RRP15过表达对核糖体生物发生和细胞增殖的影响 被引量：1

1

作者 印熙娣 陈瑾 +2 位作者 戈靖 董智雄 朱长军 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2019年第5期45-50,共6页

为了明确核糖体RNA加工蛋白15(RRP15)在肿瘤发生发展中的作用,通过构建稳定过表达RRP15的HeLa细胞株HeLa-Flag RRP15及其对照细胞株HeLa-Flag,利用细胞免疫荧光、蛋白免疫印迹等方法研究了RRP15过表达对核仁结构的影响,利用蔗糖密度梯... 为了明确核糖体RNA加工蛋白15(RRP15)在肿瘤发生发展中的作用,通过构建稳定过表达RRP15的HeLa细胞株HeLa-Flag RRP15及其对照细胞株HeLa-Flag,利用细胞免疫荧光、蛋白免疫印迹等方法研究了RRP15过表达对核仁结构的影响,利用蔗糖密度梯度离心法提取核糖体大小亚基前体,探究了RRP15过表达对核糖体生物发生的影响,利用MTT实验和蛋白免疫印迹检测了RRP15过表达对细胞生长增殖的影响.结果发现,RRP15过表达使细胞核仁数量增多,核仁蛋白表达量上调,核糖体大小亚基前体生物发生水平均有提高,细胞生长增殖速率加快,细胞周期相关蛋白的表达增加.由此认为,RRP15可能通过增加核仁数量和提高核糖体生物发生水平增强细胞的增殖能力,进而促进肿瘤的发生与发展. 展开更多

关键词 RRP15 核仁 核糖体生物发生 细胞增殖

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驱动蛋白分子KIF18A的结构与功能研究进展 被引量：1

2

作者 朱长军 周之春 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第6期1-8,共8页

KIF18A是驱动蛋白kinesin-8家族中的一员,在细胞内能够依靠水解ATP释放的能量,以微管为轨道向正极方向运动.同时,KIF18A定位在微管正极末端,可调控微管的动态不稳定性,发挥类似于微管解聚酶的活性.在有丝分裂过程中,KIF18A能够调控纺锤... KIF18A是驱动蛋白kinesin-8家族中的一员,在细胞内能够依靠水解ATP释放的能量,以微管为轨道向正极方向运动.同时,KIF18A定位在微管正极末端,可调控微管的动态不稳定性,发挥类似于微管解聚酶的活性.在有丝分裂过程中,KIF18A能够调控纺锤体微管动力学和染色体振幅,对有丝分裂期染色体及时完成整列、维持基因组稳定和顺利完成有丝分裂具有关键作用.本文对KIF18A蛋白的分子结构、胞内定位、细胞周期调控功能及其与肿瘤发生、发展的关系等方面进行了详细阐述. 展开更多

关键词 驱动蛋白 KIF18A 细胞有丝分裂 结构 功能 肿瘤发生

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核糖体蛋白RPL15多克隆抗体的制备与细胞内定位

3

作者 梁爽爽 冀美超 +3 位作者 胡晓晴 付成华 朱长军 董智雄 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第5期55-59,共5页

为了解核糖体大亚基蛋白RPL15在细胞中的定位和功能,设计并合成了RPL15蛋白的多肽,作用于抗原免疫兔子,使其产生特异性多克隆抗体,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光方法检测RPL15抗体的特异性.结果证实本研究成功制备并纯化了RPL15的多克隆抗... 为了解核糖体大亚基蛋白RPL15在细胞中的定位和功能,设计并合成了RPL15蛋白的多肽,作用于抗原免疫兔子,使其产生特异性多克隆抗体,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光方法检测RPL15抗体的特异性.结果证实本研究成功制备并纯化了RPL15的多克隆抗体,且该抗体可以特异性识别RPL15蛋白.免疫荧光实验表明RPL15定位于细胞质和细胞核中,主要定位于核仁并呈点状分布,且与UBF、FBL和C23存在部分共定位. 展开更多

关键词 RPL15 核糖体 多克隆抗体 免疫荧光 细胞内定位

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黏着斑蛋白supervillin对胃癌细胞侵袭的促进作用

4

作者 冀美超 姜虹羽 +4 位作者 于东渤 孙涛 鲍鹏 董智雄 朱长军 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第3期20-24,共5页

