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解偶联蛋白嵌合体及突变体的构建方法
1
作者
王超
刘洋
+4 位作者
段秀梅
田庄
王银萍
沃夫冈.格莱尔
付彤
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期174-179,共6页
目的:构建解偶联蛋白(UCPs)嵌合体和突变体,为阐明解偶联蛋白家族功能结构域的研究提供条件。方法:采用普通PCR和重叠延伸PCR获得UCPs嵌合体基因片段,分别插入pCR2.1测序载体后进行测序,再以限制性内切酶连接方式将嵌合基因定向亚克隆...
目的:构建解偶联蛋白(UCPs)嵌合体和突变体,为阐明解偶联蛋白家族功能结构域的研究提供条件。方法:采用普通PCR和重叠延伸PCR获得UCPs嵌合体基因片段,分别插入pCR2.1测序载体后进行测序,再以限制性内切酶连接方式将嵌合基因定向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,获得pcDNAUCP1UCP2、pcDNAUCP2UCP1和pcDNAUCP3UCP1,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pcDNA。利用定向点突变产生pcDNA-UCP3R167G/pcDNA-UCP3RE171/172GG,并进行测序证实。结果:PCR和酶切,获得的目的基因与嵌合基因片段中包含的碱基数量吻合;测序结果,UCPs嵌合体基因序列、突变体基因序列与预期设计完全相同。结论:成功地构建了含有UCPs嵌合体和突变体基因重组真核表达质粒。
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关键词
解偶联蛋白
线粒体
钙离子通道
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职称材料
题名
解偶联蛋白嵌合体及突变体的构建方法
1
作者
王超
刘洋
段秀梅
田庄
王银萍
沃夫冈.格莱尔
付彤
机构
吉林
大学
第一医院病理诊断中心
吉林
大学
第一医院眼科
奥地利格拉茨医科大学分子生物学与生物化学研究所
吉林
大学
第一医院乳腺外科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期174-179,共6页
基金
吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(20120733)
奥地利格拉茨医科大学博士后基金资助课题(200812014)
吉林省科技厅科技发展青年科研基金资助课题(201101054)
文摘
目的:构建解偶联蛋白(UCPs)嵌合体和突变体,为阐明解偶联蛋白家族功能结构域的研究提供条件。方法:采用普通PCR和重叠延伸PCR获得UCPs嵌合体基因片段,分别插入pCR2.1测序载体后进行测序,再以限制性内切酶连接方式将嵌合基因定向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,获得pcDNAUCP1UCP2、pcDNAUCP2UCP1和pcDNAUCP3UCP1,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pcDNA。利用定向点突变产生pcDNA-UCP3R167G/pcDNA-UCP3RE171/172GG,并进行测序证实。结果:PCR和酶切,获得的目的基因与嵌合基因片段中包含的碱基数量吻合;测序结果,UCPs嵌合体基因序列、突变体基因序列与预期设计完全相同。结论:成功地构建了含有UCPs嵌合体和突变体基因重组真核表达质粒。
关键词
解偶联蛋白
线粒体
钙离子通道
Keywords
uncoupling proteins
mitochondria
Ca2＋ channel
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
解偶联蛋白嵌合体及突变体的构建方法
王超
刘洋
段秀梅
田庄
王银萍
沃夫冈.格莱尔
付彤
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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