微生物转化法合成3-氧代齐墩果酸及其条件优化 被引量：1

1

作者 刘婷 孙华 +2 位作者 和朝军 吴萍 王敏 《化学与生物工程》 CAS 2010年第3期55-59,共5页

以齐墩果酸为底物,选取雷斯青霉(Penicilliumraistrickii)、赭曲霉(Aspergillus ochraceus)和黑根霉(Rhi-zopus nigricans)三种微生物对其进行转化,采用TLC、HPLC方法检测转化产物。结果表明,雷斯青霉和赭曲霉对齐墩果酸有转化能力,其... 以齐墩果酸为底物,选取雷斯青霉(Penicilliumraistrickii)、赭曲霉(Aspergillus ochraceus)和黑根霉(Rhi-zopus nigricans)三种微生物对其进行转化,采用TLC、HPLC方法检测转化产物。结果表明,雷斯青霉和赭曲霉对齐墩果酸有转化能力,其中雷斯青霉转化能力较高,主产物为3-氧代齐墩果酸;对雷斯青霉生物转化条件进行优化,确定最佳工艺条件为:投料时间36 h、转化时间48 h、转化pH值5.5、转化温度28℃、最大底物加入量不超过100 mg.L-1、DMF体积分数0.6%。在此条件下,齐墩果酸转化率可达7.95%、3-氧代齐墩果酸生成率达50.97%。用雷斯青霉对齐墩果酸进行衍生化,是一种合成3-氧代齐墩果酸新方法。 展开更多

关键词 微生物转化 齐墩果酸 3-氧代齐墩果酸 雷斯青霉 赭曲霉 黑根霉

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基于SVM的天津产地玫瑰香葡萄酒定性分析 被引量：8

2

作者 张军 王方 +6 位作者 魏纪平 李长文 杨华 邵春甫 张福庆 尹吉泰 肖冬光 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第1期109-113,共5页

利用红外光谱法对天津产地玫瑰香葡萄酒识别鉴定,提出了用支持向量机(SVM)算法对干白葡萄酒红外光谱图进行分析,详细介绍了干白葡萄酒谱图的预处理过程,包括基线校正、消除噪声、标准归一化和去除异常样本点。选取了不同产地的玫瑰香原... 利用红外光谱法对天津产地玫瑰香葡萄酒识别鉴定,提出了用支持向量机(SVM)算法对干白葡萄酒红外光谱图进行分析,详细介绍了干白葡萄酒谱图的预处理过程,包括基线校正、消除噪声、标准归一化和去除异常样本点。选取了不同产地的玫瑰香原酒样品511个、贵人香原酒样品438个、霞多丽原酒样品307个、白玉霓原酒样品29个、白羽原酒样品44个、龙眼原酒样品31个、泽香原酒样品79个,针对不同分类将80%样品谱图用SVM建立分类模型,并用剩余20%样品谱图对这些模型进行验证,实验结果表明该方法行之有效,不同葡萄品种干白葡萄酒模型正确率、识别率和拒绝率达到97%以上,不同产地玫瑰香干白葡萄酒正确率、识别率和拒绝率达到98%以上。该方法可以对天津产地玫瑰香葡萄酒进行定性识别鉴定。 展开更多

关键词 红外光谱法 玫瑰香 葡萄酒 鉴定

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基于转录组分析挖掘兽疫链球菌透明质酸分子量调控元件

3

作者 裴旭娟 狄靖宜 +1 位作者 刘浩 高伟霞 《生物技术通报》 北大核心 2025年第1期347-356,共10页

【目的】挖掘透明质酸分子量的影响元件,构建生产不同分子量大小的透明质酸兽疫链球菌工程菌。【方法】在利用不同碳源培养兽疫链球菌S12生产透明质酸时,发现10 g/L果糖为碳源发酵的透明质酸分子量为1.48×10^(6) Da,比原始发酵培养... 【目的】挖掘透明质酸分子量的影响元件,构建生产不同分子量大小的透明质酸兽疫链球菌工程菌。【方法】在利用不同碳源培养兽疫链球菌S12生产透明质酸时,发现10 g/L果糖为碳源发酵的透明质酸分子量为1.48×10^(6) Da,比原始发酵培养基(50 g/L蔗糖为碳源)获得的透明质酸分子量2.10×10^(6) Da降低了29.52%。随后将50 g/L的蔗糖和10 g/L的果糖为碳源的S12发酵液进行转录组学分析,发现除果糖代谢相关基因外,精氨酸脱亚胺酶途径的两个关键基因arcA(编码精氨酸脱亚胺酶)和argF(编码鸟氨酸氨基甲酰转移酶)转录水平分别提升了16.29倍和11.27倍。为了探究这两个基因对HA合成的影响,在S12中分别敲除和过表达基因arcA、argF。【结果】arcA过表达菌株在CDM培养基中合成HA分子量2.96×10^(6) Da,比出发菌1.97×10^(6)Da提高50.25%,另外3个菌株HA分子量变化不大。进一步通过RT-qPCR发现arcA过表达菌株中谷氨酰胺(HA合成中的氨基供体)合成酶编码基因glnA转录水平上调2.0倍,这可能是导致arcA基因过表达HA分子量上升的原因之一。【结论】挖掘到精氨酸代谢相关两个基因对HA分子量具有调控作用,为其他菌株调控HA分子量提供了新靶标。 展开更多

