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LncRNA EFRL在同型半胱氨酸致动脉粥样硬化巨噬细胞胞葬中的作用及机制研究
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作者 杨佳琪 张正皓 +6 位作者 马芳 夏童童 刘虹麟 熊建团 马胜超 姜怡邓 郝银菊 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第7期577-584,共8页
目的探究胞葬作用相关长链非编码RNA(EFRL)在同型半胱氨酸(Hcy)致动脉粥样硬化(AS)巨噬细胞胞葬作用中的影响及其作用机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,设立对照组(0μmol/L Hcy)和Hcy干预组(100μmol/L Hcy),Hcy干预的巨噬细胞转染... 目的探究胞葬作用相关长链非编码RNA(EFRL)在同型半胱氨酸(Hcy)致动脉粥样硬化(AS)巨噬细胞胞葬作用中的影响及其作用机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,设立对照组(0μmol/L Hcy)和Hcy干预组(100μmol/L Hcy),Hcy干预的巨噬细胞转染锁核苷酸(GapmeR)后设置EFRL敲低阴性对照组(Hcy联合LNA-NC)和EFRL敲低组(Hcy联合LNA-EFRL);高通量测序获得差异性表达LncRNA MSTRG.88917.16(EFRL),基因组浏览器(UCSC)分析保守性,转录本蛋白编码潜能预测工具(CPC)和转录本蛋白编码能力预测软件(CPAT)分析编码蛋白能力,基因本体数据库(GO)和基因组破译方面的数据库(KEGG)分析相关生物学功能;核质分离法和RNA-FISH检测EFRL在巨噬细胞中定位;实时定量PCR检测Hcy干预的巨噬细胞中EFRL及靶基因遗传性痉挛性截瘫4型基因(SPAST)的表达水平;流式细胞术检测紫外线诱导的Jurkat细胞凋亡率;免疫荧光技术结合体外巨噬细胞胞葬实验分析巨噬细胞胞葬作用;ELISA检测炎症相关因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18含量。结果鉴定新的LncRNA MSTRG.88917.16并命名为EFRL(Efferocytosis Relatived LncRNA,胞葬作用相关长链非编码RNA);UCSC、CPC、CPAT明确EFRL保守性高且不具备编码蛋白能力,GO、KEGG功能富集分析显示EFRL可能参与巨噬细胞胞葬作用;核质分离法和RNA-FISH检测EFRL定位于巨噬细胞细胞核;与对照组相比,Hcy组中EFRL及靶基因SPAST表达水平增高;与对照组(0 min)相比较,实验组(15、30 min)凋亡率Annexin V>85%;与Hcy联合LNA-NC组相比,Hcy联合LNA-EFRL组中巨噬细胞胞葬作用增强,介导的炎症因子含量降低;与Hcy联合LNA-NC组相比,Hcy联合LNA-EFRL组中SPAST表达水平降低。结论降低EFRL的表达能够缓解Hcy抑制巨噬细胞胞葬作用的过程,其机制与EFRL调控下游靶基因SPAST有关。 展开更多
关键词 胞葬作用 同型半胱氨酸(Hcy) 动脉粥样硬化(AS) 长链非编码RNA
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SULT2B1影响小鼠Hepa1-6肝癌细胞的HIF-1α,糖酵解及血管新生
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作者 杨晓明 李晓波 殷莲华 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期653-660,共8页
目的研究羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1对小鼠Hepa1-6肝癌细胞HIF-1α、糖酵解及血管新生能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法分别用SULT2B1过表达及干扰载体感染Hepa1-6细胞,采用Real-time PCR和Western blot检测过表达/干扰SULT... 目的研究羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1对小鼠Hepa1-6肝癌细胞HIF-1α、糖酵解及血管新生能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法分别用SULT2B1过表达及干扰载体感染Hepa1-6细胞,采用Real-time PCR和Western blot检测过表达/干扰SULT2B1对HIF-1α表达水平的影响,同时检测糖酵解相关基因HK-Ⅱ和LDH的mRNA表达水平。CCK-8法检测干扰SULT2B1的肿瘤条件培养基(tumor conditioned medium,TCM)对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3增殖能力的影响,并检测VEGF的mRNA表达水平。建立Hepa1-6细胞裸鼠移植瘤模型,免疫组化染色检测裸鼠瘤组织中CD34的表达水平。结果过表达/干扰SULT2B1可分别上调/下调HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平,且干扰SULT2B1可使HK-Ⅱ和LDH的mRNA表达水平降低,过表达发生相反的变化(P<0.05)。干扰SULT2B1的TCM可抑制bEnd.3细胞的增殖能力,并降低VEGF的mRNA表达水平(P<0.05)。同时,干扰SULT2B1可降低Hepa1-6细胞移植瘤在裸鼠体内的生长并降低瘤组织中的微血管密度(P<0.05)。结论干扰SULT2B1可抑制Hepa1-6细胞的糖酵解及血管新生能力,其作用主要与下调HIF-1α、HK-Ⅱ、LDH及VEGF的表达水平有关。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 羟基类固醇硫酸基转移酶SULT2B1 HIF-1Α 糖酵解 血管新生 小鼠
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Intermedin_(1-53)对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响
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作者 薛立华 梁颖 +2 位作者 宋君秋 齐永芬 贾月霞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2056-2060,共5页