为了研究黏着斑蛋白supervillin(SVIL)在胃癌细胞(SGC)侵袭转移过程中所发挥的作用,利用脂质体转染的方法,将人源的p QCXIP-supervillin(pQCXIP-SVIL)质粒和pEGFP-C1质粒分别转入SGC细胞中,用G418或嘌呤霉素筛选得到稳定表达的GFP-SVIL(... 为了研究黏着斑蛋白supervillin(SVIL)在胃癌细胞(SGC)侵袭转移过程中所发挥的作用,利用脂质体转染的方法,将人源的p QCXIP-supervillin(pQCXIP-SVIL)质粒和pEGFP-C1质粒分别转入SGC细胞中,用G418或嘌呤霉素筛选得到稳定表达的GFP-SVIL(SGC-GFP-SVIL)和GFP(SGC-GFP-C1)细胞株,然后应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)对这些细胞株进行鉴定,最后应用细胞侵袭实验对SGC、SGC-GFP-C1及SGC-GFP-SVIL细胞的侵袭能力进行比较,并对细胞SVIL、DNA以及皮层肌动蛋白进行免疫荧光染色.结果证实本研究成功构建了SGC-GFP-SVIL和SGC-GFP-C1细胞株.同SGC和SGC-GFP-C1细胞相比,过表达GFP-SVIL蛋白分子的SGC-GFP-SVIL细胞的侵袭能力更强.GFP-SVIL与皮层肌动蛋白在细胞中存在共定位,皮层肌动蛋白是侵袭性伪足的标志蛋白,与SGC及SGC-GFP-C1细胞相比,SGC-GFP-SVIL细胞中侵袭性伪足数量明显增加.根据这些结果认为,SVIL可能通过调节皮层肌动蛋白的表达和影响该蛋白分子在侵袭性伪足上的定位,从而影响胃癌细胞的侵袭能力. 展开更多

关键词 黏着斑蛋白 皮层肌动蛋白 胃癌细胞 细胞侵袭

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核仁蛋白RRP15在细胞有丝分裂期的表达与定位

5

作者 陈超敏 杨佳 +1 位作者 董智雄 朱长军 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2018年第4期38-42,共5页

为了明确核糖体RNA加工蛋白15(RRP15)在细胞周期不同时期的表达情况与亚细胞定位,以稳定表达GFP-RRP15的He La细胞为实验材料,利用细胞同步化以及蛋白免疫印迹方法研究RRP15在细胞周期不同时期的表达情况,利用细胞免疫荧光染色以及活细... 为了明确核糖体RNA加工蛋白15(RRP15)在细胞周期不同时期的表达情况与亚细胞定位,以稳定表达GFP-RRP15的He La细胞为实验材料,利用细胞同步化以及蛋白免疫印迹方法研究RRP15在细胞周期不同时期的表达情况,利用细胞免疫荧光染色以及活细胞成像检测RRP15在有丝分裂期的亚细胞定位,利用染色体提取探究RRP15与有丝分裂期细胞染色体的关系.结果发现,RRP15在整个细胞周期中均有稳定表达,且在G1期表达微量上调;在有丝分裂期,RRP15定位于染色体外周和中小体,始终伴随染色体,且染色体外周定位不依赖于DNA. 展开更多

关键词 RRP15 细胞周期 有丝分裂 染色体

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癌基因C-jun及其缺失突变体过表达细胞株的构建与鉴定

6

作者 余斯琦 朱长军 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第2期39-43,共5页

为了探究转录因子C-jun在细胞中的生理功能,以真核细胞表达质粒pFlag-c-jun为模板,首先设计了C-jun DNA结合功能域缺失突变体的点突变引物序列,构建Flag-C-jun DNA结合功能域缺失突变体质粒pFlag-c-junmut.通过细胞转染、药物筛选等方法... 为了探究转录因子C-jun在细胞中的生理功能,以真核细胞表达质粒pFlag-c-jun为模板,首先设计了C-jun DNA结合功能域缺失突变体的点突变引物序列,构建Flag-C-jun DNA结合功能域缺失突变体质粒pFlag-c-junmut.通过细胞转染、药物筛选等方法,获得Flag-C-jun和Flag-C-junmut稳定表达的HelaS细胞株,用蛋白印记迹交和细胞免疫荧光染色方法对细胞株进行验证.鉴定结果表明,本研究成功构建了Flag-C-jun和Flag-C-junmut稳定表达的细胞株,且表达均在细胞核内. 展开更多

