嗜肺军团菌抑制小鼠巨噬细胞内体溶酶体融合的机制探讨

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作者 陈民佳 曹秀琴 +2 位作者 贺瑞霞 陈海霞 杨志伟 《解放军医学杂志》 北大核心 2025年第2期176-187,共12页

目的探究嗜肺军团菌感染抑制小鼠巨噬细胞内体溶酶体融合的相关致病机制。方法将12只C57BL/6J小鼠随机分为对照组与嗜肺军团菌感染组(n=6),麻醉后经鼻分别滴入相同体积的生理盐水或嗜肺军团菌液;连续3 d记录体重变化,取出整肺观察其伤情... 目的探究嗜肺军团菌感染抑制小鼠巨噬细胞内体溶酶体融合的相关致病机制。方法将12只C57BL/6J小鼠随机分为对照组与嗜肺军团菌感染组(n=6),麻醉后经鼻分别滴入相同体积的生理盐水或嗜肺军团菌液;连续3 d记录体重变化,取出整肺观察其伤情,HE和免疫组化染色观察小鼠肺组织病理特征;转录组测序分析肺组织中的差异表达基因(DEGs)和相关信号通路。提取小鼠骨髓巨噬细胞(BMDMs),与嗜肺军团菌共培养,采用免疫荧光染色鉴定感染情况,转录组测序分析感染前后的DEGs和富集的相关信号通路。筛选感染后共同参与信号通路的核心基因,用RT-qPCR验证核心基因mRNA表达水平在体内外的一致性,Western blotting检测相关蛋白的表达情况,细菌繁殖实验检测嗜肺军团菌在细胞内的繁殖情况。结果与对照组比较,感染后2 d、3 d,嗜肺军团菌感染组小鼠体重明显下降(P<0.001),左右肺组织水肿并呈红色肝样变,病变区域由肺门向肺周边蔓延;HE染色显示嗜肺军团菌感染组小鼠肺泡腔炎性细胞浸润增多、肺泡间隔增厚、纤维蛋白渗出增多;免疫组化检测结果显示,嗜肺军团菌感染组小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)阳性面积百分比明显增高(P<0.001);转录组测序共筛选出DEGs 2550个,其中上调基因1444个,下调基因1106个;KEGG富集分析显示,富集通路主要涉及肿瘤坏死因子、类风湿关节炎、Rap1、PI3K-Ak和吞噬体通路等。免疫荧光检测结果显示,嗜肺军团菌在体外小鼠BMDMs内增殖;转录组测序筛选出DEGs 2550个,其中上调基因1677个,下调基因873个;KEGG富集分析显示,富集通路涉及癌症中的转录失调、PI3K-Akt和吞噬体通路等。筛选出富集在吞噬反应集群中的DEGs,得到小鼠肺组织和BMDMs重叠的微管蛋白β1(Tubb1)等13个核心基因。RT-qPCR检测结果显示,小鼠肺组织和BMDMs感染嗜肺军团菌后,Tubb1表达水平均明显降低(P<0.001);Western blotting检测结果显示,Rab7、Tubb1、LAMP2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和MPO表达水平明显增高(P<0.05)。胞内增殖实验结果显示,随着感染时间增加,BMDMs中的嗜肺军团菌逐渐增多。结论嗜肺军团菌感染小鼠巨噬细胞的可能机制是下调Rab7/Tubb1/LAMP2,抑制内体溶酶体的融合。 展开更多

关键词 嗜肺军团菌 微管蛋白β1 内体溶酶体融合 转录组测序 巨噬细胞

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SLC11A1基因多态性与宁夏南部人群肺结核易感性研究 被引量：2

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作者 朱圭娜 侯怀哲 +9 位作者 尹媛婕 陈丹丹 Ellis K. Magda 关光玉 杨书鲲 杨延辉 Donald P. McManus 景永峰 王平 杨玉荣 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第10期1080-1087,共8页

