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基于CRISPR/Cas9技术AEG-1基因敲除神经细胞系的构建及AEG-1基因敲除介导的神经细胞周期阻滞和细胞凋亡抑制 被引量:2
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作者 王斌 刘昆梅 +6 位作者 郭乐 张春 和祯泉 丁娜 杨华 孙之鹏 王晓 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1201-1210,共10页
星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建s... 星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建sgRNA/Cas9二合一表达载体,并进行慢病毒包装纯化。用慢病毒感染小鼠海马神经元HT22细胞,进行药物筛选和sgRNA活性鉴定,建立稳定的AEG-1基因敲除的细胞系;并进一步观察神经元HT22细胞的增殖与凋亡能力。结果显示,成功构建了3种靶向AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体。所设计的sgRNA的插入序列和开放阅读框架完全正确,成功建立了AEG-1基因敲除的稳转神经细胞系。进一步研究表明,AEG-1敲除后的神经HT22细胞与正常神经HT22细胞相比,细胞突起数目减少,细胞周期阻滞,细胞凋亡率减少。以上结果为后续进一步研究AEG-1与神经系统疾病关系奠定了基础。 展开更多
关键词 星形胶质细胞上调基因-1 CRISPR/Cas9 HT22细胞 细胞周期 细胞凋亡
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短暂性脑缺血对C57BL/6小鼠海马区神经发生的影响 被引量:1
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作者 孙文青 姚子昂 +4 位作者 金毅然 马海滨 牛建国 何仲义 梁雪云 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期175-183,共9页
目的:利用小鼠急性全脑缺血模型观察急性脑缺血对海马神经发生的影响。方法:将C57BL/6雄性小鼠(6~8周)随机分为脑缺血组和假手术组。采用双侧颈动脉结扎法建立短暂性全脑缺血模型;利用HE染色观察脑缺血后不同时间(1周,2周)海马区形态学... 目的:利用小鼠急性全脑缺血模型观察急性脑缺血对海马神经发生的影响。方法:将C57BL/6雄性小鼠(6~8周)随机分为脑缺血组和假手术组。采用双侧颈动脉结扎法建立短暂性全脑缺血模型;利用HE染色观察脑缺血后不同时间(1周,2周)海马区形态学变化;采用免疫组织荧光染色观察缺血后海马区caspase-3表达变化;利用Ed U染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区神经干细胞增殖变化;利用免疫组织荧光染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及少突胶质细胞特异蛋白(OSP)等蛋白表达变化,判断脑缺血对海马区神经干细胞分化的影响。结果:脑缺血7 d后,小鼠海马CA1区神经元数目减少,caspase-3阳性细胞增加(P<0.05)。海马DG区Ed U阳性细胞数量在第3 d开始增加(P<0.05),第1周达到峰值(P<0.05);海马CA1区Ed U阳性细胞数量在缺血后1周开始增加(P<0.05),缺血2周后逐渐降低。海马DG区nestin、GFAP及OSP阳性细胞数量均在缺血3 d后开始增加(P<0.05),缺血1周后达到峰值(P<0.05),2周后逐渐降低。海马CA1区GFAP及OSP阳性细胞数量在缺血3 d后开始增加(P<0.05),缺血1周后达到峰值(P<0.05),2周后逐渐降低。结论:脑缺血激活了海马DG区神经干细胞,使干细胞增殖,并向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化,同时逐渐向CA1区迁移。 展开更多
关键词 脑缺血 神经干细胞 神经发生 海马 神经干细胞分化
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诺卡菌耐药性及氟喹诺酮类耐药相关基因研究 被引量:6
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作者 李刚 程振娜 +5 位作者 陶佳 周晓燕 伏慧 马红 武思彤 贾伟 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期190-194,共5页