关键词 转录因子 C-JUN 缺失突变体 细胞株 稳定表达

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慢病毒介导KIF4A稳定诱导敲降MCF7细胞株的建立

7

作者 闫鲁霞 程蓓蓓 +1 位作者 周之春 朱长军 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第3期55-59,67,共6页

为了构建驱动蛋白KIF4A基因稳定诱导敲降细胞株Tet-shKIF4A/MCF7,应用Tet诱导基因敲降慢病毒载体系统,将慢病毒载体质粒Tet-plko-puro-shKIF4A与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染至293T细胞中,产生慢病毒颗粒.使用慢病毒感染MCF7细胞,用嘌... 为了构建驱动蛋白KIF4A基因稳定诱导敲降细胞株Tet-shKIF4A/MCF7,应用Tet诱导基因敲降慢病毒载体系统,将慢病毒载体质粒Tet-plko-puro-shKIF4A与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染至293T细胞中,产生慢病毒颗粒.使用慢病毒感染MCF7细胞,用嘌呤霉素筛选出稳定诱导敲降KIF4A细胞株Tet-shKIF4A/MCF7.通过免疫印迹方法检测Tet-shKIF4A/MCF7细胞中KIF4A蛋白的表达水平,对诱导敲降KIF4A的四环素药物的浓度和敲降时间进行优化.应用免疫荧光染色的方法检测对照细胞和Tet-shKIF4A/MCF7细胞内的KIF4A的表达以及有丝分裂细胞形态的变化.结果表明,本研究成功构建了KIF4A基因稳定诱导敲降细胞株Tet-shKIF4A/MCF7,诱导敲降KIF4A的四环素药物最佳质量浓度为50μg/mL,最佳诱导时间为36 h.本研究为深入探究KIF4A在细胞生命活动中的功能以及细胞周期的分子作用机制提供了重要实验材料. 展开更多

关键词 慢病毒 KIF4A 四环素诱导敲降系统 MCF7细胞株

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组织蛋白表达水平检测方法的比较分析 被引量：1

8

作者 鲍鹏 余斯琦 +3 位作者 苏春玉 于东渤 朱长军 董智雄 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2019年第1期46-50,共5页

为了得到一种能够准确、快速检测组织蛋白表达水平的方法,收集了12例结肠癌病人的癌组织及癌旁组织,以RRP15 mRNA的表达水平作为参照,比较免疫组织化学染色法和免疫荧光染色法在检测组织蛋白表达水平方面的优劣.免疫组织荧光染色结果显... 为了得到一种能够准确、快速检测组织蛋白表达水平的方法,收集了12例结肠癌病人的癌组织及癌旁组织,以RRP15 mRNA的表达水平作为参照,比较免疫组织化学染色法和免疫荧光染色法在检测组织蛋白表达水平方面的优劣.免疫组织荧光染色结果显示,12例患者中有8例患者肿瘤组织的RRP15表达为阳性,4例为阴性,其结果与Real-time PCR定量结果高度一致.免疫组织化学染色结果显示,12例患者中有9例患者肿瘤组织的RRP15表达为阳性,其余3例为阴性,其中6号和11号免疫组织化学检测为阴性,而Real-time PCR定量和免疫组织荧光染色结果均为阳性,即免疫组化检测结果与Real-time PCR定量结果的一致性较差.因此认为,免疫荧光染色法是检测组织中蛋白表达水平的首选方法,免疫组织化学染色法可作为一种辅助方法. 展开更多

关键词 蛋白表达水平 检测 石蜡切片 免疫荧光染色 免疫组织化学染色

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驱动蛋白Kif22多克隆抗体的制备、纯化及免疫特异性检测

9

作者 姜虹羽 鲍鹏 +3 位作者 冀美超 付成华 董智雄 朱长军 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第2期25-29,共5页