目的 探索SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865等位点多态性与中国宁夏回族自治区南部人群肺结核易感性的关系.方法 于2010年7-11月选取宁夏回族自治区南部的西吉、海原、泾原、彭阳、原州、同心、中卫、隆德等8个地区,并在... 目的 探索SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865等位点多态性与中国宁夏回族自治区南部人群肺结核易感性的关系.方法 于2010年7-11月选取宁夏回族自治区南部的西吉、海原、泾原、彭阳、原州、同心、中卫、隆德等8个地区,并在该地区居住10年以上,且经当地疾病预防控制中心确诊为活动性肺结核的患者作为观察组,共965例.同期选取上述地区的健康人群作为对照组,共897名.收集研究对象基本信息,采集研究对象外周静脉血5 ml,应用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝,-80℃保存,用于提取基因组DNA.利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法对SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865位点进行基因分型,分析3个单核苷酸多态性（SNP）位点与结核易感性的关系.结果 rs17235409位点AA、AG、GG基因型在观察组和对照组中分布频率分别为1.4％（13/950）、23.5％（223/950）、75.1％（714/950）和2.7％ （23/842）、25.1％（211/842）、72.2％（608/842）,两组比较差异无统计学意义（x2=5.12,P=0.077）;rs17235416位点TGTG（-）/（-）、TGTG（＋）/（-）、TGTG（＋）/（＋）基因型在观察组和对照组中的分布频率分别为1.8％（17/939）、22.7％（213/939）、75.5％（709/939）和3.4％（28/824）、23.8％（196/824）、72.8％（600/824）,两组比较差异无统计学意义（x2=4.99,P=0.082）;rs3731865位点CC、GC、GG基因型在观察组和对照组中分布频率分别为2.3％（22/951）、26.1％（248/951）、71.6％（681/951）和2.4％（20/843）、24.9％（210/843）、72.7％（613/843）,两组比较差异无统计学意义（x2 =0.32,P=0.852）.在隐性模型中,rs17235409位点AA、AG＋ GG-基因型在观察组和对照组中分布频率分别为1.4％（13/950）、98.6％（937/950）和2.7％（23/842）、97.3％（819/842）,两组分布频率比较差异有统计学意义（x2=4.21,P=0.040）;但多因素logistic回归分析结果与单因素结果不-致,说明条件因素包括性别、年龄、民族等不同对结果有一定影响,所以不能说明rs17235409位点与肺结核发病相关（OR=0.51,95％CI=0.25～1.03,P=0.060）.rs17235416位点TGTG（-）/（-）、TGTG（＋）/（-）＋TGTG（＋）/（＋）基因型在观察组和对照组中分布频率分别为1.8％（17/939）、98.2％（922/939）和3.4％（28/824）、96.6％（796/824）,两组分布频率比较差异有统计学意义（x2 =4.45,P=0.038,OR=0.52、1.91,95％CI=0.23～0.97、1.04～3.51）;经多因素logistic回归分析,排除性别、年龄和民族等条件因素对结果的影响,多因素结果与单因素结果相似,发现条件因素对结果无影响,结果仍有意义,说明携带rs17235416位点TGTG（＋）/（-）和（或）TGTG（＋）/（＋）基因型的个体较携带TGTG（-）/（-）基因型的个体患肺结核的风险增加（OR=0.54,95％CI：0.29～1.00,P=0.049）.结论 SLC11A1基因rs17235409和rs3731865位点多态性与宁夏南部地区人群肺结核易感性不相关.而rs17235416位点在隐性模型中,即携带TGTG（＋）/（-）与TGTG（＋）/（＋）基因型的个体发病风险增高. 展开更多

关键词 结核 肺 多态性 单核苷酸 疾病易感性 病例对照研究

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嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用 被引量：3

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作者 刘黎 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期577-580,共4页

目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG/I... 目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG/IgM/IgA的ELISA检测试剂盒筛出40份阳性血清和30份阴性血清,用纯化的MIP蛋白建立间接ELISA,同时与R&D的ELISA IgG、IgM、IgA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后对这两种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性,来评价该方法的应用价值。结果诱导相对分子质量(Mr)大约40 000的MIP融合蛋白在E.coli BL21中表达并纯化。纯化蛋白建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与国外ELISA试剂盒(R&D)进行比较,IgG抗体的灵敏度88.5%,特异度95.5%,一致性Kappa值0.846(P<0.05),ROC曲线下面积0.927。IgM抗体的灵敏度89.3%,特异度97.6%,一致性Kappa值0.88(P<0.05),ROC曲线下面积0.947。IgA抗体的灵敏度90%,特异度95.2%,一致性Kappa值0.856(P<0.05),ROC曲线下面积0.931。结论成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化,运用MIP作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值。 展开更多

