的建立

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作者 陈小江 孙金萍 +5 位作者 刘娟 贺育青 尚彤 邵钰 秦毅 马全瑞 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期549-554,共6页

目的:旨在构建稳定高表达腺苷受体A2b(adenosine recepbor A2b,A2b AR)的SD大鼠少突胶质前体细胞体系(oligodendrocyte precursor cells,OPC),用于进一步探讨OPC上A2b AR的相关功能。方法:取对数生长期的大鼠OPC,用携带A2b AR基因的慢... 目的:旨在构建稳定高表达腺苷受体A2b(adenosine recepbor A2b,A2b AR)的SD大鼠少突胶质前体细胞体系(oligodendrocyte precursor cells,OPC),用于进一步探讨OPC上A2b AR的相关功能。方法:取对数生长期的大鼠OPC,用携带A2b AR基因的慢病毒进行感染,嘌呤霉素进行筛选纯化,依照慢病毒载体中的荧光标签蛋白,通过荧光显微镜和Western Blot检测OPC上A2b AR的表达。结果:慢病毒感染后,具有绿色荧光的OPC细胞比例不足5%,在给予嘌呤霉素连续处理6 d后,具有荧光标记的OPC比例趋于稳定,去除嘌呤霉素的干预后,细胞增殖明显,经传代培养,具有荧光标记的OPC比例高于80%,Western Blot结果显示A2b AR的表达明显上调。获得较高纯度的携带A2b AR高表达基因的OPC,可以冻存、复苏以及传代。结论:采用携带A2b AR基因的慢病毒载体,可以成功感染SD大鼠OPC,构建高表达A2b AR的OPC体系,为A2b AR在髓鞘发育与修复等方面的研究奠定基础。 展开更多

关键词 腺苷受体A2b 少突胶质前体细胞 慢病毒 大鼠

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阻断GABAa受体对精神分裂症小鼠认知能力和胼胝体髓鞘超微结构的影响 被引量：5

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作者 尚彤 刘娟 +4 位作者 陈小江 郭丽 邵钰 马全瑞 孙金萍 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期722-726,共5页

目的:探究GABAa受体阻断剂荷包牡丹碱(BIC)对精神分裂症(SP)模型小鼠认知能力和胼胝体髓鞘超微结构的作用。方法:雄性ICR小鼠21只,随机分为对照组、SP组和BIC处理组。连续腹腔注射MK-80114d制备精神分裂症小鼠模型,选取成功制备的小鼠... 目的:探究GABAa受体阻断剂荷包牡丹碱(BIC)对精神分裂症(SP)模型小鼠认知能力和胼胝体髓鞘超微结构的作用。方法:雄性ICR小鼠21只,随机分为对照组、SP组和BIC处理组。连续腹腔注射MK-80114d制备精神分裂症小鼠模型,选取成功制备的小鼠模型并腹腔注射BIC(1mg/kg/d)或者等量的生理盐水7d。利用Morris水迷宫检测小鼠认知能力变化,利用透射电子显微镜技术观察其胼胝体内髓鞘超微结构的改变。结果:小鼠腹腔注射MK-80114d后,定位航行实验结果显示:与对照组相比较,SP组逃避潜伏期时间明显延长(P<0.01),游泳总路程明显增加(P<0.01)。空间探索实验结果显示:与对照组相比较,SP组小鼠经过平台所在位置的次数明显减少(P<0.05)。精神分裂症模型小鼠腹腔注射BIC或生理盐水7d后,定位航行实验和空间探索实验结果显示:对照组与SP组相比较,各参数均无显著性差异(P>0.05);与SP组比较,BIC处理组在平台象限停留时间明显减少(P<0.05)。电镜实验结果显示:对照组小鼠胼胝体髓鞘结构致密、完整、规则,SP组胼胝体髓鞘呈现不同程度的松散、板层分离、崩解等病理改变;与SP组相比较,BIC处理组内髓鞘厚度不均匀、髓鞘轴索分离现象明显增多。结论:腹腔注射MK-801可诱导小鼠的学习记忆能力下降;阻断GABAa受体有增加精神分裂症小鼠记忆力损伤和胼胝体髓鞘超微结构损伤的趋势。 展开更多

关键词 GABAA受体 精神分裂症 荷包牡丹碱 髓鞘 小鼠

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基于CRISPR/Cas9技术AEG-1基因敲除神经细胞系的构建及AEG-1基因敲除介导的神经细胞周期阻滞和细胞凋亡抑制 被引量：2

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作者 王斌 刘昆梅 +6 位作者 郭乐 张春 和祯泉 丁娜 杨华 孙之鹏 王晓 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1201-1210,共10页

