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miR-485-5p靶向氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭
1
作者 胡东来 赵梓岐 +3 位作者 李元 杨丽 雷艳丽 楚元奎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期258-268,共11页
前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关... 前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关键。多项研究表明,微RNA(microRNAs,miRNAs)的异常表达与肿瘤的发生相关。已有报道显示,miRNA-485-5p(miR-485-5p)在多种肿瘤中发挥抑癌作用,但其在前列腺癌中的作用在较大程度上仍未可知。本研究旨在探究miR-485-5p在前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用与机制。生物信息学预测和qRT-PCR检测发现,miR-485-5p在前列腺癌中表达下调。平板克隆形成实验、Transwell实验和划痕愈合实验证明,转染miR-485-5p模拟物显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。生物信息学预测、双荧光素酶报告法、Western印迹和qRT-PCR检测证实,氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase,OGT)是miR-485-5p的一个下游直接靶标。进一步的分析和检测显示,OGT在前列腺癌中呈高表达,转染OGT的siRNA能够显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,同时有效逆转转染miR-485-5p抑制物所发挥的促癌作用。综上所述,miR-485-5p可以通过负向调控OGT进而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。本研究结果有助于进一步阐释miR-485-5p在前列腺癌中发生发展的作用和机制,可为寻找前列腺癌的治疗靶点提供实验依据。 展开更多
关键词 miR-485-5p 前列腺癌 氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 增殖 迁移
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基于CRISPR/Cas9技术AEG-1基因敲除神经细胞系的构建及AEG-1基因敲除介导的神经细胞周期阻滞和细胞凋亡抑制 被引量：2
2
作者 王斌 刘昆梅 +6 位作者 郭乐 张春 和祯泉 丁娜 杨华 孙之鹏 王晓 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1201-1210,共10页
星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建s... 星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建sgRNA/Cas9二合一表达载体,并进行慢病毒包装纯化。用慢病毒感染小鼠海马神经元HT22细胞,进行药物筛选和sgRNA活性鉴定,建立稳定的AEG-1基因敲除的细胞系;并进一步观察神经元HT22细胞的增殖与凋亡能力。结果显示,成功构建了3种靶向AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体。所设计的sgRNA的插入序列和开放阅读框架完全正确,成功建立了AEG-1基因敲除的稳转神经细胞系。进一步研究表明,AEG-1敲除后的神经HT22细胞与正常神经HT22细胞相比,细胞突起数目减少,细胞周期阻滞,细胞凋亡率减少。以上结果为后续进一步研究AEG-1与神经系统疾病关系奠定了基础。 展开更多
关键词 星形胶质细胞上调基因-1 CRISPR/Cas9 HT22细胞 细胞周期 细胞凋亡
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驼源天然纳米抗体噬菌体展示库的构建及抗CD19纳米抗体的筛选、表达及鉴定 被引量：4
3
作者 李光琪 李艳宁 +4 位作者 楚元奎 张爱君 潘俊斐 王红霞 徐广贤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1036-1043,共8页
