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代谢工程改造大肠杆菌合成反式-4-羟基-L-脯氨酸 被引量:5
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作者 李强 韩亚昆 +4 位作者 蒋帅 张悦 吴鹤云 徐庆阳 谢希贤 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期202-207,共6页
通过比对筛选,从Micromonospora sp.CNB394中获得高活性的L-脯氨酸-4-羟基化酶,随后利用规律成簇的间隔短回文重复-associated protein 9基因编辑方法,通过强化L-脯氨酸合成途径和引入高活性的L-脯氨酸-4-羟基化酶,构建1株以葡萄糖为碳... 通过比对筛选,从Micromonospora sp.CNB394中获得高活性的L-脯氨酸-4-羟基化酶,随后利用规律成簇的间隔短回文重复-associated protein 9基因编辑方法,通过强化L-脯氨酸合成途径和引入高活性的L-脯氨酸-4-羟基化酶,构建1株以葡萄糖为碳源合成反式-4-羟基-L-脯氨酸的大肠杆菌基因工程菌HYP15。摇瓶发酵30 h,工程菌的反式-4-羟基-L-脯氨酸产量达到13.6 g/L。5 L发酵罐分批补料发酵40 h,反式-4-羟基-L-脯氨酸产量达到48.6 g/L,糖酸转化率和平均生产强度分别达到21.6%和1.22 g/(L h),具有良好的工业应用前景。 展开更多
关键词 L-脯氨酸-4-羟基化酶 反式-4-羟基-L-脯氨酸 大肠杆菌 间隔短回文重复-associated protein 9 发酵
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代谢工程优化大肠杆菌高效合成L-苯丙氨酸 被引量:5
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作者 门佳轩 熊博 +3 位作者 郝亚男 李旋 刘益宁 谢希贤 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第2期114-120,共7页
为获得1株稳定高产的L-苯丙氨酸工程菌株,利用规律间隔成簇短回文重复序列/Cas9技术,在大肠杆菌W3110中引入已解除反馈抑制的分支酸变位酶/预苯酸脱水酶PheA,随后利用不同强度的启动子对莽草酸途径中各反应酶进行调控,并通过摇瓶发酵确... 为获得1株稳定高产的L-苯丙氨酸工程菌株,利用规律间隔成簇短回文重复序列/Cas9技术,在大肠杆菌W3110中引入已解除反馈抑制的分支酸变位酶/预苯酸脱水酶PheA,随后利用不同强度的启动子对莽草酸途径中各反应酶进行调控,并通过摇瓶发酵确定了莽草酸途径各步反应酶的最适表达强度,最后通过增加前体物磷酸烯醇式丙酮酸供应,获得了1株性能最佳的L-苯丙氨酸工程菌株PHE12。利用该菌株进行摇瓶发酵24 h,L-苯丙氨酸产量达20.5 g/L。利用发酵罐分批补料发酵48 h后,L-苯丙氨酸产量达81.8 g/L,与目前文献报道的最高产量相比产量提高了12.2%,生产强度和糖酸转化率(葡萄糖计)分别为1.7 g/(L·h)和0.24 g/g,工业前景良好。 展开更多
关键词 L-苯丙氨酸 大肠杆菌 规律间隔成簇短回文重复序列/Cas9 发酵生产
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α-淀粉酶抑制剂生物合成途径和代谢流分析(英文) 被引量:2
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作者 张洪志 徐庆阳 +3 位作者 曹华杰 白芳 陈宁 白钢 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第4期118-124,共7页
为提高糖类的利用效率,加强糖类代谢向生成α-淀粉酶抑制剂的方向流动,提高α-淀粉酶抑制剂产量,对天蓝黄链霉菌合成α-淀粉酶抑制剂的代谢网络进行分析,找出影响α-淀粉酶抑制剂合成的代谢流量分配规律和关键节点,并且应用代谢流分析... 为提高糖类的利用效率,加强糖类代谢向生成α-淀粉酶抑制剂的方向流动,提高α-淀粉酶抑制剂产量,对天蓝黄链霉菌合成α-淀粉酶抑制剂的代谢网络进行分析,找出影响α-淀粉酶抑制剂合成的代谢流量分配规律和关键节点,并且应用代谢流分析的方法研究了谷氨酸钠对α-淀粉酶抑制剂发酵中后期胞内代谢流分布的影响。结果表明:在α-淀粉酶抑制剂分批发酵过程中,未流加谷氨酸钠时合成α-淀粉酶抑制剂的代谢流量为1.84;在发酵培养基中流加谷氨酸钠使其质量浓度维持在4.0 g/L后,α-淀粉酶抑制剂生物合成的代谢流增长至3.18。因此发酵过程中流加谷氨酸钠能够改变α-淀粉酶抑制剂生物合成途径的关键节点6-磷酸葡萄糖、7-磷酸景天庚酮糖及谷氨酸的代谢流分布,提高α-淀粉酶抑制剂生物合成途径的代谢流量。 展开更多
关键词 Α-淀粉酶抑制剂 代谢流分析 谷氨酸钠
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基于基因转录和代谢物分析的异亮氨酸生产菌谷氨酸棒状杆菌YILW的理性改造(英文) 被引量:2
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作者 温冰 麻杰 +3 位作者 李智祥 张成林 徐庆阳 陈宁 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第4期32-38,共7页