关键词 嗜肺军团菌 巨噬细胞感染增强蛋白 蛋白表达 血清学诊断

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X射线对胃癌细胞和人脐静脉内皮细胞LOX家族成员的不同影响 被引量：1

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作者 王欣怡 牛海亚 +5 位作者 邓红 杨新燕 刘一凡 王凯博 徐传皓 韩梅 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第1期7-13,共7页

目的比较不同剂量X射线对人低分化粘液样胃腺癌细胞MGC-803和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)赖氨酰氧化酶(LOX)家族成员的影响,为了解X射线辐射后不同细胞中基因和蛋白的改变提供依据。方法0、2、4、6、8和10 Gy剂量X射线辐射MGC-803和HUVEC细... 目的比较不同剂量X射线对人低分化粘液样胃腺癌细胞MGC-803和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)赖氨酰氧化酶(LOX)家族成员的影响,为了解X射线辐射后不同细胞中基因和蛋白的改变提供依据。方法0、2、4、6、8和10 Gy剂量X射线辐射MGC-803和HUVEC细胞,用细胞增殖实验检测细胞致死率并计算细胞半数致死量(LD 50),确定后序测试剂量组;Realtime PCR、Western blot、ELISA及Amplex Red过氧化氢法分别检测辐射后细胞LOX家族成员mRNA丰度、蛋白相对量、分泌量及LOX酶活性变化;Western blot方法分析X射线辐射对细胞p-p38MAPK和p-Erk1/2MAPK影响。结果X射线辐射后的LD 50胃癌MGC-803为8.2 Gy,HUVEC为6 Gy,后序试验选用0、2、4和6 Gy剂量组。MGC-803细胞经各剂量X射线辐射后LOXL1、LOXL2和LOXL4的mRNA均下调,而LOX的mRNA上调(P<0.05);2 Gy组LOX和LOXL4的蛋白和酶分泌水平低于0 Gy组(P<0.05);4 Gy组LOX、LOXL1、LOXL2和LOXL4的蛋白和分泌低于0 Gy组(P<0.05);6 Gy组LOXL1的蛋白和分泌低于0 Gy组(P<0.05);但LOXL3的mRNA、蛋白和分泌在2 Gy组均高于0 Gy组(P<0.05)。HUVEC中,2 Gy组LOXL1和LOXL3的mRNA、蛋白和酶分泌水平均显著高于0 Gy组(P<0.05);4 Gy组LOX、LOXL1、LOXL3和LOXL4的mRNA、蛋白和酶分泌水平均较0 Gy组升高(P<0.05);6 Gy组LOXL2和LOXL4的mRNA、蛋白和酶分泌水平均较0 Gy组升高(P<0.05)。2 Gy和6 Gy组HUVEC的LOX酶活性增强(P<0.05)。MGC-803细胞的2 Gy和6 Gy组p-p38、p-p42、p-p44较0 Gy组上调(P<0.05);HUVEC经各剂量辐射p-p38、p-p42和p-p44均上调(P<0.05)。结论X射线辐射对两种细胞作用不同,一定剂量X射线辐射上调HUVEC的LOX及其家族成员的产生、分泌和酶活性,下调胃癌细胞MGC-803的除LOXL3外其他成员的产生和分泌。 展开更多

关键词 X射线 赖氨酰氧化酶家族 人脐静脉内皮细胞 胃癌细胞 MAPK信号通路

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上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能 被引量：4

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作者 郑修军 王琦 +1 位作者 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1022-1026,共5页

目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表... 目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/m L。巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关。巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关。结论调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能。 展开更多

关键词 FcγRⅡB 慢病毒诱导表达载体 抑制性受体 巨噬细胞 吞噬和趋化

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菊粉增加非酒精性脂肪肝病小鼠外周血、肝脏及脾脏单核细胞型髓源性抑制细胞比例并调节炎症因子的分泌 被引量：8