目的构建驼源天然纳米抗体噬菌体展示文库并进行验证,用于筛选针对不同抗原的纳米抗体,并以CD19为抗原筛选靶向纳米抗体,进行表达并验证。方法对提取的双峰驼脾脏总RNA进行反转录并通过巢式PCR获得其重链可变区基因片段,构建至pCANTAB5... 目的构建驼源天然纳米抗体噬菌体展示文库并进行验证,用于筛选针对不同抗原的纳米抗体,并以CD19为抗原筛选靶向纳米抗体,进行表达并验证。方法对提取的双峰驼脾脏总RNA进行反转录并通过巢式PCR获得其重链可变区基因片段,构建至pCANTAB5e噬菌粒载体中,电转化至TG1大肠杆菌构建纳米抗体噬菌体展示库,以辅助噬菌体KM13进行救援后,分析库容及多样性。以CD19为抗原,采用生物素化抗原与链霉亲和素磁珠相结合的方法进行纳米抗体的淘筛,对淘筛后的单克隆进行ELISA鉴定、测序、分析、表达和验证。结果构建的纳米抗体噬菌体展示库有较好的多样性,片段插入率接近100%,随机挑取的20个克隆中其氨基酸同源性为65.85%,经辅助噬菌体救援后展示库滴度为9.0×10^13集落形成单位(CFU)/mL。对以CD19为抗原淘筛后获得的阳性克隆进行测序分析,并对纳米抗体进行表达与验证,结果显示具有与CD19结合的能力。结论成功构建滴度高、多样性好的驼源天然纳米抗体噬菌体展示库,以CD19为抗原进行淘筛获得三条抗CD19纳米抗体序列,为研究以CD19为靶标的诊断试剂盒以及抗体药物提供技术支持,为制备靶向CD19的嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞提供基础。 展开更多
关键词 纳米抗体 噬菌体展示技术 CD19
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短暂性脑缺血对C57BL/6小鼠海马区神经发生的影响 被引量：1
4
作者 孙文青 姚子昂 +4 位作者 金毅然 马海滨 牛建国 何仲义 梁雪云 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期175-183,共9页
目的:利用小鼠急性全脑缺血模型观察急性脑缺血对海马神经发生的影响。方法:将C57BL/6雄性小鼠(6~8周)随机分为脑缺血组和假手术组。采用双侧颈动脉结扎法建立短暂性全脑缺血模型;利用HE染色观察脑缺血后不同时间(1周,2周)海马区形态学... 目的:利用小鼠急性全脑缺血模型观察急性脑缺血对海马神经发生的影响。方法:将C57BL/6雄性小鼠(6~8周)随机分为脑缺血组和假手术组。采用双侧颈动脉结扎法建立短暂性全脑缺血模型;利用HE染色观察脑缺血后不同时间(1周,2周)海马区形态学变化;采用免疫组织荧光染色观察缺血后海马区caspase-3表达变化;利用Ed U染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区神经干细胞增殖变化;利用免疫组织荧光染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及少突胶质细胞特异蛋白(OSP)等蛋白表达变化,判断脑缺血对海马区神经干细胞分化的影响。结果:脑缺血7 d后,小鼠海马CA1区神经元数目减少,caspase-3阳性细胞增加(P<0.05)。海马DG区Ed U阳性细胞数量在第3 d开始增加(P<0.05),第1周达到峰值(P<0.05);海马CA1区Ed U阳性细胞数量在缺血后1周开始增加(P<0.05),缺血2周后逐渐降低。海马DG区nestin、GFAP及OSP阳性细胞数量均在缺血3 d后开始增加(P<0.05),缺血1周后达到峰值(P<0.05),2周后逐渐降低。海马CA1区GFAP及OSP阳性细胞数量在缺血3 d后开始增加(P<0.05),缺血1周后达到峰值(P<0.05),2周后逐渐降低。结论:脑缺血激活了海马DG区神经干细胞,使干细胞增殖,并向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化,同时逐渐向CA1区迁移。 展开更多
关键词 脑缺血 神经干细胞 神经发生 海马 神经干细胞分化
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诺卡菌耐药性及氟喹诺酮类耐药相关基因研究 被引量：6
5
作者 李刚 程振娜 +5 位作者 陶佳 周晓燕 伏慧 马红 武思彤 贾伟 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期190-194,共5页