星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建s... 星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建sgRNA/Cas9二合一表达载体,并进行慢病毒包装纯化。用慢病毒感染小鼠海马神经元HT22细胞,进行药物筛选和sgRNA活性鉴定,建立稳定的AEG-1基因敲除的细胞系;并进一步观察神经元HT22细胞的增殖与凋亡能力。结果显示,成功构建了3种靶向AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体。所设计的sgRNA的插入序列和开放阅读框架完全正确,成功建立了AEG-1基因敲除的稳转神经细胞系。进一步研究表明,AEG-1敲除后的神经HT22细胞与正常神经HT22细胞相比,细胞突起数目减少,细胞周期阻滞,细胞凋亡率减少。以上结果为后续进一步研究AEG-1与神经系统疾病关系奠定了基础。 展开更多

关键词 星形胶质细胞上调基因-1 CRISPR/Cas9 HT22细胞 细胞周期 细胞凋亡

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川芎嗪抗糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤的转录组学研究 被引量：2

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作者 袁仕林 孙苗 +4 位作者 周玉佳 刘琼 常青 黑常春 杨笑 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1688-1698,共11页

目的基于全长转录组测序技术探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其机制。方法通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ,50 mg·kg^(-1))诱导大鼠D... 目的基于全长转录组测序技术探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其机制。方法通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ,50 mg·kg^(-1))诱导大鼠DM模型,使用双血管闭塞法(2-VO,10 min),再灌注16 h制备大鼠全脑I/R模型,TMP(40 mg·kg^(-1))每日腹腔注射。通过脑含水量检测、HE染色、尼氏染色、TUNEL染色评价TMP对DM大鼠脑I/R损伤的神经保护作用。全长转录组测序筛选差异表达基因,通过功能注释、代谢通路富集分析筛选TMP对DM大鼠发挥脑缺血保护作用的可能候选基因与代谢通路,并使用RT-qPCR、Western blot进行验证。结果TMP治疗可减轻DM大鼠脑I/R后的脑水肿程度,增加神经元、尼氏体数目,明显减少细胞坏死和凋亡。GO富集分析发现TMP治疗后差异表达基因主要富集在炎症反应、转录因子复合物、生长因子活性等生物学功能上。KEGG通路分析发现其主要富集于细胞凋亡、Toll样受体等信号通路上。其中,TMP下调的基因有TLR2、MyD88、IL-1β、Caspase-3等。RT-qPCR、Western blot结果进一步证实TMP下调TLR2、MyD88、NF-κB、IL-1β、IL-6、Caspase-3,并上调Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结论TMP可能通过抑制炎症反应减轻神经元凋亡从而改善DM大鼠脑I/R损伤,作用通路可能为TLR2/MyD88/NF-κB信号通路。 展开更多

关键词 川芎嗪 糖尿病 脑缺血/再灌注损伤 全长转录组测序 炎症反应 信号通路

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急性脱髓鞘对小鼠海马和大脑皮层中Nkx2.2的影响 被引量：2

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作者 吕昊文 邵钰 +3 位作者 马全瑞 何潜雄 刘强 刘娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期320-326,共7页

目的:探讨双环己酮草酰二腙(CPZ)诱导急性脱髓鞘后小鼠认知功能的改变,以及海马和大脑皮层中Nkx2.2同源域转录因子(Nkx2.2)的表达变化,并探讨两种变化之间的关系.方法:0.2%CPZ喂养ICR小鼠6周建立急性脱髓鞘模型.通过Morris水迷宫(MWM)... 目的:探讨双环己酮草酰二腙(CPZ)诱导急性脱髓鞘后小鼠认知功能的改变,以及海马和大脑皮层中Nkx2.2同源域转录因子(Nkx2.2)的表达变化,并探讨两种变化之间的关系.方法:0.2%CPZ喂养ICR小鼠6周建立急性脱髓鞘模型.通过Morris水迷宫(MWM)和悬尾实验(TST)检测CPZ介导的急性脱髓鞘后小鼠行为学的改变;Western Blot检测脱髓鞘后小鼠海马和大脑皮层中髓鞘碱性蛋白(MBP)和Nkx2.2蛋白的表达;免疫组织化学检测CPZ脱髓鞘后小鼠海马和大脑皮层中Nkx2.2的表达变化.结果:MWM和TST结果显示:与对照组小鼠相比,CPZ组小鼠MWM实验中的逃避潜伏期时间增加,穿越平台次数减少,TST的悬尾不动时间增加(P<0.05);Western Blot结果显示:CPZ组小鼠海马和大脑皮层中的MBP蛋白含量均明显低于对照组(P<0.05),Nkx2.2蛋白含量均明显高于对照组(P<0.05);免疫组织化学结果显示:CPZ组小鼠海马和大脑皮层中Nkx2.2的免疫阳性表达均高于对照组(P<0.05).结论:CPZ介导急性脱髓鞘后小鼠的认知功能下降,海马和大脑皮层中Nkx2.2的表达增加,提示Nkx2.2在脱髓鞘模型中的异常增加可能是导致小鼠认知功能下降的原因之一. 展开更多

关键词 脱髓鞘 Nkx2.2 海马 大脑皮层 小鼠

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瞬时受体电位M2抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧细胞的保护作用 被引量：1

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作者 黄卓群 余夏飞 +5 位作者 刘星宇 马康 黄敏华 李芳芳 杨巍 牛建国 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期106-112,共7页

