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上调小鼠骨髓来源树突状细胞FcγRⅡb表达可抑制其抗原提呈功能 被引量:2
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作者 孙卉 马海峰 +1 位作者 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期664-667,671,共5页
目的构建FcγRⅡb慢病毒载体,感染小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),观察BMDC抗原提呈功能变化。方法小鼠骨髓细胞中提取RNA,反转录后进行PCR扩增得到FcγRⅡb目的基因,将FcγRⅡb基因插入慢病毒表达载体TRE中构建FcγRⅡb重组慢病毒载体。... 目的构建FcγRⅡb慢病毒载体,感染小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),观察BMDC抗原提呈功能变化。方法小鼠骨髓细胞中提取RNA,反转录后进行PCR扩增得到FcγRⅡb目的基因,将FcγRⅡb基因插入慢病毒表达载体TRE中构建FcγRⅡb重组慢病毒载体。HEK293T细胞包装慢病毒,体外进行小鼠BMDC的诱导培养及鉴定。将慢病毒感染BMDC后,实时定量PCR检测BMDC中FcγRⅡb mRNA水平,Western blot法检测BMDC中FcγRⅡb蛋白水平,流式细胞术分析BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的变化。结果成功构建FcγRⅡb重组慢病毒载体,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定成功。体外诱导培养BMDC,可见细胞表面大量树枝样突起形成。包装慢病毒感染BMDC后,FcγRⅡb mRNA和蛋白水平均较未感染BMDC增高。流式细胞术分析感染后BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHC II的表达量均较未感染BMDC下降。结论DC上FcγRⅡb的过表达能够下调其抗原提呈功能。 展开更多
关键词 FcγRⅡb 慢病毒 树突状细胞
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