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作者 鲍婷 王振 +6 位作者 朱丽丽 卢海霞 汪婷 张艳婷 张晓霞 王浩 杨少奇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期228-235,共8页

目的探讨菊粉(INU)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠单核细胞型髓源性抑制细胞(M-MDSC)和血浆炎症因子的影响。方法C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组、INU对照组、NAFLD模型组和INU处理的NAFLD模型组。正常饮食组和INU对照组给予普通饲料,NA... 目的探讨菊粉(INU)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠单核细胞型髓源性抑制细胞(M-MDSC)和血浆炎症因子的影响。方法C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组、INU对照组、NAFLD模型组和INU处理的NAFLD模型组。正常饮食组和INU对照组给予普通饲料,NAFLD模型组和INU处理的NAFLD模型组给予高脂饲料(含60%脂肪)。同时INU对照组和INU处理的NAFLD模型组给予INU(5 g/kg),喂养14周后,处死小鼠并收集小鼠外周血、肝脏和脾脏细胞。采用流式细胞术检测外周血、肝脏和脾脏中M-MDSC比例。细胞因子流式微球阵列检测技术(CBA)检测血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)表达水平。Pearson统计分析各组织M-MDSC比例和血浆炎症因子水平的相关性。结果与正常饮食组相比,NAFLD模型组外周血、肝脏和脾脏中M-MDSC的比例明显增加,血浆中TNF-α水平显著升高,IL-10水平变化不明显。与NAFLD模型组相比,INU处理的NAFLD模型组外周血、肝脏和脾脏中M-MDSC的比例明显增加,TNF-α水平显著降低、IL-10水平显著升高。NAFLD小鼠外周血、肝脏及脾脏中M-MDSC分别与TNF-α呈负相关,与IL-10呈正相关。结论INU可募集NAFLD小鼠外周血、肝脏及脾脏中M-MDSC,发挥抗炎作用,延缓NAFLD的发生发展。 展开更多

关键词 非酒精性脂肪肝病(NAFLD) 单核细胞型髓源性抑制细胞(M-MDSC) 炎症因子 菊粉(INU)

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人可溶型FcγRIIb的制备及其功能初步研究 被引量：3

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作者 张雷 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期952-955,共4页

目的:检测正常人和SLE患者血清中可溶型FcγRIIb(husFcγRIIb)含量,诱导表达并纯化人可溶性FcγRIIb,检测其与血清中免疫复合物结合力及对B细胞抗体分泌功能的影响。方法:ELISA法检测人血清中可溶型FcγRIIb含量,IPTG诱导含有pET-sFcγR... 目的:检测正常人和SLE患者血清中可溶型FcγRIIb(husFcγRIIb)含量,诱导表达并纯化人可溶性FcγRIIb,检测其与血清中免疫复合物结合力及对B细胞抗体分泌功能的影响。方法:ELISA法检测人血清中可溶型FcγRIIb含量,IPTG诱导含有pET-sFcγRIIb的大肠杆菌BL21,镍琼脂糖磁珠纯化目的蛋白,可溶型FcγRIIb包被ELISA板,ELISA方法检测其与血清中免疫复合物结合能力,免疫磁珠法分选B细胞,分组刺激培养,ELISA检测培养物上清中IgM含量。结果:SLE患者血清中可溶型FcγRIIb浓度低于正常人(P<0.05);诱导表达并纯化获得相对分子质量(Mr)为41 500的重组蛋白;重组可溶型FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,二者孵育后吸光度(A)值随血清中免疫复合物浓度逐渐增高,至受体结合度饱和时达最大;不同刺激条件下B细胞培养10 d,各实验组抗体浓度均高于细胞对照组(P<0.01),SPA组、SPA+husFcγRIIb组抗体浓度无显著差异(P﹥0.05),SPA+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显高于SPA组(P<0.01),SPA+husFcγRIIb+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显低于SPA+IgG型抗人IgM组(P<0.01)、SPA组(P<0.01)和SPA+husFcγRIIb组(P<0.01)。结论:SLE患者血清中可溶性FcγRIIb含量低于正常人,重组人可溶性FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,抑制免疫复合物对B淋巴细胞的激活,减少IgM型抗体的分泌。 展开更多