关键词 兽疫链球菌 透明质酸 转录组 分子量 精氨酸代谢

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基于转录组学挖掘兽疫链球菌内源表达元件及高产透明质酸应用

4

作者 赵锐 狄靖宜 +2 位作者 张广通 刘浩 高伟霞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期296-304,共9页

【目的】构建兽疫链球菌内源性表达元件文库,并探究其在提高透明质酸产量中的应用。【方法】通过对兽疫链球菌发酵指数期和平台期进行转录组测序分析,初步筛选32种高、中、低3种强度的启动子与RBS组合(表达元件PR);进一步利用绿色荧光... 【目的】构建兽疫链球菌内源性表达元件文库,并探究其在提高透明质酸产量中的应用。【方法】通过对兽疫链球菌发酵指数期和平台期进行转录组测序分析,初步筛选32种高、中、低3种强度的启动子与RBS组合(表达元件PR);进一步利用绿色荧光蛋白基因转录水平及荧光强度来验证PR元件的强度;最后,利用筛选到的较强元件PR31过表达透明质酸合成关键基因hasA,hasB,hasC,hasD,hasE,并采用2 L发酵罐评价强表达元件在提高透明质酸产量的效果。【结果】上述基因的相对转录水平分别提高至原来的8.17、7.32、3.72、39.48、9倍。其中,过表达hasA及hasD后,透明质酸产量相对于野生型分别提高了43%和31%,达到5.654 g/L和5.283 g/L。【结论】成功构建了兽疫链球菌内源表达元件文库,可用于透明质酸合成途径强化及竞争途径弱化等代谢工程改造。 展开更多

关键词 兽疫链球菌 转录组测序 启动子 核糖体结合位点 透明质酸

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氮源对L-色氨酸发酵的影响 被引量：12

5

作者 黄静 史建明 +3 位作者 霍文婷 徐庆阳 谢希贤 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期21-25,共5页

以L-色氨酸生产菌E.coli TRTH为供试菌株,研究了氮源对L-色氨酸发酵的影响。利用30 L发酵罐进行分批补料发酵试验,确定了最佳有机氮源和无机氮源分别为酵母粉和硫酸铵,进一步确定酵母粉和硫酸铵的最佳用量为1 g/L和10 g/L,最后采用NaOH... 以L-色氨酸生产菌E.coli TRTH为供试菌株,研究了氮源对L-色氨酸发酵的影响。利用30 L发酵罐进行分批补料发酵试验,确定了最佳有机氮源和无机氮源分别为酵母粉和硫酸铵,进一步确定酵母粉和硫酸铵的最佳用量为1 g/L和10 g/L,最后采用NaOH和氨水混合补料控制发酵液中NH4+浓度在120 mmol/L以下,发酵38 h,菌体生物量和L-色氨酸产量分别达到53.42 g/L和32.6 g/L,实现了大肠杆菌的高密度培养。 展开更多

关键词 L-色氨酸 氮源 分批补料发酵 高密度培养

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淀粉酶产色链霉菌TUST2中ε-聚赖氨酸降解酶的纯化和性质 被引量：7

6

作者 谭之磊 贾士儒 +2 位作者 赵颖 袁国栋 曹伟锋 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2404-2408,共5页