目的了解宁夏医科大学总医院临床分离诺卡菌的种类、药敏特点及对氟喹诺酮类耐药基因的分布。方法收集2013年1月-2017年6月临床分离的16株诺卡菌,使用微量肉汤稀释法检测其对15种抗菌药物的药物敏感性,并检测对喹诺酮类耐药相关基因gyrA... 目的了解宁夏医科大学总医院临床分离诺卡菌的种类、药敏特点及对氟喹诺酮类耐药基因的分布。方法收集2013年1月-2017年6月临床分离的16株诺卡菌,使用微量肉汤稀释法检测其对15种抗菌药物的药物敏感性,并检测对喹诺酮类耐药相关基因gyrA、parC、qnrA、qnrB、qnrS。结果 16株诺卡菌中,盖尔森基兴诺卡菌最多见,占62.6%(10/16),其次为鼻疽诺卡菌和豚鼠耳炎诺卡菌,各占18.7%(3/16)。其对环丙沙星耐药率达到了81.2%,对头孢曲松、妥布霉素、庆大霉素、头孢吡肟耐药率分别为12.5%、12.5%、25.0%、18.7%。16株诺卡菌中,gyrA、parC、qnrA、qnrB检出率分别为18.8%、37.5%、25.0%和18.8%,未扩增出qnrS基因阳性结果。结论该院诺卡菌最多见的菌种为盖尔森基兴诺卡菌,菌株对氟喹诺酮类药物耐药严重,耐药机制可能与gyrA、parC、qnrA、qnrB基因有关。应密切注意当地诺卡菌在临床上的发生和重视药敏试验。 展开更多
关键词 诺卡菌 药敏试验 耐药基因
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诺卡菌对β-内酰胺类药物耐药性及与其耐药相关基因关系研究 被引量:3
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作者 程振娜 李刚 +4 位作者 赵梅 周晓燕 陶佳 郭睿 贾伟 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1054-1058,共5页
目的了解诺卡菌临床分离株对β-内酰胺类抗生素敏感性及其与相关耐药基因的关系,为临床治疗提供理论依据。方法选取宁夏医科大学总医院医学实验中心分离的诺卡菌临床菌株,以微量肉汤稀释法检测其对β-内酰胺类药物阿莫西林/克拉维酸、... 目的了解诺卡菌临床分离株对β-内酰胺类抗生素敏感性及其与相关耐药基因的关系,为临床治疗提供理论依据。方法选取宁夏医科大学总医院医学实验中心分离的诺卡菌临床菌株,以微量肉汤稀释法检测其对β-内酰胺类药物阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、亚胺培南、头孢吡肟、头孢噻肟的敏感性,以PCR法检测β-内酰胺类药物相关耐药基因blaZ、bla_(TEM-1)、bla_(VIM-2)。结果19株诺卡菌中,药敏结果显示其对头孢吡肟耐药最多,其次为头孢曲松和头孢噻肟。blaZ基因在1株鼻疽诺卡菌中检出,bla_(TEM-1)基因在2株盖尔森基兴诺卡菌中检出,未检出bla_(VIM-2)基因。结论诺卡菌对β-内酰胺类药物仍具有较高的敏感性,其耐药性与blaZ、bla_(TEM-1)、bla_(VIM-2)基因无直接相关性,可能存在另外的耐药基因。 展开更多
关键词 诺卡菌 Β-内酰胺类药物 耐药基因
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AEG-1基因敲除对幼年小鼠认知功能的影响
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作者 周宁 马彩芬 +5 位作者 李娟娟 黄越 万盼盼 禹保丛 郭乐 刘昆梅 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2023年第2期157-164,共8页
目的:探究海马神经元的星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)敲除(AEG-1 KO)对幼年小鼠认知功能的影响及分子机制。方法:Intellicage一体智能行为学系统检测AEG-1 KO幼年小鼠认知功能的变化;免疫荧光染色检测AEG-1 KO幼年小鼠海马区AEG-1蛋白... 目的:探究海马神经元的星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)敲除(AEG-1 KO)对幼年小鼠认知功能的影响及分子机制。方法:Intellicage一体智能行为学系统检测AEG-1 KO幼年小鼠认知功能的变化;免疫荧光染色检测AEG-1 KO幼年小鼠海马区AEG-1蛋白的表达水平;尼氏染色检测AEG-1 KO幼年小鼠海马厚度的变化;高尔基染色检测AEG-1 KO幼年小鼠海马神经元树突和树突棘的变化;Western Blot检测AEG-1 KO幼年小鼠海马神经元tau蛋白、微管相关蛋白2(MAP2)和血清糖皮质激素诱导的激酶1(SGK1)的变化。结果:与对照组相比,AEG-1 KO幼年小鼠访问正确角落且喝到水的百分比下降(P<0.05);AEG-1 KO幼年小鼠海马CA1、CA3和DG区AEG-1蛋白的表达量降低(P<0.05);AEG-1 KO幼年小鼠海马厚度无差异(P>0.05);AEG-1 KO幼年小鼠海马CA1、CA3和DG区神经元树突总长度变短和树突棘密度降低(P<0.05);AEG-1 KO幼年小鼠海马神经元tau蛋白表达量无差异(P>0.05),但MAP2蛋白表达量降低(P<0.05)和SGK1蛋白表达量增加(P<0.05)。结论:AEG-1基因敲除的幼年小鼠认识功能受损,其机制可能与下调海马神经元MAP2蛋白表达及上调SGK1蛋白表达并进而影响神经元树突发育有关。 展开更多
关键词 星形胶质细胞上调基因-1 海马 轴树突 树突棘 血清糖皮质激素诱导激酶1 认知功能 小鼠
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