关键词 FCΓRIIB 可溶性 结合力 抗体分泌

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黄芩苷调节let-7i-3p/PI3K/Akt/NF-κB信号轴减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞NLRP3炎性小体活化 被引量：14

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作者 张炜 王莉 +4 位作者 杨雨欣 马锐 王丽 黄菱 万巧凤 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2313-2319,共7页

目的研究黄芩苷减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast like synoviocytes of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)NLRP3炎性小体活化的作用及机制。方法为证实黄芩苷减轻HFLS-RA中NLRP3炎性小体活化,采用免疫荧光观察黄芩苷处... 目的研究黄芩苷减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast like synoviocytes of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)NLRP3炎性小体活化的作用及机制。方法为证实黄芩苷减轻HFLS-RA中NLRP3炎性小体活化,采用免疫荧光观察黄芩苷处理前后NLRP3的表达;Western blot检测黄芩苷处理48 h后,p-PI3K、p-Akt、NF-κB p65、NLRP3、ASC及caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞上清中IL-1及IL-18的含量。为探究黄芩苷减轻NLRP3炎性小体活化的机制,采用双荧光素酶及Western blot验证let-7i-3p与PIK3CA的对应关系;RT-qPCR检测黄芩苷干预前后let-7i-3p及PI3K的表达;采用let-7i-3p干扰,验证黄芩苷是否减轻了增强的NLRP3炎性小体的活化。结果50、100 mg·L^(-1)黄芩苷明显减轻了NLRP3炎性小体的活化,抑制p-PI3K、p-Akt、NF-κB p65、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白的表达,抑制IL-1、IL-18的分泌。let-7i-3p与PIK3CA存在靶向对应关系,黄芩苷上调了let-7i-3p的表达、下调了PIK3CA的表达;黄芩苷减轻了因let-7i-3p干扰而增强的NLRP3炎性小体的活化。结论黄芩苷经上调let-7i-3p表达、抑制PI3K/Akt/NF-κB信号转导,从而减轻NLRP3炎性小体的活化。 展开更多

关键词 黄芩苷 类风湿关节炎 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 NLRP3炎性小体 miRNA 双荧光素酶

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含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达 被引量：2

9

作者 刘慧宇 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期561-564,568,共5页

目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导... 目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表达病毒滴度达106TU/mL,可诱导病毒滴度达105TU/mL,感染性良好。HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关。结论成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达。 展开更多

关键词 FcγRⅡB 慢病毒诱导表达载体 调控表达

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重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白A(rflaA)体外诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞分泌IL-6和IL-1β 被引量：3

10

作者 佳莉娟 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期601-605,共5页

目的探讨重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白A(rflaA)对RAW264.7巨噬细胞分泌白细胞介素6(IL-6)、IL-1β的影响及其机制。方法采用(0.000、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞,并设细胞对照组,用CCK-8... 目的探讨重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白A(rflaA)对RAW264.7巨噬细胞分泌白细胞介素6(IL-6)、IL-1β的影响及其机制。方法采用(0.000、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞,并设细胞对照组,用CCK-8法确定rflaA的半数效应剂量(EC_(50))。采用(0.04、0.08、0.16)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞24、36、48 h,采用ELISA检测IL-6、IL-1β分泌水平;(0.04、0.08、0.16)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞6、12、24、36、48 h,收集细胞,实时定量PCR检测IL-6、IL-1β、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)mRNA的含量;Western blot法检测NLRP3、caspase-1蛋白水平。结果 rflaA可促进RAW264.7细胞因子分泌,RAW264.7细胞被不同剂量的rflaA作用24、36、48 h,随rflaA剂量的递增,IL-6、IL-1β水平增加,以0.16μg/mL剂量时作用最显著,36 h达高峰;rflaA可增加RAW264.7细胞的IL-6、IL-1β、NLRP3、caspase-1 RNA水平,0.16μg/mL rflaA作用最显著,12 h达高峰;RAW264.7细胞被不同剂量的rflaA作用6、12、24、36 h,随rflaA剂量增加NLRP3、caspase-1表达水平增加,以0.16μg/mL剂量时作用最显著,24 h达高峰。结论 rflaA通过刺激NLRP3、caspase-1而增加RAW264.7细胞IL-6、IL-1β的分泌。 展开更多

