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人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立
被引量：
6
1
作者
杨静
曾昭伟
+3 位作者
王学谦
赵倩
孙辉
李会强
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期871-873,875,共4页
目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-...
目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)。对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好;灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0%。该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义。与化学发光法相比较,回归方程为:y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义。结论:建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测。
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关键词
癌胚抗原
乳腺癌
生物素-亲和素酶联免疫吸附法
生物素
亲和素
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职称材料
妊娠相关蛋白A的纯化及鉴定研究
被引量：
2
2
作者
曾昭伟
杨静
+2 位作者
王学谦
李会强
李向东
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第8期835-838,共4页
目的:对比G200凝胶过滤、反向亲和层析、DEAE离子交换等不同的方法纯化孕妇血清中的妊娠相关蛋白A(PAPP-A),为下一步的临床应用研究奠定基础。方法:把正常男性血清过G200凝胶过滤纯化后免疫家兔得到兔抗人抗体,连接溴化氰活化G25凝胶制...
目的:对比G200凝胶过滤、反向亲和层析、DEAE离子交换等不同的方法纯化孕妇血清中的妊娠相关蛋白A(PAPP-A),为下一步的临床应用研究奠定基础。方法:把正常男性血清过G200凝胶过滤纯化后免疫家兔得到兔抗人抗体,连接溴化氰活化G25凝胶制备反向免疫层析柱。收集足月孕妇血清,离心后依次应用G200凝胶过滤、反向亲和层析及离子交换层析柱纯化。用ELISA检测试剂盒检测各个洗脱峰的PAPP-A活性,SDS-PAGE检测纯化蛋白的纯度。结果:稀释兔抗人血清抗体至浓度为1∶16,双向扩散有明显沉淀线,可以用于制备抗体,蛋白A亲和层析洗脱pH3.0洗脱峰,G200凝胶过滤第一个洗脱峰,反向亲和层析的0.1 mol/LPBS洗脱峰,离子交换层析的0.45 mol/L NaCl洗脱峰中PAPP-A活性均较高。SDS-PAGE结果显示,孕妇血清用G200凝胶过滤处理后杂蛋白条带较多,反向亲和层析或者DEAE分别处理后同样存在杂蛋白条带,三种纯化方法结合应用杂蛋白条带明显减少,Western blot鉴定显示三种方法结合应用后纯化蛋白样品条带单一。结论:本研究用三种层析方式相结合的方法得到纯度较高的PAPP-A抗原,鉴定显示可以到达制备单克隆抗体(mAb)的要求,为mAb的制备以及酶联免疫试剂盒的建立奠定了基础,使PAPP-A在临床应用方面前景广阔。
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关键词
妊娠相关蛋白A
分子筛
反向亲和层析
离子交换
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职称材料
题名
人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立
被引量：
6
1
作者
杨静
曾昭伟
王学谦
赵倩
孙辉
李会强
机构
天津渤海职业技术学院生物工程系
天津
医科大学
天津
市
天津
医院
沃克(
天津
)
生物
科技有限公司
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期871-873,875,共4页
文摘
目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)。对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好;灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0%。该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义。与化学发光法相比较,回归方程为:y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义。结论:建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测。
关键词
癌胚抗原
乳腺癌
生物素-亲和素酶联免疫吸附法
生物素
亲和素
Keywords
CEA
breast carcinoma
BA-ELISA
biotin
avidin
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
妊娠相关蛋白A的纯化及鉴定研究
被引量：
2
2
作者
曾昭伟
杨静
王学谦
李会强
李向东
机构
天津
医科大学
天津渤海职业技术学院生物工程系
天津
市
天津
医院检验科
津医科大学检验
学院
免疫学教研室
天津
市王顶堤医院检验科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第8期835-838,共4页
基金
天津市科技计划项目(08ZCGYSF01800)
文摘
目的:对比G200凝胶过滤、反向亲和层析、DEAE离子交换等不同的方法纯化孕妇血清中的妊娠相关蛋白A(PAPP-A),为下一步的临床应用研究奠定基础。方法:把正常男性血清过G200凝胶过滤纯化后免疫家兔得到兔抗人抗体,连接溴化氰活化G25凝胶制备反向免疫层析柱。收集足月孕妇血清,离心后依次应用G200凝胶过滤、反向亲和层析及离子交换层析柱纯化。用ELISA检测试剂盒检测各个洗脱峰的PAPP-A活性,SDS-PAGE检测纯化蛋白的纯度。结果:稀释兔抗人血清抗体至浓度为1∶16,双向扩散有明显沉淀线,可以用于制备抗体,蛋白A亲和层析洗脱pH3.0洗脱峰,G200凝胶过滤第一个洗脱峰,反向亲和层析的0.1 mol/LPBS洗脱峰,离子交换层析的0.45 mol/L NaCl洗脱峰中PAPP-A活性均较高。SDS-PAGE结果显示,孕妇血清用G200凝胶过滤处理后杂蛋白条带较多,反向亲和层析或者DEAE分别处理后同样存在杂蛋白条带,三种纯化方法结合应用杂蛋白条带明显减少,Western blot鉴定显示三种方法结合应用后纯化蛋白样品条带单一。结论:本研究用三种层析方式相结合的方法得到纯度较高的PAPP-A抗原,鉴定显示可以到达制备单克隆抗体(mAb)的要求,为mAb的制备以及酶联免疫试剂盒的建立奠定了基础,使PAPP-A在临床应用方面前景广阔。
关键词
妊娠相关蛋白A
分子筛
反向亲和层析
离子交换
Keywords
pregnancy associated plasma protein A
molecular sieve
reverse affinity chromatography
ion exchange
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立
杨静
曾昭伟
王学谦
赵倩
孙辉
李会强
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
妊娠相关蛋白A的纯化及鉴定研究
曾昭伟
杨静
王学谦
李会强
李向东
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
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