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基因工程抗体抗CD19(Fab)-LDM的制备及生物学活性研究
被引量：
5
1
作者
姜琳琳
张孝云
+4 位作者
马莉
颜次慧
齐怀丰
熊冬生
范冬梅
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1363-1368,共6页
目的构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究。方法采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌进行表达,表达...
目的构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究。方法采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌进行表达,表达产物经Protein G亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定;采用流式细胞检测技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白与B淋巴瘤Raji细胞的结合活性;采用间接免疫荧光法,检测CD19介导细胞内化的情况;采用MTT法检测强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对CD19+Raji细胞的靶向杀伤活性;采用彗星电泳的方法,检测强化融合蛋白对Raji细胞DNA的损伤程度。结果用基因工程方法成功的构建、表达融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDP,Protein G亲和层析柱纯化后在SDS-PAGE上表现为相对分子质量约60 ku蛋白条带,且融合蛋白可与Raji细胞特异结合,并能介导细胞的内化;强化融合蛋白对Raji细胞具有较强的细胞毒性,并能引起细胞DNA损伤。结论强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM可以靶向作用于B淋巴瘤细胞,并具有较强的抗肿瘤活性,在恶性B淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值。
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关键词
CD19
力达霉素
B性恶性淋巴瘤
基因工程抗体
DNA损伤
强化融合蛋白
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职称材料
题名
基因工程抗体抗CD19(Fab)-LDM的制备及生物学活性研究
被引量：
5
1
作者
姜琳琳
张孝云
马莉
颜次慧
齐怀丰
熊冬生
范冬梅
机构
中国医学科学院
天津红日金博达生物技术有限公司
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1363-1368,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No 30971291)
文摘
目的构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究。方法采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌进行表达,表达产物经Protein G亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定;采用流式细胞检测技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白与B淋巴瘤Raji细胞的结合活性;采用间接免疫荧光法,检测CD19介导细胞内化的情况;采用MTT法检测强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对CD19+Raji细胞的靶向杀伤活性;采用彗星电泳的方法,检测强化融合蛋白对Raji细胞DNA的损伤程度。结果用基因工程方法成功的构建、表达融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDP,Protein G亲和层析柱纯化后在SDS-PAGE上表现为相对分子质量约60 ku蛋白条带,且融合蛋白可与Raji细胞特异结合,并能介导细胞的内化;强化融合蛋白对Raji细胞具有较强的细胞毒性,并能引起细胞DNA损伤。结论强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM可以靶向作用于B淋巴瘤细胞,并具有较强的抗肿瘤活性,在恶性B淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值。
关键词
CD19
力达霉素
B性恶性淋巴瘤
基因工程抗体
DNA损伤
强化融合蛋白
Keywords
CD19
LDM
B lymphoma cells
genetic engineering antibody
DNA damage
energized fusion protein
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R394.2 [医药卫生—医学遗传学]
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出处
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1
基因工程抗体抗CD19(Fab)-LDM的制备及生物学活性研究
姜琳琳
张孝云
马莉
颜次慧
齐怀丰
熊冬生
范冬梅
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
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