目的:探讨瞬时受体电位M2(TRPM2)抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧(OGD/R)细胞模型的保护作用。方法:采用SH-SY5Y细胞系制备OGD/R损伤模型。将细胞随机分为空白对照组、模型对照组和A10组。细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;活性氧检测试剂... 目的:探讨瞬时受体电位M2(TRPM2)抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧(OGD/R)细胞模型的保护作用。方法:采用SH-SY5Y细胞系制备OGD/R损伤模型。将细胞随机分为空白对照组、模型对照组和A10组。细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧水平;四甲基罗丹明甲酯法检测线粒体膜电位;一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测凋亡细胞数量;蛋白质印迹法测定cleaved caspase 3蛋白表达。结果:相对于3、20、30、50和100μmol/L,10μmol/L浓度的A10具有较低的细胞毒性及较好的通道活性抑制作用。与模型对照组比较,A10组活性氧水平降低(P<0.05),线粒体膜电位降低程度改善(P<0.05),凋亡细胞数减少(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved caspase 3表达减少(P<0.05)。结论:A10可以通过抑制TRPM2通道功能、减少细胞外钙离子内流、降低细胞活性氧水平、稳定线粒体膜电位水平和减少细胞凋亡缓解OGD/R后细胞的损伤。 展开更多

关键词 瞬时受体电位M2通道 缺糖缺氧/复糖复氧 活性氧 线粒体膜电位 细胞凋亡 Cleaved caspase 3 SH-SY5Y细胞

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短暂性脑缺血对C57BL/6小鼠海马区神经发生的影响 被引量：1

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作者 孙文青 姚子昂 +4 位作者 金毅然 马海滨 牛建国 何仲义 梁雪云 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期175-183,共9页

目的:利用小鼠急性全脑缺血模型观察急性脑缺血对海马神经发生的影响。方法:将C57BL/6雄性小鼠(6~8周)随机分为脑缺血组和假手术组。采用双侧颈动脉结扎法建立短暂性全脑缺血模型;利用HE染色观察脑缺血后不同时间(1周,2周)海马区形态学... 目的:利用小鼠急性全脑缺血模型观察急性脑缺血对海马神经发生的影响。方法:将C57BL/6雄性小鼠(6~8周)随机分为脑缺血组和假手术组。采用双侧颈动脉结扎法建立短暂性全脑缺血模型;利用HE染色观察脑缺血后不同时间(1周,2周)海马区形态学变化;采用免疫组织荧光染色观察缺血后海马区caspase-3表达变化;利用Ed U染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区神经干细胞增殖变化;利用免疫组织荧光染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及少突胶质细胞特异蛋白(OSP)等蛋白表达变化,判断脑缺血对海马区神经干细胞分化的影响。结果:脑缺血7 d后,小鼠海马CA1区神经元数目减少,caspase-3阳性细胞增加(P<0.05)。海马DG区Ed U阳性细胞数量在第3 d开始增加(P<0.05),第1周达到峰值(P<0.05);海马CA1区Ed U阳性细胞数量在缺血后1周开始增加(P<0.05),缺血2周后逐渐降低。海马DG区nestin、GFAP及OSP阳性细胞数量均在缺血3 d后开始增加(P<0.05),缺血1周后达到峰值(P<0.05),2周后逐渐降低。海马CA1区GFAP及OSP阳性细胞数量在缺血3 d后开始增加(P<0.05),缺血1周后达到峰值(P<0.05),2周后逐渐降低。结论:脑缺血激活了海马DG区神经干细胞,使干细胞增殖,并向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化,同时逐渐向CA1区迁移。 展开更多

关键词 脑缺血 神经干细胞 神经发生 海马 神经干细胞分化

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环指蛋白146在Aβ诱导的C6细胞凋亡中的作用研究

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作者 黄银 魏慧玲 +5 位作者 王志军 司胜斌 张慧涛 王银 刘娟 丁娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期611-616,共6页

目的:探讨环指蛋白146(RNF146)在Aβ诱导C6细胞的凋亡过程中的作用。方法:大鼠神经胶质瘤细胞株C6细胞分为对照组(control)和Aβ处理组(Aβ)。Annexin V-EGFP/PI染色法检测细胞凋亡,Western Blot方法检测C6细胞中RNF146的表达和凋亡诱... 目的:探讨环指蛋白146(RNF146)在Aβ诱导C6细胞的凋亡过程中的作用。方法:大鼠神经胶质瘤细胞株C6细胞分为对照组(control)和Aβ处理组(Aβ)。Annexin V-EGFP/PI染色法检测细胞凋亡,Western Blot方法检测C6细胞中RNF146的表达和凋亡诱导因子(AIF)蛋白的表达和分布。结果:与对照组比较,Aβ处理能够促进细胞凋亡,同时减少细胞中RNF146的表达,并促进AIF核转位。结论:Aβ可导致C6细胞凋亡,其机制与RNF146表达下调并激活AIF核转位有关。 展开更多

关键词 Β-淀粉样肽 环指蛋白146 凋亡诱导因子 C6细胞

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