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产耐高温木聚糖酶菌株的筛选及其产酶条件优化 被引量:4
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作者 孙明哲 郑宏臣 +5 位作者 孙君社 裴海生 刘逸寒 张璟 韩杨 路福平 《中国酿造》 CAS 2013年第8期15-20,共6页
从牛粪堆肥中分离、筛选到1株产耐高温木聚糖酶的细菌NF1,经形态特征和16S rDNA序列分析,鉴定菌株NF1为类芽孢杆菌,命名为类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)NF1。采用响应面法对该菌种产木聚糖酶的发酵条件进行优化。首先利用Plackett Bur... 从牛粪堆肥中分离、筛选到1株产耐高温木聚糖酶的细菌NF1,经形态特征和16S rDNA序列分析,鉴定菌株NF1为类芽孢杆菌,命名为类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)NF1。采用响应面法对该菌种产木聚糖酶的发酵条件进行优化。首先利用Plackett Burman试验设计筛选出影响产酶量的3个主要因素,即牛肉膏浓度、NaCl浓度和初始pH值。在此基础上使用Design-Expert软件进行Box-Behnken试验设计,通过响应面分析得出菌株NF1发酵产酶的最佳条件为玉米芯20g/L、牛肉膏28.2g/L、K2HPO45g/L、MgSO40.5g/L、NaCl 7.1g/L、初始pH值为6.9;装液量40mL、转速160r/min、接种量2%、温度28℃。经过验证试验,优化后粗酶液酶活达到160.6IU/mL,与响应面预测结果一致,较优化前木聚糖酶酶活提高了51.4倍。 展开更多
关键词 耐高温木聚糖酶 菌种筛选 类芽孢杆菌 发酵优化 响应面分析
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原生质体融合技术选育分解草酸乳酸菌菌株的研究 被引量:5
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作者 张禹 毛淑红 +1 位作者 路福平 聂实践 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期186-190,共5页
将具有草酸分解能力的乳双歧杆菌和具有耐氧特性的嗜酸乳杆菌进行原生质体融合,其最佳条件为:50%的PEG6000,融合温度30℃,融合时间为7 min,CaCl2浓度为0.02 mol/L,MgCl2浓度为0.5 mol/L,在此条件下融合率可达7.6%。从中筛选出同时具有... 将具有草酸分解能力的乳双歧杆菌和具有耐氧特性的嗜酸乳杆菌进行原生质体融合,其最佳条件为:50%的PEG6000,融合温度30℃,融合时间为7 min,CaCl2浓度为0.02 mol/L,MgCl2浓度为0.5 mol/L,在此条件下融合率可达7.6%。从中筛选出同时具有耐氧特性和草酸分解能力的融合子,草酸分解率为13.4%。 展开更多
关键词 草酸 乳酸菌 原生质体融合 筛选 融合率
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合成唾液酸乳糖重组大肠杆菌的构建 被引量:4
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作者 靳文斌 张萧萧 +1 位作者 李玉 路福平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期201-206,共6页
唾液酸寡糖具有抗感染、提高免疫力、促进双歧杆菌增殖等功能,对其微生物合成方法的研究具有重要的理论和应用价值。克隆和表达来源于Campylobacter jejuni的N-乙酰葡萄糖胺异构酶基因(neuC)、乙酰神经氨酸合成酶基因(neuB)、CMP-乙酰... 唾液酸寡糖具有抗感染、提高免疫力、促进双歧杆菌增殖等功能,对其微生物合成方法的研究具有重要的理论和应用价值。克隆和表达来源于Campylobacter jejuni的N-乙酰葡萄糖胺异构酶基因(neuC)、乙酰神经氨酸合成酶基因(neuB)、CMP-乙酰神经氨酸合成酶基因(neuA)和来源于Nesseria meningitidis的唾液酸转移酶基因(nst),利用表达载体pSTV29,在大肠杆菌Escherichia coli JM109内构建合成唾液酸乳糖的代谢途径。在接种量2%、装液量50 mL/250 mL三角瓶、摇床转速180 r/min、温度34℃的条件下发酵30 h,并以10 g/L乳糖为底物,利用HPLC检测到唾液酸乳糖的合成量为2.45 g/L,为人乳唾液酸寡糖及其类似物的异体合成提供了新的思路。 展开更多
关键词 唾液酸乳糖 大肠杆菌 代谢工程
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大肠杆菌sdaA、sdaB,pgpB基因的敲除及其对磷脂酰丝氨酸合成的影响
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作者 佟新伟 杨泓喆 +1 位作者 李玉 路福平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期123-128,共6页
利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌sdaA、sdaB和pgpB基因,阻断大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成途径中的底物L-丝氨酸和磷酸乙醇酸的部分分解代谢,以达到提高磷脂酰丝氨酸在菌体内含量的目的。将出发菌株和重组菌株进行摇瓶发酵,发酵1 000 min后... 利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌sdaA、sdaB和pgpB基因,阻断大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成途径中的底物L-丝氨酸和磷酸乙醇酸的部分分解代谢,以达到提高磷脂酰丝氨酸在菌体内含量的目的。将出发菌株和重组菌株进行摇瓶发酵,发酵1 000 min后,采用高效液相色谱法分析磷脂酰丝氨酸的产量。试验结果表明sdaA、sdaB、pgpB基因敲除后,磷脂酰丝氨酸在菌体总磷脂中的含量提高了一倍多,说明通过基因工程手段改变大肠杆菌中磷脂酰丝氨酸合成的部分代谢途径,初步获得磷脂酰丝氨酸产量提高的菌株,具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌 基因敲除 磷脂酰丝氨酸 RED重组系统 高效液相色谱
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