目的了解宁夏医科大学总医院临床分离诺卡菌的种类、药敏特点及对氟喹诺酮类耐药基因的分布。方法收集2013年1月-2017年6月临床分离的16株诺卡菌,使用微量肉汤稀释法检测其对15种抗菌药物的药物敏感性,并检测对喹诺酮类耐药相关基因gyrA... 目的了解宁夏医科大学总医院临床分离诺卡菌的种类、药敏特点及对氟喹诺酮类耐药基因的分布。方法收集2013年1月-2017年6月临床分离的16株诺卡菌,使用微量肉汤稀释法检测其对15种抗菌药物的药物敏感性,并检测对喹诺酮类耐药相关基因gyrA、parC、qnrA、qnrB、qnrS。结果 16株诺卡菌中,盖尔森基兴诺卡菌最多见,占62.6%(10/16),其次为鼻疽诺卡菌和豚鼠耳炎诺卡菌,各占18.7%(3/16)。其对环丙沙星耐药率达到了81.2%,对头孢曲松、妥布霉素、庆大霉素、头孢吡肟耐药率分别为12.5%、12.5%、25.0%、18.7%。16株诺卡菌中,gyrA、parC、qnrA、qnrB检出率分别为18.8%、37.5%、25.0%和18.8%,未扩增出qnrS基因阳性结果。结论该院诺卡菌最多见的菌种为盖尔森基兴诺卡菌,菌株对氟喹诺酮类药物耐药严重,耐药机制可能与gyrA、parC、qnrA、qnrB基因有关。应密切注意当地诺卡菌在临床上的发生和重视药敏试验。 展开更多
关键词 诺卡菌 药敏试验 耐药基因
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诺卡菌对β-内酰胺类药物耐药性及与其耐药相关基因关系研究 被引量：3
6
作者 程振娜 李刚 +4 位作者 赵梅 周晓燕 陶佳 郭睿 贾伟 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1054-1058,共5页
目的了解诺卡菌临床分离株对β-内酰胺类抗生素敏感性及其与相关耐药基因的关系,为临床治疗提供理论依据。方法选取宁夏医科大学总医院医学实验中心分离的诺卡菌临床菌株,以微量肉汤稀释法检测其对β-内酰胺类药物阿莫西林/克拉维酸、... 目的了解诺卡菌临床分离株对β-内酰胺类抗生素敏感性及其与相关耐药基因的关系,为临床治疗提供理论依据。方法选取宁夏医科大学总医院医学实验中心分离的诺卡菌临床菌株,以微量肉汤稀释法检测其对β-内酰胺类药物阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、亚胺培南、头孢吡肟、头孢噻肟的敏感性,以PCR法检测β-内酰胺类药物相关耐药基因blaZ、bla_(TEM-1)、bla_(VIM-2)。结果19株诺卡菌中,药敏结果显示其对头孢吡肟耐药最多,其次为头孢曲松和头孢噻肟。blaZ基因在1株鼻疽诺卡菌中检出,bla_(TEM-1)基因在2株盖尔森基兴诺卡菌中检出,未检出bla_(VIM-2)基因。结论诺卡菌对β-内酰胺类药物仍具有较高的敏感性,其耐药性与blaZ、bla_(TEM-1)、bla_(VIM-2)基因无直接相关性,可能存在另外的耐药基因。 展开更多
关键词 诺卡菌 Β-内酰胺类药物 耐药基因
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AEG-1基因敲除对幼年小鼠认知功能的影响
7
作者 周宁 马彩芬 +5 位作者 李娟娟 黄越 万盼盼 禹保丛 郭乐 刘昆梅 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2023年第2期157-164,共8页
目的:探究海马神经元的星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)敲除(AEG-1 KO)对幼年小鼠认知功能的影响及分子机制。方法:Intellicage一体智能行为学系统检测AEG-1 KO幼年小鼠认知功能的变化;免疫荧光染色检测AEG-1 KO幼年小鼠海马区AEG-1蛋白... 目的:探究海马神经元的星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)敲除(AEG-1 KO)对幼年小鼠认知功能的影响及分子机制。方法:Intellicage一体智能行为学系统检测AEG-1 KO幼年小鼠认知功能的变化;免疫荧光染色检测AEG-1 KO幼年小鼠海马区AEG-1蛋白的表达水平;尼氏染色检测AEG-1 KO幼年小鼠海马厚度的变化;高尔基染色检测AEG-1 KO幼年小鼠海马神经元树突和树突棘的变化;Western Blot检测AEG-1 KO幼年小鼠海马神经元tau蛋白、微管相关蛋白2(MAP2)和血清糖皮质激素诱导的激酶1(SGK1)的变化。结果:与对照组相比,AEG-1 KO幼年小鼠访问正确角落且喝到水的百分比下降(P<0.05);AEG-1 KO幼年小鼠海马CA1、CA3和DG区AEG-1蛋白的表达量降低(P<0.05);AEG-1 KO幼年小鼠海马厚度无差异(P>0.05);AEG-1 KO幼年小鼠海马CA1、CA3和DG区神经元树突总长度变短和树突棘密度降低(P<0.05);AEG-1 KO幼年小鼠海马神经元tau蛋白表达量无差异(P>0.05),但MAP2蛋白表达量降低(P<0.05)和SGK1蛋白表达量增加(P<0.05)。结论:AEG-1基因敲除的幼年小鼠认识功能受损,其机制可能与下调海马神经元MAP2蛋白表达及上调SGK1蛋白表达并进而影响神经元树突发育有关。 展开更多
关键词 星形胶质细胞上调基因-1 海马 轴树突 树突棘 血清糖皮质激素诱导激酶1 认知功能 小鼠
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