为深入研究驱动蛋白分子Kif22在细胞内的功能,应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒p HIS8-Kif22C156和p GEXKG-Kif22C156,并在细菌BL-21中诱导表达HIS8-Kif22C156和GST-Kif22C156.用Ni-NTA琼脂糖结合HIS8-Kif22C156蛋白进行蛋白纯化,... 为深入研究驱动蛋白分子Kif22在细胞内的功能,应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒p HIS8-Kif22C156和p GEXKG-Kif22C156,并在细菌BL-21中诱导表达HIS8-Kif22C156和GST-Kif22C156.用Ni-NTA琼脂糖结合HIS8-Kif22C156蛋白进行蛋白纯化,然后免疫新西兰大白兔制备特异性多克隆抗Kif22抗体;用谷胱甘肽琼脂糖结合GSTKif22C156蛋白进行交联,纯化多克隆兔抗Kif22抗体.蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光染色实验证明纯化的抗体可以特异性识别细胞中的Kif22蛋白,表明Kif22多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度. 展开更多

关键词 驱动蛋白 Kif22 多克隆抗体 有丝分裂

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CDK1磷酸化修饰对驱动蛋白Kif18A的ATP酶活性的影响

10

作者 苏春玉 周之春 朱长军 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第3期12-17,共6页

为了探究真核细胞中蛋白激酶CDK1的磷酸化修饰对驱动蛋白分子Kif18A的ATP酶活性的影响,利用昆虫杆状病毒表达系统,在体外表达并纯化Kif18A模拟磷酸化(EE)和非磷酸化(AA)的突变体蛋白(Kif18A-EE,Kif18A-AA).首先构建驱动蛋白Kif18A的杆... 为了探究真核细胞中蛋白激酶CDK1的磷酸化修饰对驱动蛋白分子Kif18A的ATP酶活性的影响,利用昆虫杆状病毒表达系统,在体外表达并纯化Kif18A模拟磷酸化(EE)和非磷酸化(AA)的突变体蛋白(Kif18A-EE,Kif18A-AA).首先构建驱动蛋白Kif18A的杆状病毒表达载体质粒pFast-Bac-FLAG-Kif18A-AA或EE,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选得到阳性克隆.随后提取杆状病毒基因组,转染昆虫细胞SF9后得到能够表达FLAG-Kif18A突变体蛋白的杆状病毒.扩增病毒后,对病毒感染SF9细胞表达目的蛋白的条件进行优化,最终通过蛋白纯化得到有活性的Kif18A突变体蛋白,并在体外检测纯化蛋白的ATP酶活性.结果显示,Kif18A-EE蛋白的ATP酶活性低于Kif18A-AA蛋白.这一结果表明,CDK1的磷酸化修饰能够降低驱动蛋白Kif18A的ATP酶活性. 展开更多

关键词 CDK1 磷酸化修饰 驱动蛋白 Kif18A 杆状病毒 ATP酶活性

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KIF4A尾部结构域与不同结构DNA的相互作用

11

作者 张壮壮 闫鲁霞 +1 位作者 程蓓蓓 朱长军 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2021年第3期29-33,共5页

在有丝分裂期的细胞中,染色体驱动蛋白KIF4A的染色体定位对细胞分裂进程影响显著,KIF4A的羧基端尾部是参与调控其染色体定位的主要结构.为了探究KIF4A结合DNA的特性,利用细菌表达KIF4A尾部功能域蛋白KIF4A-C278,并应用纯化后的蛋白分别... 在有丝分裂期的细胞中,染色体驱动蛋白KIF4A的染色体定位对细胞分裂进程影响显著,KIF4A的羧基端尾部是参与调控其染色体定位的主要结构.为了探究KIF4A结合DNA的特性,利用细菌表达KIF4A尾部功能域蛋白KIF4A-C278,并应用纯化后的蛋白分别与线性双螺旋DNA和超螺旋DNA结合.实验结果显示,KIF4A-C278蛋白不与线性双螺旋质粒DNA结合,但可与高级结构的超螺旋质粒DNA结合.说明KIF4A羧基端尾部功能域会识别高级结构的DNA并与其相互作用.这预示着在有丝分裂初期染色质趋向于凝集成染色体时,DNA开始形成高级结构,KIF4A可能会借助于这一功能启动染色体定位. 展开更多

关键词 染色体驱动蛋白 KIF4A C-末端尾部结构域 DNA结合

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