分离得到产抗菌聚氨基酸ε-聚赖氨酸菌株淀粉酶产色链霉菌TUST2,从中纯化了ε-聚赖氨酸降解酶,并对其性质进行了研究.结果表明,该酶为膜结合蛋白.为提取该降解酶,先收集菌体细胞并用超声波破碎,细胞膜部分用1.0mol/LNaSCN溶液溶解.将粗... 分离得到产抗菌聚氨基酸ε-聚赖氨酸菌株淀粉酶产色链霉菌TUST2,从中纯化了ε-聚赖氨酸降解酶,并对其性质进行了研究.结果表明,该酶为膜结合蛋白.为提取该降解酶,先收集菌体细胞并用超声波破碎,细胞膜部分用1.0mol/LNaSCN溶液溶解.将粗酶液进行SephadexG100凝胶柱层析分离.用100mmol/L磷酸缓冲液洗脱,收集活性部分.纯化后的样品用SDS-PAGE检测,酶亚基分子量约为54700.酶活力在pH=6.0～9.0间稳定,最适宜pH=7.0.酶的最适温度为30℃,在10～50℃水浴30min酶活力未见明显下降.研究了不同金属离子对酶活力的影响,结果表明,Zn2+,Cu2+和Fe3+可分别提高酶活力29.72%,15.85%和15.08%;但Ag+,Hg2+,Co2+和Mn2+对酶活力有强烈的抑制作用.Ca2+,K+和Ba2+对酶活力没有影响.添加4%Tween-80能提高酶活力10%,但EDTA能强烈抑制酶活力.研究结果表明,此降解酶的性质与白色链霉菌产生的ε-聚赖氨酸降解酶的性质相似. 展开更多

关键词 淀粉酶产色链霉菌 ε-聚赖氨酸降解酶 分离纯化

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大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒的构建及碱性蛋白酶的表达 被引量：6

7

作者 梁晓梅 黎明 +2 位作者 成堃 贾红红 路福平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期165-169,共5页

构建了一个可以在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中复制,并可以在枯草芽孢杆菌中表达外源蛋白的穿梭表达载体pBE2R。该穿梭表达载体是以pBE2为基本骨架,引入来自pWB980质粒的P43强启动子,并在其下游引入嗜碱芽孢杆菌碱性蛋白酶信号肽和前肽构... 构建了一个可以在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中复制,并可以在枯草芽孢杆菌中表达外源蛋白的穿梭表达载体pBE2R。该穿梭表达载体是以pBE2为基本骨架,引入来自pWB980质粒的P43强启动子,并在其下游引入嗜碱芽孢杆菌碱性蛋白酶信号肽和前肽构建而成。试验结果表明,该穿梭表达载体pBE2R可以在大肠杆DH5α和枯草芽孢杆菌WB600中稳定存在,并可以使外源蛋白在枯草芽孢杆菌进行分泌表达,同时也为碱性蛋白酶定向改造提供了高通量筛选平台。 展开更多

关键词 穿梭载体 P43启动子 碱性蛋白酶 信号肽 前肽

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黑曲霉糖化酶基因的克隆及其在毕赤酵母X33中的表达 被引量：11

8

作者 曹慕琛 徐健勇 +3 位作者 罗立超 张同存 孙劭靖 宋诙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第14期8226-8230,8306,共6页

[目的]以毕赤酵母（Pichia pastoris）X33为宿主菌高效表达黑曲霉（Aspergillus niger）糖化酶,为进一步扩大糖化酶在工业上的应用奠定基础。[方法]利用RT-PCR技术,提取黑曲霉总RNA进行反转录,以得到的cDNA为模板,根据NCBI数据库中A.nig... [目的]以毕赤酵母（Pichia pastoris）X33为宿主菌高效表达黑曲霉（Aspergillus niger）糖化酶,为进一步扩大糖化酶在工业上的应用奠定基础。[方法]利用RT-PCR技术,提取黑曲霉总RNA进行反转录,以得到的cDNA为模板,根据NCBI数据库中A.nigerCBS513.88糖化酶的cDNA序列（glaA）设计引物,通过PCR扩增得到去除天然信号肽的糖化酶成熟肽编码基因glaAm,并将其克隆到pUC19载体中,序列分析表明,glaAm的开放阅读框由1 879个核苷酸组成,编码625个氨基酸。以此片段构建了pFLDα-glaAm重组表达载体,经NsiI线性化后,电击转化毕赤酵母X-33。摇瓶培养中通过添加终浓度为0.5%的甲醇诱导糖化酶的分泌。[结果]SDS-PAGE和Starch-PAGE显示,糖化酶得到正确的分泌表达,且具有较高的生物活性,发酵上清液中酶活最高达到380.78 U/ml（发酵液）。重组糖化酶的最适反应温度和最适pH分别为6065℃和4.0,在pH2.55.5范围内均保持90%以上的酶活力。该酶具有较高的热稳定性,pH4.0条件下,该酶在50℃下稳定;60℃处理60 min,仍能保持90%以上的酶活力;65℃下的半衰期约为44 min。[结论]黑曲霉糖化酶基因在毕赤酵母X33中得到了异源高效表达。 展开更多