为获得异亮氨酸生产菌谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)YILW的理性改造策略,考察该菌株与出发菌株C.glutamicum ATCC 13032异亮氨酸合成途径中关键酶及代谢产物的差异。结果表明,C.glutamicum YILW丙酮酸羧化酶编码基因pyc... 为获得异亮氨酸生产菌谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)YILW的理性改造策略,考察该菌株与出发菌株C.glutamicum ATCC 13032异亮氨酸合成途径中关键酶及代谢产物的差异。结果表明,C.glutamicum YILW丙酮酸羧化酶编码基因pyc的下调表达使得其胞内草酰乙酸含量降低,过表达该基因显著增加胞内草酰乙酸含量及异亮氨酸产量(分别从1.32μmol/g(细胞干质量,下同)和5.18 g/L提高至3.32μmol/g和5.81 g/L),但副产物赖氨酸及胞内2-酮丁酸积累量提高。针对该问题采用强启动子替换手段过表达ilv BNC操纵子,使得其异亮氨酸产量提高至6.63 g/L。为进一步增加异亮氨酸合成,过表达输出载体编码基因brn E和brn F,其产量提高至7.31 g/L,较出发菌株C.glutamicum YILW提高41.1%,转化率提高40.0%。由此可见,在基因转录及代谢物分析结果指导下理性过表达pyc、ilv BNC操纵子及brn E和brn F能够显著提高异亮氨酸产量并降低副产物浓度。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 异亮氨酸 代谢库 草酰乙酸
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稀糖分罐发酵对L-色氨酸发酵的影响 被引量:6
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作者 刘子强 张震 +3 位作者 蔡萌萌 户红通 陈宁 徐庆阳 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第4期132-136,共5页
为了解决现有L-色氨酸发酵工艺中浓糖补料和中途排料造成的乙酸积累过多和资源浪费等问题,该研究提出一种稀糖分罐发酵的新工艺。利用30L发酵罐考察稀糖分罐发酵对L-色氨酸发酵的影响,在发酵中期(发酵时间为20h左右)将部分发酵液移至另... 为了解决现有L-色氨酸发酵工艺中浓糖补料和中途排料造成的乙酸积累过多和资源浪费等问题,该研究提出一种稀糖分罐发酵的新工艺。利用30L发酵罐考察稀糖分罐发酵对L-色氨酸发酵的影响,在发酵中期(发酵时间为20h左右)将部分发酵液移至另一灭好菌的空罐继续进行发酵,并将浓糖替换为稀糖补料。在稀糖分罐发酵工艺条件下,菌体生物量、L-色氨酸产量、糖酸转化率分别为44.31g/L、43.82g/L、20%,较普通工艺分别提高了5.4%、9.9%和12.36%;乙酸积累量较普通工艺下降65.5%。避免了料液的浪费,提高了L-色氨酸产量和糖酸转化率,降低了乙酸积累量,在工业生产方面有一定实用性和推广价值。 展开更多
关键词 稀糖分罐发酵 L-色氨酸 糖酸转化率 乙酸
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柠檬酸转运蛋白突变基因在L-亮氨酸发酵中的应用 被引量:1
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作者 马跃超 崔毅 +1 位作者 杜丽红 陈宁 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第4期148-154,共7页
该研究利用同源重组方法敲除L-亮氨酸生产菌株谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)ALDP的柠檬酸合酶基因glt A,并引入柠檬酸转运蛋白突变基因CP_103,获得一株能高效摄取柠檬酸的菌株。在此基础上,比较不同的柠檬酸添加方式对菌... 该研究利用同源重组方法敲除L-亮氨酸生产菌株谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)ALDP的柠檬酸合酶基因glt A,并引入柠檬酸转运蛋白突变基因CP_103,获得一株能高效摄取柠檬酸的菌株。在此基础上,比较不同的柠檬酸添加方式对菌株的OD_(600nm)值、L-亮氨酸产量和糖酸转化率的影响。结果表明,通过引入柠檬酸转运蛋白突变基因CP_103,显著提高了C. glutamicum ALDPΔglt A的柠檬酸摄取能力。当初始发酵液中的柠檬酸添加量为5 g/L,并在发酵过程中通过流加的方式维持柠檬酸含量在10~15 g/L范围内,较出发菌株C. glutamicum ALDP,C. glutamicum ALDPΔglt ACP_103的OD_(600nm)值轻微下降,但是L-亮氨酸产量达到最高,为(22.5±1.5)g/L、糖酸转化率为23.1%,分别提高23.0%和48.1%。 展开更多
关键词 柠檬酸转运蛋白 突变基因 柠檬酸 L-亮氨酸 谷氨酸棒杆菌
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