目的:研究intermedin1-53(IMD1-53)对醛固酮(ALD)促SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFBs)增殖的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导途径的作用。方法:分离培养SD乳鼠CFBs,将细胞分成对照组、不同浓度ALD组、ALD+不同浓度IMD1-53组,用MTT比色... 目的:研究intermedin1-53(IMD1-53)对醛固酮(ALD)促SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFBs)增殖的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导途径的作用。方法:分离培养SD乳鼠CFBs,将细胞分成对照组、不同浓度ALD组、ALD+不同浓度IMD1-53组,用MTT比色法测定细胞活性。通过Western blotting方法观察IMD1-53对ALD诱导的p-ERK蛋白表达的影响。结果:(1)IMD1-53对基础状态下的CFBs增殖无明显抑制作用,但能呈浓度(10-9~10-7mol/L)依赖性地抑制ALD刺激CFBs的增殖。(2)IMD1-53具有浓度(10-9~10-7mol/L)依赖性地抑制ALD诱导的p-ERK蛋白表达的作用。结论:IMD1-53通过ERK信号途径抑制ALD促CFBs增殖的效应。 展开更多
关键词 Intermedin1-53 心肌成纤维细胞 醛固酮 ERK通路
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同型半胱氨酸通过激活beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)促进人肝细胞自噬 被引量:1
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作者 马芳 张辉 +6 位作者 沈江涌 马胜超 万瑀 贺茜 焦运 王强 姜怡邓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期813-818,共6页
目的探讨beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)在同型半胱氨酸(Hcy)引起肝细胞自噬中的作用。方法体外培养肝细胞,分为对照组(0μmol/L Hcy处理)和100μmol/L Hcy处理组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3BⅡ、LC3... 目的探讨beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)在同型半胱氨酸(Hcy)引起肝细胞自噬中的作用。方法体外培养肝细胞,分为对照组(0μmol/L Hcy处理)和100μmol/L Hcy处理组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3BⅡ、LC3BⅠ)的表达水平;使用(0、25、50、100)μmol/L氯喹(CQ)处理肝细胞,CCK-8法检测CQ对肝细胞增殖的抑制作用,Western blot法检测LC3B和AMBRA1的表达;采用AMBRA1小干扰RNA感染肝细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot法检测肝细胞AMBRA1表达干扰效率。敲低AMBRA1后肝细胞用Hcy处理,Western blot法检测LC3B蛋白表达水平,转染表达双荧光蛋白和LC3的腺病毒(mRFP-GFP-LC3),激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬流的变化。结果与对照组相比较,Hcy处理组LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值升高;50μmol/L CQ对肝细胞增殖的抑制率接近于50%;与对照组相比,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、AMBRA1的表达明显升高,而Hcy联合CQ组的LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、AMBRA1的表达比Hcy组明显降低;敲低AMBRA1后,肝细胞LC3BⅡ/LC3BⅠ比值下降;与对照组相比,Hcy组自噬体和自噬溶酶体增加,敲低AMBRA1后,自噬体和自噬溶酶体减少。结论Hcy可通过激活AMBRA1促进肝细胞自噬。 展开更多
关键词 同型半胱氨酸(Hcy) 自噬 beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)
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浸润性乳腺癌组织肝配蛋白A型受体2(EphA2)高表达且与细胞焦亡负相关 被引量:2
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作者 刘昆 吴立刚 +6 位作者 揭育祯 纳莉 张晴 田荣 李桂忠 卢冠军 马胜超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期981-986,共6页
目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶... 目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测45例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中EphA2表达情况;用Pearson相关系数对患者癌组织EphA2的蛋白表达与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β进行相关性分析。结果与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组中NLRP3、caspase-1、IL-1β和ICAM-1的蛋白表达水平明显降低,EphA2蛋白表达明显升高;EphA2水平与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β均呈负相关性。结论乳腺癌组织EphA2高表达,且与细胞焦亡呈负相关。 展开更多
关键词 乳腺癌 细胞焦亡(pyroptosis) 炎性体 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 肝配蛋白A型受体2(EphA2)
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