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基于特征多肽抗原的阿胶基原鉴定 被引量:1
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作者 袁陈婷 杨容 +6 位作者 王立玮 景凌洁 陈璐阳 加羊卓玛 孙小祥 孙锦秀 杨欢 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1214-1219,共6页
目的 以特征多肽为半抗原并制备多克隆抗体,鉴定阿胶原材料基原。方法 经文献调研及数据库比对筛选特征多肽,将多肽抗原与血蓝蛋白偶联并免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过ELISA、dot blot和Western blot分析与验证多克隆抗体的产生、... 目的 以特征多肽为半抗原并制备多克隆抗体,鉴定阿胶原材料基原。方法 经文献调研及数据库比对筛选特征多肽,将多肽抗原与血蓝蛋白偶联并免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过ELISA、dot blot和Western blot分析与验证多克隆抗体的产生、效价及特异性。结果 筛选所得5个特征多肽序列均具有T细胞表位和B细胞表位,亲水性-1~0,二级结构大多为无规则卷曲。多肽抗原ECS1、ECS3~ECS5在二次加强免疫后,效价分别为1∶6 400、1∶400、1∶12 800和1∶800。制备所得的多克隆抗体之间不产生交叉反应,而且多克隆抗体Ab-ECS3与驴皮及其伪品蛋白的结合显现出较大差异。结论 以特征多肽为半抗原制备所得的多克隆抗体可通过Western blot对驴皮进行真伪鉴别,为胶类中药的基原鉴定提供了参考。 展开更多
关键词 阿胶 特征多肽 多肽抗原 多克隆抗体 Western blot 基原鉴定
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新型双相酶水解体系制备宝藿苷Ⅰ 被引量:3
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作者 汪燕 张小溪 +6 位作者 邵建兵 王海艳 周怡莹 杨鸿 杨欢 沈玉萍 贾晓斌 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2775-2778,共4页
目的构建新型双相酶水解体系制备宝藿苷Ⅰ。方法单因素试验优化缓冲液pH值、酶与底物质量比、酶解时间、反应温度,并在淫羊藿苷处理量、酶重复使用、操作方便性方面上与传统酶水解法进行比较。结果在醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4. 0)和乙酸... 目的构建新型双相酶水解体系制备宝藿苷Ⅰ。方法单因素试验优化缓冲液pH值、酶与底物质量比、酶解时间、反应温度,并在淫羊藿苷处理量、酶重复使用、操作方便性方面上与传统酶水解法进行比较。结果在醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4. 0)和乙酸乙酯构建的双相酶水解体系中,当β-葡萄糖苷酶与淫羊藿苷的质量比为1∶1时,于55℃下反应6 h后水解率达到100%,双相水解法可将淫羊藿苷处理量提高到60 mg/mL,是传统酶水解法的2倍,并且制备步骤得以简化。此外,双相酶水解体系中酶液使用2次后,淫羊藿苷转化率仍能达到98. 58%。结论该方法可高效、便捷地水解淫羊藿苷以获取宝藿苷Ⅰ,并实现了酶的重复利用。 展开更多
关键词 宝藿苷Ⅰ 新型双相酶水解体系 制备
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穿山龙中薯蓣皂苷元的萃取与测定 被引量:7
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作者 杜易平 龚成明 +3 位作者 李楠 李子豪 沈玉萍 杨欢 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2409-2411,共3页
目的萃取穿山龙中的薯蓣皂苷元,并测定其含有量。方法加压两相酸水解法从穿山龙中水解萃取出薯蓣皂苷元,然后采用HPLC法测定其含有量。条件为Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-水为流动相,等度洗脱;体积... 目的萃取穿山龙中的薯蓣皂苷元,并测定其含有量。方法加压两相酸水解法从穿山龙中水解萃取出薯蓣皂苷元,然后采用HPLC法测定其含有量。条件为Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-水为流动相,等度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长203 nm;柱温35℃。结果薯蓣皂苷元在2.910~1 490μg/m L范围内线性关系良好(R2=0.999 7),平均加样回收率99.71%,RSD=2.12%。与直接酸水解法相比,加压两相酸水解法下薯蓣皂苷元含有量明显提高,硫酸消耗量、反应时间明显减少。结论该方法稳定可靠,可用于穿山龙中薯蓣皂苷元的萃取与测定。 展开更多
