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小鼠Ccr2基因真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立
被引量：
1
1
作者
赵薇
芦晓红
裴秀英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1214-1216,1219,共4页
目的:构建小鼠Ccr2基因真核表达载体,转染RAW264.7,建立稳定转染Ccr2的RAW264.7细胞系。方法:应用RT-PCR从小鼠脾脏组织中扩增Ccr2mRNA全序列,插入真核表达载体pEGFP-N1中。用脂质体将重组质粒pEGFP-N1/Ccr2转染RAW264.7细胞,通过G418...
目的:构建小鼠Ccr2基因真核表达载体,转染RAW264.7,建立稳定转染Ccr2的RAW264.7细胞系。方法:应用RT-PCR从小鼠脾脏组织中扩增Ccr2mRNA全序列,插入真核表达载体pEGFP-N1中。用脂质体将重组质粒pEGFP-N1/Ccr2转染RAW264.7细胞,通过G418筛选建立Ccr2稳定转染的RAW264.7细胞系。经RT-PCR、Western blot检测、荧光显微镜和流式细胞仪FCM检测,了解Ccr2在RAW264.7细胞中的表达水平及细胞内定位。结果:成功构建了pEGFP-N1/Ccr2重组质粒,建立了稳定转染的RAW264.7细胞株。RT-PCR和Western blot检测证实,Ccr2基因在该细胞系中成功表达,荧光显微镜下观察到该基因定位于细胞膜上,FCM显示90%以上的细胞膜上均有CCR2的表达。结论:构建了Ccr2真核表达载体并建立了稳定转染的RAW264.7细胞株。为进一步研究MCP1/CCR2信号通路在结核杆菌诱导巨噬细胞凋亡中的作用奠定了基础。
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关键词
趋化因子受体
真核表达
转染
RAW264.7细胞
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题名
小鼠Ccr2基因真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立
被引量：
1
1
作者
赵薇
芦晓红
裴秀英
机构
宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系宁夏生殖与遗传重点实验室省部共建生育力保持教育部重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1214-1216,1219,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30660158)
宁夏自然科学基金(NZ0781)
宁夏医科大学重点项目(XZ200902)
文摘
目的:构建小鼠Ccr2基因真核表达载体,转染RAW264.7,建立稳定转染Ccr2的RAW264.7细胞系。方法:应用RT-PCR从小鼠脾脏组织中扩增Ccr2mRNA全序列,插入真核表达载体pEGFP-N1中。用脂质体将重组质粒pEGFP-N1/Ccr2转染RAW264.7细胞,通过G418筛选建立Ccr2稳定转染的RAW264.7细胞系。经RT-PCR、Western blot检测、荧光显微镜和流式细胞仪FCM检测,了解Ccr2在RAW264.7细胞中的表达水平及细胞内定位。结果:成功构建了pEGFP-N1/Ccr2重组质粒,建立了稳定转染的RAW264.7细胞株。RT-PCR和Western blot检测证实,Ccr2基因在该细胞系中成功表达,荧光显微镜下观察到该基因定位于细胞膜上,FCM显示90%以上的细胞膜上均有CCR2的表达。结论:构建了Ccr2真核表达载体并建立了稳定转染的RAW264.7细胞株。为进一步研究MCP1/CCR2信号通路在结核杆菌诱导巨噬细胞凋亡中的作用奠定了基础。
关键词
趋化因子受体
真核表达
转染
RAW264.7细胞
Keywords
Ccr2
eukaryotic expression
transfection
RAW264.7 cell
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠Ccr2基因真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立
赵薇
芦晓红
裴秀英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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