关键词 嗜肺军团菌 重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白(rflaA) 巨噬细胞 细胞因子

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化疗可增加肺鳞状细胞癌患者外周血中FcγRⅡB含量 被引量：1

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作者 卢敬敬 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期220-224,共5页

目的检测肺鳞状细胞癌患者化疗前后外周血单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB表达水平、血清中可溶性FcγRⅡB(s FcγRⅡB)及其抗体的含量。方法免疫荧光技术检测鳞状细胞癌患者化疗前后单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB的表达和定位、实时定... 目的检测肺鳞状细胞癌患者化疗前后外周血单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB表达水平、血清中可溶性FcγRⅡB(s FcγRⅡB)及其抗体的含量。方法免疫荧光技术检测鳞状细胞癌患者化疗前后单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB的表达和定位、实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA水平,Western blot法检测s FcγRⅡB蛋白水平;ELISA检测鳞状细胞癌患者化疗前后、健康人血清中s FcγRⅡB总量、与Ig G结合的s FcγRⅡB(s FcγRⅡB-Ig G)、抗FcγRⅡB自身抗体的含量变化。结果与健康人相比,鳞状细胞癌患者化疗前单核细胞和B细胞FcγRⅡB的水平、s FcγRⅡB总量及抗FcγRⅡB自身抗体的含量明显降低,化疗后高于化疗前;s FcγRⅡB-Ig G含量高于健康人,化疗后低于化疗前。结论鳞状细胞癌患者FcγRⅡB含量减少,化疗后FcγRⅡB表达有所增加。 展开更多

关键词 鳞状细胞癌 FcγRⅡB B细胞 单核细胞

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磷脂酰肌醇3激酶β(PI3Kβ)和PI3Kδ在KIT突变介导的细胞转化中起不同作用 被引量：2

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作者 张少婷 朱光荣 +5 位作者 石君 杨继辉 蒋宗英 张良颖 窦凯凯 孙建民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期39-46,共8页

目的探究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的不同亚型在三型酪氨酸激酶受体KIT突变介导的信号传递及细胞增殖中的作用。方法在BaF3细胞中稳定表达野生型KIT及胃肠间质瘤中常见的KIT突变V560D、 W557K558del,分别用PI3Kα、 PI3Kβ、 PI3Kδ亚型特... 目的探究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的不同亚型在三型酪氨酸激酶受体KIT突变介导的信号传递及细胞增殖中的作用。方法在BaF3细胞中稳定表达野生型KIT及胃肠间质瘤中常见的KIT突变V560D、 W557K558del,分别用PI3Kα、 PI3Kβ、 PI3Kδ亚型特异性抑制剂或者广谱PI3K抑制剂处理细胞,免疫沉淀法和Western blot法检测KIT及其下游信号活化情况。胃肠间质瘤GIST-T1细胞采用相同药物及浓度处理,免疫共沉淀和Western blot法检测KIT及其下游信号的活化情况,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,在表达野生型KIT及其突变体的BaF3细胞中, PI3Kδ亚型特异性抑制剂对KIT及其下游信号分子蛋白激酶B(AKT)和胞外信号调节激酶(ERK)活化的抑制作用最强,其次为PI3Kα和PI3Kβ亚型特异性抑制剂。在GIST-T1细胞中, PI3Kβ亚型特异性抑制剂对KIT及其下游信号活化的抑制作用最强,其次为PI3Kδ和PI3Kα亚型特异性抑制剂。结论在BaF3细胞中, PI3Kδ亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用,而在GIST-T1细胞中, PI3Kβ亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用,这些结果表明不同PI3K亚型在KIT突变介导的细胞转化中起不同作用,且在不同的细胞中其作用也有不同。 展开更多

关键词 胃肠间质瘤(GIST) 三型酪氨酸激酶受体 KIT 磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)

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