关键词 穿山龙 薯蓣皂苷元 加压双相酸水解法 HPLC
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小儿复方鸡内金散中鸡内金的真伪鉴定 被引量:2
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作者 常悦 张玉立 +5 位作者 郑晗雪 卢梦瑶 吴沅臻 李达洁 杨欢 胡建慧 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期3839-3843,共5页
目的鉴定小儿复方鸡内金散中鸡内金的真伪。方法根据家鸡、麻鸭、家鹅的线粒体基因序列设计和筛选引物,优化反应条件和体系,建立基于特异性引物的多重PCR法进行鉴别。结果鸡内金、鸭内金、鹅内金DNA在优化条件下,分别在94、124、155 bp... 目的鉴定小儿复方鸡内金散中鸡内金的真伪。方法根据家鸡、麻鸭、家鹅的线粒体基因序列设计和筛选引物,优化反应条件和体系,建立基于特异性引物的多重PCR法进行鉴别。结果鸡内金、鸭内金、鹅内金DNA在优化条件下,分别在94、124、155 bp处产生了清晰、明亮的条带,并且未观察到非特异性扩增,呈现出较好的特异性,检测灵敏度均达到0.1 ng/μL。来源于8个厂家的11批样品中,有2批检出了鸭内金掺伪,检出率为18.2%。结论该方法灵敏度高,特异性强,可为更好地监控含鸡内金中药制剂的质量提供新颖的途径和有力的手段。 展开更多
关键词 小儿复方鸡内金散 鸡内金 特异性引物 多重PCR
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酶水解柴胡皂苷B_(1)制备稀有前柴胡皂苷A的研究 被引量:1
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作者 徐天真 吴梦茹 +7 位作者 邵佳丽 常悦 朱烨婷 陈季璇 陈璐阳 陈登艳 杨欢 夏国华 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4156-4160,共5页
目的通过酶水解柴胡皂苷B_(1)获取中药活性成分前柴胡皂苷A,并构建关键技术。方法以单因素试验考察水解酶、缓冲液pH值、酶/底物质量比、反应温度和反应时间等影响因素,并通过响应面实验设计对酶水解条件进行优化;此后,利用LC-MS、^(1)H... 目的通过酶水解柴胡皂苷B_(1)获取中药活性成分前柴胡皂苷A,并构建关键技术。方法以单因素试验考察水解酶、缓冲液pH值、酶/底物质量比、反应温度和反应时间等影响因素,并通过响应面实验设计对酶水解条件进行优化;此后,利用LC-MS、^(1)H-NMR、13 C-NMR确定产物的化学结构。结果柴胡皂苷B_(1)的最佳水解酶为蜗牛酶,在0.20 mol/L HAc-NaAC缓冲液(pH 4.5)中,当酶与柴胡皂苷B_(1)的质量比为30∶1时,于56℃下反应33 h后,水解率高达99.1%,产物经鉴定为前柴胡皂苷A。结论本研究构建的酶水解关键技术获取前柴胡皂苷A更便捷,不产生柴胡皂苷元副产物,反应过程中不使用无机酸,清洁环保,可为大量制备前柴胡皂苷A以开展药理药效研究奠定基础。 展开更多
关键词 柴胡 柴胡皂苷B_(1) 前柴胡皂苷A 酶水解
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金嗓清音丸中僵蚕成分的特异性引物扩增鉴定
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作者 郭晶晶 唐玲玲 +7 位作者 严小萍 徐超 胡建慧 李娟 孙小祥 夏国华 林玲 杨欢 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1729-1734,共6页
目的建立特异性引物扩增鉴定金嗓清音丸中僵蚕成分。方法根据家蚕、白僵菌、绿僵菌线粒体全基因序列差异设计特异性引物PM2、PB2、PA2,采用十六烷基三甲基溴化铵法、酚仿抽提法提取纯化总DNA,并以此为模板进行特异性引物扩增和方法学考... 目的建立特异性引物扩增鉴定金嗓清音丸中僵蚕成分。方法根据家蚕、白僵菌、绿僵菌线粒体全基因序列差异设计特异性引物PM2、PB2、PA2,采用十六烷基三甲基溴化铵法、酚仿抽提法提取纯化总DNA,并以此为模板进行特异性引物扩增和方法学考察,产物以2%琼脂糖凝胶电泳检测。结果家蚕、白僵菌、绿僵菌DNA经PCR扩增后,分别在82、94、144 bp处产生条带,并且未观察到非特异性扩增条带。PM2、PB2、PA2对相应DNA的检测灵敏度分别为0.10、0.10、0.010 ng/μL。来自同一厂家的6批样品中同时检出家蚕、白僵菌DNA,但未检出绿僵菌DNA,而另外2批样品仅检出家蚕DNA。结论该方法方便可靠,专属性强,有助于更好地监控金嗓清音丸等含僵蚕中药成方制剂的质量,可为其临床用药的安全性和有效性提供保障,并为其他中成药中动物药的专属性鉴定提供参考。 展开更多
关键词 金嗓清音丸 僵蚕 成分鉴定 特异性引物扩增
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