关键词 毕赤酵母 糖化酶 热稳定性 异源表达

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亚甲基蓝染液的γ-PGA水凝胶脱色处理 被引量：7

9

作者 王静心 李政 +2 位作者 张秋亚 乔长晟 张健飞 《印染》 北大核心 2013年第24期1-5,共5页

采用两种不同相对分子质量的γ-聚谷氨酸(γ-PGA)制备水凝胶,以FT-IR及SEM法对水凝胶的三维网络结构进行了表征,并将其应用于亚甲基蓝溶液脱色处理。结果表明,两种凝胶对染料的吸附量均随pH值和γ-PGA浓度的增加而增加;相对分子质量100... 采用两种不同相对分子质量的γ-聚谷氨酸(γ-PGA)制备水凝胶,以FT-IR及SEM法对水凝胶的三维网络结构进行了表征,并将其应用于亚甲基蓝溶液脱色处理。结果表明,两种凝胶对染料的吸附量均随pH值和γ-PGA浓度的增加而增加;相对分子质量100万的凝胶对染料的吸附受转速影响较小,而相对分子质量70万的凝胶在转速120r/min时对染料的吸附会迅速增加。吸附动力曲线表明,0.2g相对分子质量100万的干凝胶在1g/L的染液中,2h内可基本达到吸附平衡,最大吸附染料量为496mg/g;0.2g相对分子质量70万的干凝胶在1g/L的染液中,4h内可基本达到吸附平衡,最大吸附染料量为465mg/g。 展开更多

关键词 印染废水 水凝胶 亚甲基蓝 吸附

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粗糙脉孢菌蛋白表达系统构建研究 被引量：1

10

作者 高染染 刘倩 +3 位作者 孙文良 孙志勇 刘浩 田朝光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期160-169,共10页

旨在将模式丝状真菌粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)构建为蛋白质表达系统。通过真菌杂交技术构建出粗糙脉孢菌六突变缺失菌株LQ-1(Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3)作为蛋白表达宿主菌株。该宿主菌株可以用纤维二糖作为诱导物诱导纤维素酶启动... 旨在将模式丝状真菌粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)构建为蛋白质表达系统。通过真菌杂交技术构建出粗糙脉孢菌六突变缺失菌株LQ-1(Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3)作为蛋白表达宿主菌株。该宿主菌株可以用纤维二糖作为诱导物诱导纤维素酶启动子表达,同时又消除了葡萄糖苷酶蛋白的背景条带,有利于目标蛋白表达纯化。构建了分别含有粗糙脉孢菌自身强启动子(Pcbh-1、Pcbh-2和Ptef-1)的3个新的高效表达载体,该载体带有融合标签蛋白tev-6×his-gfp,能高效方便的筛选阳性转化子,有利于后续目标蛋白纯化。以纤维素酶GH3-4和CBH-1为例,通过重组表达菌株纤维二糖诱导发酵液进行酶活测定、SDS-PAGE电泳分析和Western blotting检测显示,重组蛋白GH3-4-GFP和CBH-1-GFP成功进行了表达和分泌,分泌水平分别为2.77和2.83 mg/L。Pcbh-1启动子重组蛋白表达水平最高,说明在纤维二糖诱导体系中启动子Pcbh-1的启动效率最高,初步建立了粗糙脉孢菌纤维二糖诱导的蛋白质表达体系。 展开更多

关键词 丝状真菌 粗糙脉孢菌 蛋白表达系统 纤维二糖 强启动子

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兽疫链球菌ATCC39920可控诱导表达系统的构建及其应用 被引量：2

11

作者 郑小娥 王震 刘浩 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期130-136,共7页

旨在构建一种在兽疫链球菌(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)中可用的基因诱导表达系统,并探究其在两步发酵中的应用。分别构建蔗糖、乳糖、木糖和乳酸链球菌素(nisin)诱导表达载体,以编码透明质酸合成酶的has A基因作为报告基... 旨在构建一种在兽疫链球菌(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)中可用的基因诱导表达系统,并探究其在两步发酵中的应用。分别构建蔗糖、乳糖、木糖和乳酸链球菌素(nisin)诱导表达载体,以编码透明质酸合成酶的has A基因作为报告基因,以has A基因功能缺失导致荚膜缺陷的?has A作为宿主菌,观察诱导后荚膜生成情况验证系统的可行性。结果显示,木糖和nisin系统不能诱导has A表达,乳糖系统诱导表达效率低,蔗糖系统可严谨且高效诱导基因表达。以?has A/p LH201菌株实施两步发酵,葡萄糖为唯一糖源时仅用于菌体生长,添加蔗糖诱导产生透明质酸,终产量达到3.4 g/L。成功构建了一种以蔗糖为诱导物的可控-诱导基因表达系统,可用于兽疫链球菌两步发酵。 展开更多

关键词 兽疫链球菌 可控诱导表达系统 可控两步发酵 透明质酸

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